大鼠小肠平滑肌Word下载.docx
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大鼠。
四、实验步骤
1.标本制备:
十二指肠向下取20~30cm的肠段,除去肠系膜及周围脂肪组织之后,用台氏液冲洗干净,保存于盛有室温台氏液的培养皿中备用;
2.固定:
实验取2~3cm的肠段,用棉线结扎两端肠段的对角(注意应避免封闭肠管,保持肠管管腔能与溶液相通)。
将此肠段一端通过铁勾固定在灌流槽的内槽底部(肠段与铁勾间的间隙应比较小,以免肠管摆动),内槽中的台氏液以刚能淹没肠管为宜。
开启供氧装置供给标本氧气,以保持平滑肌的生理机能。
另一端则通过棉线连接机械-电换能器的悬梁臂上,标本与换能器连线保持垂直,且松紧度适当,不要与灌流槽内壁接触;
灌流槽分为内。
实验装置:
如图3.13.
槽和外槽。
内槽为浸浴实验标本用内槽底部有一个(槽内盛台氏液),开口,排放液体之用。
另外内槽壁还附有一个铁勾,用于固定小肠平滑肌,与铁勾伴行的还有一个连接供氧装置,用于供给肠管活动所需要的氧气。
外槽的上、下两端有两个开口,其下端开口连接恒温水浴的出水口,上端开口连接恒温水浴的进水口,开启恒温水浴的循环按实验设备架设示意图3.1图
钮后,恒温水浴内的水会自动循环,间接加热灌流槽内槽的液体,使内槽液体温度保持在37~38℃;
4.离体小肠平滑肌的正常收缩曲线:
观察曲线的节律、幅度。
收缩曲线的基线升高,表示小肠平滑肌的紧张性升高,反之则下降;
5.肾上腺素的作用:
在内槽台氏液中加入1~2滴1︰10000肾上腺素;
6.乙酰胆碱的作用:
加入1~2滴1︰10000乙酰胆碱;
7.阿托品的作用:
加入1︰10000阿托品1~2滴,2分钟后再加1︰10000乙酰胆碱1~2滴,并与步骤6进行比较;
8.氯化钙的作用:
1ê
Cl21~2滴;
9.环境pH值变化的影响:
在内槽中加入HCl1~2滴,显效后再加入NaOH液1~2滴;
10.温度的影响:
将内槽换成25℃的台氏液,同时关闭恒温加热装置,使内槽台氏液
温度逐渐降至25℃,记录平滑肌收缩情况。
同法加入45℃台氏液并记录曲线变化,
同时观察肠段紧张度。
五、实验结果
1.正常收缩曲线:
小肠平滑肌正常收缩曲线图3.2
3.2,平滑肌收缩频率比较稳定,但是收缩幅度有节律性变化。
如图
滴加肾上腺素2.
滴加肾上腺素后的小肠平滑肌收缩曲线3.3图
如图3.3,滴加2滴肾上腺素后,张力下降至原来的60%,收缩频率、幅度也都下降。
3.滴加乙酰胆碱
3.4滴加乙酰胆碱后的小肠平滑肌收缩曲线图
滴乙酰胆碱后,小肠平滑肌的张力立即急剧升高,超出了1由图3.4可见,滴加
避免长时间刺激引我们立即进行换液冲洗,我们预先设置的量程。
在看到明显效果后,起平滑肌的疲劳。
滴加阿托品4.
图3.5滴加阿托品及乙酰胆碱后的小肠平滑肌收缩曲线
由图3.5可见,滴加阿托品后,平滑肌收缩没有明显改变,之后立即滴加乙酰胆碱,也不会引起上一步中的剧烈变化。
再次验证了阿托品对乙酰胆碱的阻断作用。
此时因为棉线与装置发生粘连,测得的曲线张力基值较低,波动幅度减小,只是测量问题,标本自身没有任何变化。
5.滴加氯化钙
3.6滴加氯化钙后的小肠平滑肌收缩曲线图
,滴加氯化钙后,收缩的幅度略微增大,张力则没有明显变化。
而且有效3.6如图的时间比较短。
pH
改变6.
)可时,小肠平滑肌没有明显变化。
但是由(b(a)可见,降低环境pH3.7由图pH,则使平滑肌收缩基本停止,张力也几乎消失。
再次降低见,在原基础上升高pH后,收缩幅度、张力逐渐恢复。
)(a
)(b
b)滴加氢氧化钠后再滴加盐酸后的小肠平滑肌收缩曲线。
(a)滴加盐酸(图3.7改变pH
改变温度7.
