PCR自测题.docx
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PCR自测题
PCR自测题
一、名词解释
1.PCR
2.变性
3.退火
4.延伸
5.逆转录PCR
6.停滞效应
7.共享引物PCR
8.多重PCR
9.反向PCR
10.原位PCR
11.LCR
二、单项选择题
1.PCR反应中,所设计引物的长度一般为()
A.5~10核苷酸B.15~30核苷酸C.<50个核苷酸D.长度任意E.以上答案均不对
2.引物设计时G+C含量在引物中一般占(c)
A. 20~40﹪B.30~60﹪C.45~55﹪D.越高越好E.含量随意
3.以下说法错误的是(e)
A 引物中的碱基组成应该尽可能的随机分布。
B 引物自身不应该存在互补序列
C 设计引物时应考虑使3‘端引物和5‘端引物具有相似的Tm值
D 引物的5‘和3’端必须和模板严格配对结合
E 引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70﹪
4.下列说法正确的是()
C. PCR反应常用的缓冲液为10-50mmol/L的Tris-HCl(室温PH8.3-8.8)
D. 10mmol/L的KCl能促进引物的退火
E. 加入的BSA有利于破坏模板的二级结构
F. 二甲基亚砜有利于保护TaqDNA酶的活性。
E.Mg2+能降低TaqDNA聚合酶的活性。
5.TaqDNA聚合酶活性需要以下哪种离子(c)
A.K+B.Na+C.Mg2+D.Ca2+E.Cl-
6.适用于DNA序列中单个碱基突变的检测的方法是:
(d)
A.筑巢PCRB.多重PCRC.锚定PCRD.LCR
7.以下哪种PCR技术广泛应用于组织胚胎学和肿瘤学的研究(a)
A.原位PCRB.差异显示PCRC.不对称PCRD.反向PCR
8.已知一段设计好的引物的序列为GTGGATCCATGGCTCCTCTGAAGATTC,其Tm值为()
A.78B.80C.82D.84E.无法计算
9.以下哪种PCR技术可以克服序列未能全知的障碍而获取目的扩增片段(c)
A.共享引物PCRB不对称PCRC锚定PCRD.筑巢PCR
10.一位疑似杜氏肌营养不良症的患者,可以采用以下哪种方法协助诊断()
A.原位PCRB.多重PCRC.不对称PCR.D.锚定PCR
11.以下关于dNTP的说法错误的是(e)
B. dNTP具有较强的酸性,使用时应将pH调至7.0-7.5
C. PCR反应中,四种dNTP必须按比例配制,以减少反应的错配率。
D. dNTP的浓度过高会增加碱基的错配率
E. dNTP的浓度低,反应速度下降,但特异性提高
12.TaqDNA聚合酶可以不要模板在dsDNA的末端加上一个()碱基.
A.dGTPB.dCTPC.dATPD.dTTP
13.有关PCR的描述哪个不对(d)
A.是一种酶促反应
B.引物决定扩增的特异性
C.扩增的对象是DNA序列
A) D.扩增的对象是氨基酸序列
14.催化PCR的酶是(c)
A. RNA聚合酶
B. DNA聚合酶
C. TaqDNA聚合酶
D. 反转录酶
15.PCR产物具有特异性是因为(c)
