反相离子对高效液相色谱法测定祖卡木颗粒中吗啡的含量Word下载.docx
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30℃;
进样量:
20μL。
结果吗啡的线性范围为~μg/mL,r=,平均回收率为%,RSD=%。
结论本文建立的方法简便,测定结果准确,重复性好,可用于该制剂中吗啡的含量测定。
【关键词】祖卡木颗粒;
吗啡;
反相离子对色谱
Abstract:
ObjectiveTosetupanionpairRPHPLCmethodfordeterminingthecontentofmorphineinZukamu TheanalysiswasperformedonanHypersilBDSC18column(mm×
250mm,5μm).Themobilephasewasamixtureof mol/Lpotassiumdihydrogenphosphateand mol/Lsodiumheptanesulfonateacetonitriletriethylamine,adjustedwith5%glacialaceticacidtopH Theflowratewas mL/minandthedetectionwavelength240nm.ResultsThelinearrangeofmorphinewas~μg/mL.Theaveragerecoverywas%withRSD%.ConclusionThismethodissimple,accurateandreproducibleandcanbeusedforthedeterminationofmorphinecontentinZukamugranules.
Keywords:
Zukamugranule;
morphine;
ionpairRPHPLC
罂粟壳为罂粟科植物罂粟PapaversomniferumL.的干燥成熟果壳,其主要成分为吗啡(morphine)、可待因(codeine)、蒂巴因(thebaine)、那可汀(narcotine)、罂粟壳碱(narcotoline)和罂粟碱(papaverine);
另含多糖约%,水解可得乳糖等多种成分。
祖卡木颗粒由山柰、睡莲花及罂粟壳等多味中药制成,罂粟壳中吗啡成分的含量较高,吗啡具有镇痛、止咳、止喘等功效,为本方有效成分之一,但人体摄入吗啡过量,可使人产生依赖性及神经精神疾病,因此需要控制其含量。
为了提高制剂的质量控制水平,本文参考中国药典[1]和文献[2],在祖卡木颗粒质量标准研究中,研究制定了高效液相色谱法测定吗啡的含量,以控制药品的质量。
1仪器与试药
LC10AT高效液相色谱仪,HW2000色谱工作站,BDSC18柱,超声清洗器。
乙腈,水为超纯水,其他试剂均为分析纯,吗啡对照品,祖卡木颗粒。
2方法与结果
色谱条件
色谱柱:
HypersilBDSC18柱,流动相:
mol/L磷酸二氢钾、mol/L庚烷磺酸钠混合溶液乙腈三乙胺,体积分数为5%的冰醋酸调pH=;
理论塔板数按吗啡峰计算不低于3000。
对照品溶液的制备
取吗啡对照品适量,105℃下干燥1h,精密称定,置棕色量瓶中,加流动相制成每1mL含μg的溶液,摇匀,即得对照品溶液。
供试品溶液的制备
取装量差异项下的内容物,研细,精密称定约g,置100mL具塞锥形瓶中,加氨试液10mL,待样品粉末充分润湿后,加三氯甲烷50mL,振摇5min,超声提取70min;
移置分液漏斗中,用少量三氯甲烷洗涤锥形瓶,并入分液漏斗中,分取三氯甲烷层,碱液再用三氯甲烷萃取3次,每次10mL,合并三氯甲烷液,置水浴中挥去三氯甲烷;
残渣用少量流动相溶解,移至10mL量瓶中,加流动相至刻度,摇匀,静置,用μm的微孔滤膜过滤,即得供试品溶液。
阴性样品溶液的制备
取不含罂粟壳的阴性样品,按“”项下方法制成阴性样品溶液。
干扰试验
分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液20μL,按“”项下色谱条件进样,三者的色谱图表明阴性样品溶液在吗啡保留处无吸收峰,处方中其他组分对吗啡的含量测定无干扰,见图1。