)(a
℃45)b℃(25)a(改变温度后的小肠平滑肌收缩曲线。
3.8图
因为我们改变温度时采取的方法时内外液全部换掉,所以耗费时间较长,不易在同一张图内与37℃时的曲线相对比,因此只做出了改变温度后的收缩曲线。
尽管如此,已经可以明显看到实验结果。
由图3.8(a)可见,降低温度至25℃后,平滑肌的张力涨至原来的约2倍,收缩幅度无明显变化,收缩频率降至15次/分,约为37℃时的一半。
而当温度为45℃时,由图3.8(b)可见,最显著的变化时收缩频率上升至89次/分,为37℃时的3倍,张力变化不大,但是收缩幅度降至原来的1/3。
六、结论
小肠平滑肌在离体后仍能保持一定的张力,并且可以进行节律性收缩。
这种活动可被肾上腺素所抑制,被乙酰胆碱加强。
而阿托品做为乙酰胆碱的受体阻断剂,可以消除乙酰胆碱的作用。
环境中添加钙离子后,有助于平滑肌的收缩。
平滑肌收缩需要相对稳定的环境。
降低、升高pH均可以抑制收缩。
降低温度会使张力升高、收缩幅度增大、节律变缓,而升高温度则会使平滑肌低张力、高频、低幅收缩。
讨论七、
1.小肠平滑肌一般生理特性在实验中的体现:
(1)肌肉组织共性:
兴奋性、传导性和收缩性:
离体小肠平滑肌在受到化学刺激时,兴奋传导至壁内神经丛,并发生收缩。
(2)平滑肌特性:
兴奋性较低(实验未进行电刺激,所以这一点没有验证)
富有伸展性:
实验小肠可以径向扩大和纵向伸长
静息紧张性:
消化道平滑肌处于微弱的收缩状态,使小肠保持一定的形状。
刺激的敏感性:
小肠对实验采用的不同化学刺激作出不同程度的反应。
自动节律性:
在没有刺激的状态下,小肠保持一定频率和幅度的蠕动。
2.实验整体分析:
实验参数:
基线:
即平时的张力水平,反应了小肠的紧张性
保持消化道内一定压力和小肠形状,肌张力与粗细肌丝相互作用有关,因此与钙离子水平有关。
并受到神经、体液调节。
频率:
收缩频率
细ICC收缩频率受消化道慢波频率控制,慢波起源于小肠纵形肌和环形肌之间的
胞,其产生离子机制可能与细胞膜上生电性钠泵有关。
幅度:
收缩的强弱
平滑肌的收缩通常在动作电位之后产生,慢波上负载的动作电位越多,收缩就越强。
同时,肌肉收缩需要钙离子作为欧联因子来启动兴奋-收缩过程,钙离子浓度会影响收缩强弱,各种理化因子常通过影响钙通道的开关影响肌肉收缩。
注:
自动节律性表现在小肠自主收缩和舒张上,包括了频率、幅度等因素。
(1)~1:
平衡阶段
现象:
刚取出的小肠因为受到各种刺激,蠕动较紊乱,所以先在恒温台氏液中放置一段时间,使小肠蠕动趋于平稳。
正常情况下,离体小肠由于其自律性,发生自主蠕动,蠕动有一定稳定的频率和幅度。
蠕动较规律但其规律性比心脏相差很多。
分析:
离体小肠在壁内神经丛的支配下发生自主蠕动。
小肠在摘取过程中受到损伤和刺激,需要一定时间稳定下来;
由于其各自的生理功能决定,小肠的自律性要求本身就比心脏低。
(2)1~2:
滴加肾上腺素及之后的更换溶液
滴加肾上腺素后曲线明显下降,更换溶液后曲线逐渐恢复至平衡时的水平。
每次更换溶液对于小肠也是一次刺激,而且更换溶液的过程中浮力会有明显改变,所以每次更换溶液可以看到一个明显的波峰。
总体:
张力下降,收缩频率、幅度下降
+外流增多,膜发生超极化,兴奋性降低;
抑制性受体,使K分析:
肾上腺素可以激活α它还激活β受体,使cAMP升高,使肌膜和肌质网上的钙泵活动加强,使细胞内液钙离子浓度下降,因而收缩力下降。
或通过使钾离子、钙离子外流,使膜发生超极化,造成肌肉舒张。
(3)2~3:
滴加乙酰胆碱及之后的更换溶液
滴加乙酰胆碱后曲线迅速上升,对比可以看出小肠对乙酰胆碱的敏感对较肾上腺素要高,也许和它们的浓度及受体有关。
之后更换溶液多次,张力先是下降到正常水平以下,平衡了一段时间后才缓慢恢复。
中途有一段幅度和频率都较小、但是张力较大的区域,是因为实验过程中棉线粘连在仪器上导致。
张力升高
2+一类为电位敏感性CaM分析:
乙酰胆碱可与肌膜上的受体结合,使得两类通道开放:
2+专用通道。
前一类通道对乙酰胆碱敏感,小剂量专用通道,另一类为特异性受体活化Ca即引起开放;
后一类通道对乙酰胆碱相对不敏感,只有大剂量乙酰胆碱才会引起开放。
这两2+浓度增高,进而激活肌纤蛋白-肌凝蛋白-ATP系统,使平滑肌Ca类通道开放都使得肌浆中收缩,肌张力增加。
之后更换溶液后张力降至正常水平以下,也许因为乙酰胆碱之前的刺激过于强烈(甚至超出了量程),小肠剧烈运动受到一定程度的损伤,所以张力有所下降。
(4)3~4:
滴加阿托品及之后滴加乙酰胆碱及之后的更换溶液
滴加阿托品后曲线没有明显变化,张力稍有降低。
之后加入乙酰胆碱,张力降低,幅度减小。
更换溶液之后仍然维持在正常水平。
阿托品是乙酰胆碱受体抑制剂,其本身单独而言对平滑肌收缩并无影响。
受到阿托品抑制后,小肠对乙酰胆碱刺激应该无反应,但由于张力换能器的棉线与装置发生粘连,影响了实验结果。
张力有稍微降低,可能是因为阿托品阻断了乙酰胆碱受体,导致小肠本身的乙酰胆碱通路也被阻断,所以蠕动受到轻微的抑制。
(5)4~5:
滴加氯化钙及之后的更换溶液
滴加氯化钙后张力稍微增加,但远远不如乙酰胆碱的效果明显。
三次更换溶液时溶液更换后小肠仍然很快恢复平稳,所以看起来波峰明显高于前几次更换溶液。
动作比较快,
看起来更换溶液的速度对小肠恢复平稳影响不大。
张力无明显变化,幅度增大
分
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