A. TaqDNA酶保证了产物的特异性
B. 合适的变性,退火,延伸温度
C. 选择特异性的引物
D. 引物的Tm值不同.
16.LCR的说法正确的是()
A. 体系中采用DNA聚合酶
B. 须设计一对引物
C. 反应需经过变性,复性,连接
D. LCR中,酶将dNTP加到引物的3-OH端
E. LCR具有高度敏感性
三、多项选择题
1.下列关于退火温度说法正确的是()
A.合适的退火温度应低于引物Tm值5℃左右。
B.引物与模板的退火温度一般在45-55℃之间
C.在Tm值允许的范围内,选择偏低的退火温度可以提高PCR反应的特异性。
D.退火时间至少需要一分钟。
2.进行PCR实验时以下措施有助于防止污染和结果的假阳性()
B 隔离不同的操作区
C 分装试剂,减少重复取样所致的污染
D 严格实验操作
E 设立实验对照
3.适用于扩增3‘或5‘端未知序列的PCR技术是()
A.反向PCRB.锚定PCRC.多重PCRD.不对称PCR
4.以下关于PCR技术应用说法正确的是()
B 筑巢PCR和共享引物PCR有利于增强PCR反应的特异性,适用于模板含量极少的样品的检测
C 不对称PCR可以大量制备单链DNA,可用于DNA的序列测定
D 彩色PCR适用于基因诊断和自动化DNA序列测定
E 定量PCR可用于基因表达和调控的研究
F 差异显示PCR可用于筛选和克隆受发育,突变等各种因素影响下差异表达的基因
5.关于引物设计说法正确的是()
B 为保证PCR反应的特异性,所设计的引物长度一般>30个核苷酸
C 引物设计时G+C含量在引物中一般为45~55﹪
D 按经验,引物自身存在的连续互补序列一般不超过3个碱基
E 两个引物之间不应存在互补序列,尤其避免3‘端的互补重叠
F 引物的3‘端可以游离而不影响PCR反应的进行
6.以下关于PCR的说法正确的是()
A PCR的模板可以是DNA也可以是RNA
B PCR的模板必须从组织细胞中分离出来
C PCR反应的特异性取决于引物和模板DNA的结合位点。
D PCR反应初期,目的DNA片断的增加呈指数扩增。
E PCR反应一般需要含102-105拷贝的模板
7.以下关于PCR反应条件错误的是()
B PCR缓冲液中加入二甲基亚砜有利于破坏模板的二级结构,提高反应的特异性。
C Mg浓度过高会降低TaqDNA酶的活性,Mg浓度过低又会使酶催化非特异性扩增增强。
D 4种dNTP应以等摩尔浓度配制,以减少错配误差。
E 引物浓度一般为0.5-1umol/L
8.PCR反应时应设立哪种对照()
A.阴性对照
B.阳性对照
C.试剂对照
D.以上答案都正确
9.逆转录反应体系包括()
B. RNA模板,四种dNTP
C. RNA酶抑制剂
D. 合适的缓冲液体系
E. 逆转录酶
F. 寡聚胸腺嘧啶核苷酸引物
10.有关PCR的模板说法正确的是()
A. 模板可以是DNA也可以是RNA
B. 大多数PCR反应中对DNA模板纯度要求不高
C. 模板用量低
D. 标本处理的基本要求是除去杂质
11.以下有关RT-PCR反应的说法你认为正确的有()
A. 反应体系一般有20μl
B. 反应体系中有缓冲液,四种dNTP,MgCl2,DTT,牛血清白蛋白,Oligo(dT)引物RNA模板和逆转录酶
C. 逆转录于42℃进行,随后即进行PCR
D. RT-PCR的最终反应过程依然是以DNA为模板的PCR反应
12.PCR的产物累积的特征是()
B. 反应初期,目的DNA片断呈指数扩增
C. PCR进行到一定时间出现反应中的停滞效应
D. 到达平台期的的PCR循环数取决于反应体系中酶的耗竭程度
E. PCR平台期的出现多数不可避免
F. 到达平台期时若扩增目的DNA片断不足,可继续加入模板,酶和缓冲液进行PCR反应
13.有关Mg2+在PCR中的作用说法不正确的是()
A. TaqDNA酶的活性维持需要Mg2+
B. TaqDNA酶的活性与反应体系中的Mg2+总浓度有关
C. Mg2+过低,酶催化非特异性扩增增加
D. Mg2+过高会降低酶的活性
E. 总量应低于dNTP的量,常用1.5mmol/L
14.PCR中使用的底物dNTP应该是()
A. 使用前应将pH值调至7.0-7.5
B. dNTP浓度高可以加快反应速度,但却增加了出错率
C. 降低反应速度可以提高反应特异性
D. PCR中,4种dNTP必须按一定比例配制
E. Mg2+会与dNTP结合,应注意二者浓度之间的关系
15.TaqDNA酶的特点是()
A. 75-80℃时具有最高的聚合酶活性
B. 活性的维持需要Mg2+的参与
C. TaqDNA酶和klenow片断一样具有校正功能
D. TaqDNA酶的忠实性很高
E. 具有类似末端转移酶的活性
16.有关引物的说法正确的是()
A. 引物浓度一般为0.1-1.5μmol/L
B. 引物与模板的的比至少为108:
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