基因工程及其应用(工具介绍非常详细)PPT课件下载推荐.ppt
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步骤有哪些?
普通棉花普通棉花(无抗虫特性无抗虫特性)苏云金芽孢杆菌苏云金芽孢杆菌苏云金芽孢杆菌苏云金芽孢杆菌提取提取提取提取抗虫基因抗虫基因抗虫基因抗虫基因导入导入导入导入棉花细胞棉花细胞(含含抗虫基因抗虫基因)抗虫棉花抗虫棉花(有抗虫特性有抗虫特性)与运载体与运载体与运载体与运载体DNADNA拼接拼接拼接拼接培育转基因大肠杆菌的关键步骤:
培育转基因大肠杆菌的关键步骤:
1.ONE1.ONE抗虫基因抗虫基因从从苏云金苏云金芽孢杆菌芽孢杆菌内内提取提取出出来来2.TWO2.TWO抗虫抗虫基因基因与运载体与运载体DNADNA连接连接3.THREE3.THREE抗虫基因抗虫基因导导入入受体受体(棉棉花花)细胞细胞基因的基因的“剪刀剪刀”基因的基因的“针线针线”基因的运载体基因的运载体二、基因操作的工具二、基因操作的工具v1.1.基因的基因的剪刀剪刀11)名称:
限制性核酸内切酶)名称:
限制性核酸内切酶(限制酶限制酶)本质:
蛋白质本质:
蛋白质22)分布:
主要在)分布:
主要在微生物微生物体内体内33)切割对象:
磷酸二酯键)切割对象:
磷酸二酯键44)特点:
)特点:
一种一种限制酶限制酶只能识别只能识别一种一种特定的特定的核苷酸序列核苷酸序列,并且能在,并且能在特定特定的切点的切点上切割上切割DNADNA分子。
分子。
专一性专一性限制性内切酶(EcoR)作用过程EcoRIEcoRI限制酶识别限制酶识别GAATTCGAATTC的序列后,并在的序列后,并在GG和和AA之间将之间将这段序列切开,那将会发生什么样的变化?
这段序列切开,那将会发生什么样的变化?
黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端EcoRIEcoRI限制酶的切割限制酶的切割被限制酶切开的被限制酶切开的DNA两条两条单链的切口,带有几个单链的切口,带有几个伸出的伸出的核苷酸核苷酸,他们之间正好互补配他们之间正好互补配对,这样的切口叫对,这样的切口叫黏性末端黏性末端。
结果:
切开结果:
切开了了11个切口个切口,形成了形成了22个黏个黏性末端性末端剪切的对象是剪切的对象是磷酸二酯键磷酸二酯键G1234512345A3,5-磷磷酸二酯酸二酯键键3端5端3端5端磷酸二酯键磷酸二酯键10仔细观察各限制酶仔细观察各限制酶识别的特定序列,识别的特定序列,找出切割后各自的找出切割后各自的黏性末端黏性末端限制酶的识别序列限制酶的识别序列CTTCATGAATTCCCTAAGAAGTACTTAAGGGATTGGCATCTTAAAATTCCGTAG练习使用练习使用EcoRI剪切目的基因剪切目的基因CTTCATGAATTCCCTAAGAAGTACTTAAGGGATTGGCATCTTAAAATTCCGTAG目的基因目的基因黏性末端黏性末端结果:
切开了结果:
切开了?
个切口?
个切口,形成了,形成了?
个黏性末端?
个黏性末端被被同一种限制酶同一种限制酶切断的几个切断的几个DNADNA是否具是否具有相同的黏性末端?
有相同的黏性末端?
思考思考:
是是2.2.基因的基因的针线针线11)名称:
)名称:
DNADNA连接酶连接酶本质:
蛋白质22)作用对象:
连接)作用对象:
连接DNADNA片段片段间的磷酸二酯键间的磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键DNA连接酶的作用过程点击播放点击播放两两DNADNA片段要具有片段要具有互补互补的黏性末端的黏性末端才能拼起来才能拼起来DNADNA连接酶的缝合作用连接酶的缝合作用可把黏性末端之间的可把黏性末端之间的缝隙缝隙“缝合缝合”起来起来,注意:
注意:
DNADNA连接酶连接双链连接酶连接双链DNADNA片段中互补的黏性末端缺口片段中互补的黏性末端缺口AAAATTTTGGCCAAAATTTTAAAATTTTDNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶的作用聚合酶的作用DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?
