乌头碱人参皂苷Rg1与延胡索乙素经皮渗透及协同促渗研究Word格式.docx
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乌头碱人参皂苷Rg1与延胡索乙素经皮渗透及协同促渗研究Word格式.docx
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结果乌头碱、人参皂苷Rg1与延胡索乙素在全皮中的扩散系数分别为123.95、50.32、96.25(×
10-10cm2/s),在活性表皮中的扩散系数分别为539.00、93.60、354.70(×
10-10cm2/s),LogP依次分别为1.66、0.66、0.57。
在3种有效成分共存的体系中,三者的累积透过量出现64%~293%不同程度的提高。
结论3种有效成分合用对经皮吸收会产生协同促进作用,其中乌头碱与人参皂苷Rg1间的经皮协同促渗作用最明显。
【关键词】乌头碱;
人参皂苷Rg1;
延胡索乙素;
油水分配系数;
经皮渗透
Abstract:
ObjectiveTostudypercutaneousabsorptionkineticsandsynergisticpenetrationenhancementoftetrahydropalmatine,aconitineandginsenosideRg1.MethodsTheinvitrointactandstrippedskinpermeationexperimentswerecarriedoutbyusingPermcellKH-5Phorizontalproliferationsystem.Thepercutaneouskineticparametersoftetrahydropalmatine,aconitineandginsenosideRg1weredeterminedbyHPLC,andthetransdermalbehaviorsofthethreeactiveingredientsandinteractionsofcombinationwereinvestigated.ResultThecumulativeamountsin24hofintactskinoftetrahydropalmatine,aconitineandginsenosideRg1were123.95,50.32,96.25(×
10-10cm2/s).Thecumulativeamountsin24hofstrippedskinofthemwere539.00,93.60,354.70(×
10-10cm2/s).TheLogPwere1.66,0.66and0.57respectively.Eachcomponenthadcumulatedamountpermeatedofimprovementby64%~293%incoexistencesystemofthreeactiveingredients.ConclusionThecombinationofthreeactiveingredientsresultsinasynergisticenhancementeffectonpercutaneousabsorptionofeveryactiveingredient,anditisshownthatthemaximalenhancementeffectappearsbetweenaconitineandginsenosideRg1.
Keywords:
aconitine;
ginsenosideRg1;
tetrahydropalmatine;
LogP;
transdermalpermeation
川乌祛寒湿风痹、血痹,三七和营止血、通脉行瘀,行瘀血而敛新血,是活血止痛外用方剂中常用的两种药材,它们经常配伍使用,以达活血散瘀、理气止痛之协同功效,如云南白药中含有川乌和三七等药材,其活血止血、消肿止痛的功效显著[1]。
延胡索活血、利气、止痛,也是止痛方剂中常用的中药材,如冰辛巴布剂由延胡索、三七等多种药材组成,对热刺激引起的疼痛抑制作用明显[2]。
与口服给药不同,中药外治首先有效成分必须能够渗透进入体内,目前对中药经皮促渗的研究多集中在冰片、薄荷等挥发性成分的促渗上[3-4],而对经皮渗透和吸收的相互影响研究不多。
本研究采用川乌、三七和延胡索中主要有效成分——乌头碱、人参皂苷Rg1与延胡索乙素,通过体外透皮试验,研究3种有效成分经全皮和去角质层皮肤的渗透动力学特征,考察不同组合对经皮吸收的影响,从现代经皮渗透动力学角度探讨并诠释传统外用中药配伍的合理性。
1材料
1.1仪器
PermcellKH-5P型横式扩散池(日本Vidrex);
LC-2010A高效液相色谱仪(日本岛津);
J0100-3电子天平(沈阳龙腾电子有限公司);
SYC15超级恒温水浴(巩义英裕予华仪器厂);
pH计(PBH-3,上海三信仪表厂);
LG16-W离心机(北京医用离心机厂)。
1.2药物与试剂
乌头碱、延胡索乙素(西安山川生物科技有限公司,纯度大于95%);
人参皂苷Rg1(南京青泽医药科技开发有限公司,纯度大于95%)。
磷酸,三乙胺,磷酸二氢钾,磷酸氢二钾;
甲醇、乙腈均为色谱纯。
1.3动物
昆明种小鼠,雌雄兼用,鼠龄(50±
2)d,体重(20±
2)g,大连医科大学动物中心。
2方法