A.对照品B.样品C.阴性样品
图1祖卡木颗粒的HPLC谱图
HPLCchromatogramsofZukamugranules
线性关系
分别精密吸取吗啡对照品溶液1、2、3、4、5、6、8、10mL置10mL量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。
分别取20μL进样,按上述色谱条件测定,以峰面积积分值为纵坐标,对照品质量浓度(ρ)为横坐标绘制标准曲线,计算得回归方程:
A=8ρ+1,结果表明吗啡质量浓度在~μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
精密度试验
取吗啡对照品溶液连续进样5次,每次20μL,按上述色谱条件测定峰面积,结果峰面积分别为457597、455700、458374、459938、460905,RSD为%,结果表明精密度良好。
稳定性试验
取同一批供试品溶液,分别于0、2、4、6、8h进样,进样量均为20μL,按上述色谱条件测定峰面积,测得供试品中吗啡峰面积值分别为340860、335796、337715、329813、334931,RSD为%。
结果表明供试品溶液在8h内稳定。
重复性试验
取同一批号的祖卡木颗粒,按“”项下方法分别制备5份供试品溶液,按上述色谱条件进行测定,吗啡平均含量为4mg/g,其RSD=%。
结果表明方法重复性良好。
回收率试验
取已知含量的样品(批号0602252,μg/g)6份,每份约g,精密称定,置100mL具塞三角瓶中,分别精密加入吗啡对照品溶液(μg/mL)1mL,按“”项下供试品溶液制备方法,自“加氨试液10mL……”起,制备加样供试品溶液。
按上述色谱条件测定吗啡含量,测得平均加样回收率为%,RSD=%。
结果见表1。
表1吗啡回收率试验结果
Resultsofrecoverytest(n=6)
样品含量测定
取4批祖卡木颗粒样品按“”项下方法处理,取处理好的制剂样品溶液,进样20μL,计算每批样品的含量,结果见表2。
表2样品测定结果
Morphinecontentofthesample
3讨论
提取方法的选择
考察了固相萃取法和溶剂萃取法,固相萃取法由于各固相柱间差异,操作上重现性不好,导致测量结果不稳定,并且固相柱成本较高,后改为溶剂萃取法。
先后比较了用醋酸乙酯、甲苯、乙醚、三氯甲烷等作为萃取的有机相,结果以三氯甲烷效果最好。
碱化试剂考察了氨水和氨试液,结果发现用氨水碱化提取效果很不好,而用氨试液效果较好。
按“”项下方法制备供试品溶液,分别考察了冷浸法和超声法,结果表明超声提取法提取效率高。
超声法考察了超声时间,分别超声50、60、70、80、90、100min提取;
结果以超声70min最好。
色谱条件的选择
按“”项下方法制备吗啡对照品溶液,在紫外分光光度计上进行扫描测定,同时参照中国药典[1]及有关文献[3],选择240nm为检测波长。
流动相考察了药典方法[1]、醋酸铵三乙胺甲醇体系[4],KH2PO4CH3CNNaSO3C7H15体系等。
通过试验比较最后确定以KH2PO4CH3CNNaSO3C7H15体系最好,因为在流动相中加入庚烷磺酸钠作为反离子试剂,可以与吗啡形成离子对化合物[5],有利于其在固定相上的保留和分离。
又进一步考察了流动相各组分比例、三乙胺加入量和流动相的pH值。
最终确定“”项下色谱条件。
【参考文献】
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:
一部[S].北京:
化学工业出版社,2005:
256-257.
[2]杨秀伟.生物碱[M].北京:
213-218.
[3]王刚,常寿元.HPLC测定力神止咳糖浆中吗啡的含量[J].中成药,2001,23(4):
289-290.
[4]郝红艳,郭济贤,顺庆生,等.HPLC和HPCE法测定罂粟壳中3种生物活性生物碱[J].药学学报,2000,35(4):
289-293.
[5]刘文英.药物分析[M].5版.北京:
人民卫生出版社,2004:
312-313.
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