不是,连接的对象不同基因的针线:
基因的针线:
DNA连接酶连接酶GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGGCTTAAAATTCGGCTTAAAATTCGGCTTAAAATTCG用同种限制酶切割DNA连接酶连接连接酶连接的是的是DNA骨架上骨架上的缺口,的缺口,不是不是碱碱基间的氢键基间的氢键使用使用DNA连接酶制作重组连接酶制作重组DNA分子分子甲片段甲片段CTTCATGAATTCCCTAAGAAGTACTTAAGGGATT乙片段乙片段GGCATCTTAAAATTCCGTAG重组重组DNA分子分子GGCATCTTAAAATTCCGTAGDNADNA连接酶的作用是:
连接酶的作用是:
A.A.子链和母链之间形成氢键子链和母链之间形成氢键B.B.黏性末端之间形成氢键黏性末端之间形成氢键C.C.两个两个DNADNA末端间的缝隙连接(磷酸二酯键)末端间的缝隙连接(磷酸二酯键)D.AD.A、BB、CC都对都对C下列是由限制酶切割形成的下列是由限制酶切割形成的DNADNA片段,能用片段,能用相应相应DNADNA连接酶将它们恢复连接的组合是连接酶将它们恢复连接的组合是CTGCAGGCTTAAGACGTCAATTCGA.A.;
B.B.;
C.C.;
D.D.以上都不对以上都不对A据右图所示,有关工具酶功能的叙述不正确的是(据右图所示,有关工具酶功能的叙述不正确的是()A.限制性内切酶可以切断限制性内切酶可以切断a处,处,DNA连接酶可以连接连接酶可以连接a处处B.DNA聚合酶可以连接聚合酶可以连接a处处C.解旋酶可以使解旋酶可以使b处解开处解开D.连接连接C处的酶可以为处的酶可以为DNA连接酶连接酶D3.3.基因的运输工具基因的运输工具11)名称:
运载体运载体本质:
本质:
DNADNAv22)常用种类:
)常用种类:
vaa.质粒质粒(最常用最常用)(小型环状小型环状DNADNA)vbb.噬菌体噬菌体或或某些动植物某些动植物病毒病毒(DNA(DNA病病毒)毒)质粒存质粒存在于许多在于许多细细菌和酵母菌菌和酵母菌等生物中等生物中,是是拟核或细胞拟核或细胞核外核外能够能够自自主复制主复制的很的很小的环状小的环状DNADNA分子分子.运载体需要的条件:
运载体需要的条件:
有有11多个限制酶切点多个限制酶切点(22)导入基因能在受体细胞中复制、表达)导入基因能在受体细胞中复制、表达(33)有某些标记基因,便于筛选)有某些标记基因,便于筛选(22)假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录,转)假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录,转基因生物能有预想的效果吗?
基因生物能有预想的效果吗?
运载体如果没有切割位点将会怎样?
(33)目的基因有没有进入受体细胞,如何去发现?
目的基因有没有进入受体细胞,如何去发现?
不属于质粒被选为基因运载体的理由是不属于质粒被选为基因运载体的理由是A、能复制能复制()B、有、有多个限制酶切点多个限制酶切点C、具有标记基因具有标记基因D、它是环状它是环状DNAD下列说法是否正确?
下列说法是否正确?
基基因因工工程程中中用用到到了了3大大工工具具酶酶:
限限制制酶酶、DNA连接酶、运载体连接酶、运载体错错三、基因工程的三、基因工程的“四步曲四步曲”提取提取目的基因目的基因11目的基因与目的基因与运载体结合运载体结合22将目的基因将目的基因导入导入受体细胞受体细胞33目的基因的目的基因的检测检测和和表达表达44GAATTCGAATTCCTTAAGCTTAAGTAAATTCGGCTA用识别用识别GAATTC的的限制酶切割限制酶切割用用相同的相同的限制酶限制酶重组质粒重组质粒(重组重组DNA)+DNA连接酶连接酶AATTCGGCTTAA目的基因目的基因AATTCGGCTTAA切开的质粒切开的质粒质粒质粒基因工程的基本过程基因工程的基本过程重组重组DNADNA分子导入受体细胞分子导入受体细胞能接纳重组质粒的能接纳重组质粒的活细胞称为活细胞称为受体受体细胞细胞导入导入扩增扩增受体细胞受体细胞常用的常用的受体受体细胞细胞是是?
导入的方法导入的方法?
目的基因的筛选和表达目的基因的筛选和表达为什么要筛选?
为什么要筛选?
如何筛选?
筛选的结果?
如何判断目的基因真正起作用?
导入导入接种培养接种培养接种培养接种培养接种接种培养培养含有四环素的含有四环素的完全培养基完全培养基完全培养基完全培养基大大肠肠杆杆菌菌不不含含抗抗四四环环素素基基因因证明:
证明:
不存活不存活含有四环素的含有四环素的完全培养基完全培养基证明:
大肠杆菌大肠杆菌的受体细胞含的受体细胞含有目的基因有目的基因四环素四环素抗性基因抗性基因四环素四环素抗性基因抗性基因存存活活如何把导入了目的基因的受体细胞筛选出来?
如何把导入了目的基因的受体细胞筛选出来?
存活存活无表达产物无表达产物无表达产物无表达产物有表达产物有表达产物无表达产物无表达产物12基因工程的操作基因工程的操作工具工具1.基因的剪刀基因的剪刀限制性内切酶限制性内切酶2.基因的针线基因的针线连接酶连接酶3.基因的运输工具基因的运输工具运载体运载体基因工程的操作基因工程的操作步骤步骤基因工程的原理基因工程的原理基因重组基因重组2.目的基因与运载体目的基因与运载体结合结合1.目的基因的目的基因的提取提取3.目的基因目的基因导入导入受体细胞受体细胞4.目的基因的目的基因的检测检测与与表达表达一、基因工程与作物育种一、基因工程与作物育种转黄瓜抗青枯病基因的甜椒转黄瓜抗青枯病基因的甜椒转鱼抗寒基转鱼抗寒基因的番茄因的番茄获得高产、稳产和具有获得高产、稳产和具有优良品质的农作物和具优良品质的农作物和具有抗逆性的作物新品种。
有抗逆性的作物新品种。
生长快、肉质好的转基因生长快、肉质好的转基因鱼鱼(中国中国)乳汁中含有人生长激素的乳汁中含有人生长激素的转基因牛转基因牛(阿根廷阿根廷)导入贮藏蛋白基因的超级羊导入贮藏蛋白基因的超级羊22、基因工程与药物研制、基因工程与药物研制我国生产的部分基因我国生产的部分基因工程疫苗和药物工程疫苗和药物许多药品的生产许多药品的生产是从是从生物组织生物组织中提取中提取的。
受材料来源限制的。
受材
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- 基因工程 及其 应用 工具 介绍 非常 详细