2.1分析方法的建立
2.1.1色谱条件
2.1.1.1乌头碱与延胡索乙素
色谱柱:
HypersilC18(150mm×
4.6mm,5mm),流动相:
A相为0.25%磷酸水溶液,用0.05%三乙胺调pH至3.0,B相为甲醇。
梯度洗脱系统B相:
0~13min30%~34%,13~16min34%~55%,16~23min55%,23~25min55%~30%,保持30%至26min。
检测波长240nm,流速1.0mL/min,柱温30℃;
进样量20μL。
延胡索乙素保留时间10min,乌头碱保留时间22.5min。
2.1.1.2人参皂苷Rg1
HypersilC18(250mm×
4.6mm,5mm),流动相体积比:
乙腈-水=23∶77。
流速1mL/min,柱温30℃,进样量20μL,检测波长:
203nm。
人参皂苷Rg1保留时间11.6min。
2.1.2线性关系
乌头碱浓度(C)在0.5~50.0g/mL范围内与峰面积(A)线性关系良好,线性方程为A=8095.6C+666.7,r2=0.9995。
延胡索乙素浓度(C)在0.5~50.0g/mL范围内与峰面积(A)线性关系良好,线性方程为A=11419C+1889,r2=0.9995。
人参皂苷Rg1浓度(C)在0.92~92g/mL范围内与峰面积(A)线性关系良好,线性方程为A=2126.3C+502.9,r2=0.9999。
2.1.3精密度
乌头碱:
精密度日内RSD<0.9%(n=3),日间RSD<1.2%。
延胡索乙素:
精密度日内RSD<0.9%,日间RSD<1.1%。
人参皂苷Rg1:
精密度日内RSD<1.0%,日间RSD<1.5%。
2.1.4回收率测定
乌头碱平均回收率为100.6%,RSD=0.85%。
延胡索乙素平均回收率为100.3%,RSD=0.86%。
人参皂苷Rg1平均回收率为101.2%,RSD=0.98%。
2.2有效成分稳定性考察
2.2.1乌头碱稳定性
将一定量的乌头碱用微量甲醇溶解,分别加入纯净水、按2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录方法配制PBS(pH=5.0)与0.05mol/L的NaOH溶液,制得乌头碱水溶液(pH=7.2)、乌头碱酸性缓冲盐溶液(pH=5,配制方法见“2.5.2”项)与乌头碱碱性溶液(pH=9.4)。
将3种溶液放入恒温水浴锅中[(37±
0.5)℃],在配制后10min及12、24、48h取样,检测溶液内成分变化,实验结果采用高效液相色谱(HPLC)分析。
2.2.2延胡索乙素与人参皂苷Rg1稳定性
将延胡索乙素与人参皂苷Rg1分别加入一定浓度的磷酸盐缓冲液PBS(pH=5.0)和纯净水溶液(pH=7.2),放入恒温水浴锅中,维持温度为(37±
0.5)℃,在配制后1、3、6、9、12、24h取样,用高效液相色谱分析,考察其在酸性与中性条件下的稳定性。
2.3油水分配系数的测定
分别测定3种有效成分的油水分配系数(LogP),以正辛醇-水为分配体系。
将溶有一定量药物的水相装入试管,加入等体积的正辛醇,在一定强度下振荡,然后于2000r/min离心10min,用HPLC法检测水相中药物浓度(CW)。
设水相中原来的药物浓度为C,分配平衡后油相中的药物浓度为C-CW,LogP,用下式计算。
2.4离体皮肤的制备
取昆明种小鼠,采用脱毛剂(含Na2S7%)脱毛,48h后断颈处死,取背部皮肤,确保角质层完好无损,除去皮下组织和脂肪,得到完整离体皮肤。
将完整皮肤先用带表卡尺测量厚度,再用透明胶带完全粘附于皮肤表面后揭下,重复15~20次,得到活性表皮,也称去角质层皮肤。
所得皮肤采用保鲜膜包裹好后置于密封袋,-20℃冰箱保存备用(1周之内使用)。
2.5体外透皮试验
2.5.1供给液的配制
2.5.1.1乌头碱与延胡索乙素供给液的配制
称量乌头碱与延胡索乙素原料药2mg,分别加入40mL纯净水,配制成乌头碱饱和溶液与延胡索乙素饱和溶液作为供给液。
(37±
0.5)℃下放置48h,试验时取出备用。
2.5.1.2人参皂苷Rg1供给液的配制
称量人参皂苷Rg1原料药80mg,加入40mL纯净水,得到浓度为2mg/mL的人参皂苷Rg1供给液。
0.5)℃下放置,实验时取出备用。
2.5.1.3含有2种有效成分供给液的配制
3种有效成分在供给液中的浓度与其单成分供给液的浓度相同,配制方法同其单成分供给液的配制。
故得到3种含有2种有效成分供给液,分别为人参皂苷Rg1-乌头碱、人参皂苷Rg1-延胡索乙素、延胡索乙素-乌头碱。
2.5.1.4含有3种有效成分供给液的配制
人参皂苷Rg1-延胡索乙素-乌头碱供给液,其各有效成分在供给液中的浓度与其单成分供给液的浓度相同,配制方法同其单成分供给液的配制。
2.5.2接收液的配制
接收液为磷酸盐缓冲溶液(pH=5.0)。
取磷酸二氢钾0.834g与磷酸氢二钾0.087g,加水使溶解成100mL,用磷酸调节pH值到5.0。
2.5.3试验步骤
将皮肤室温解冻10h后,平整置于扩散池的接合部,表皮层面向供给池,真皮层面向接收池,然后将两水平相对的扩散池夹紧密封,扩散面积为0.627cm2。
用移液管向接收池内加入5.0mLPBS,向供给池内加入5.0mL供给
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