食品科学与工程基础实验文档格式.docx
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单个操作薄层层析的制板。
三、实验原理:
样品酸化后,用乙醚提取山梨酸,苯甲酸。
将样品提取液浓缩,点于浆酰胺薄层板上,展开,显色后,根据薄层板上山梨酸,苯甲酸的比移值与标准比较定性,并可进行概略定量。
四、实验材料、仪器和试剂
1、异丙醇
2、正丁醇
3、石油醚沸程:
30-60℃。
4、乙醚:
不含过氧化物
5、氨水
6、6N盐酸:
7、无水乙醇。
8、聚酰胺粉:
200目。
9、山梨酸标准溶液:
精密称取0.2000克山梨酸,用少量乙醇溶解后移入100毫升容量瓶中,并稀释至刻度,此溶液每毫升相当于200毫克山梨酸。
10、苯甲酸标准溶液:
精密称取0.2000克苯甲酸,用少量乙醇溶解后移入100毫升容量瓶中,并稀释至刻度,此溶液每毫升相当于2毫克苯甲酸。
11、展开剂
(1)正丁醇-氨水--无水乙醇(7:
1:
2)
(2)异丙醇-氨水-无水乙醇(7:
12、显色剂:
O.04%溴甲酚紫的50%乙醇溶液,用0.1N氢氧化钠溶液调至pH=8。
13、4%氯化钠酸性溶液:
于4%的氯化钠溶液中加少量6N盐酸酸化。
14、吹风机
15、层析缸
16、玻璃板:
10X18cm
17、微量注射器:
10微升,100微升。
18、喷雾器
五、实验步骤或方法
1、样品提取
称取2.5克事先混合均匀的样品,置于25毫升带塞量筒中,加0.5毫升6N盐酸酸化,用15、10毫升乙醚提取两次,每次振摇1分钟,将上层醚提取液吸人另一个25毫升带塞量筒中,合并乙醚提取液。
用3毫升4%氯化钠酸性溶液洗涤两次,静止15分钟,用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤人25毫升容量瓶中。
加乙醚至刻度混匀,吸取l0.0毫升乙醚提取液分两次置于10毫升带塞离心管中,在约40度的水浴上挥发干,加入0.10毫升乙醇溶解残渣,备用。
2、测定
(1)聚酰胺粉板的制备:
称取1.6克聚酰胺粉,加0.4克可溶性淀粉加约重5毫升,研磨3-5分钟,立即倒入涂布器内制成10X
18cm、厚度0.3mm的薄层板两块,于室温干燥后保存,于80℃干燥1小时,取出,置于干燥器中保存。
(2)点样:
在薄层板下端2cm的基线上,用微量注射器点1微升,2微升样品液,同时各点1微升、2微升山梨酸、苯甲酸标准溶液。
(3)展开与显色:
将点样后的薄层板放人预先盛有展开剂[
(1)或
(2)]的展开槽内,展开槽周围贴有滤纸,待溶剂前沿上展至lOcm,取出挥干,喷显色剂、斑点成黄色,背景为蓝色。
样品中所含有山梨酸、苯甲酸的量与标准斑点比较定量(山梨酸、苯甲酸的比移值依次为0.82,0.73)。
六、实验结果及数据处理
A×
1000
计算:
X=-----------------------------
10
V2
m×
------×
------×
1000
25
V1
X:
样品中山梨酸(苯甲酸)的含量,g/kg;
A:
测定用样品液中山梨酸(苯甲酸)的含量,mg;
M:
样品质量,g;
Vl:
加入乙醇的体积,ml.,
V2:
测定时点样的体积,ml;
·
10:
测定时吸取乙醚提取液的体积,ml;
25:
样品乙醚提取液总体积,m1。
注:
此方法还可以同时测定果酱、果汁中的糖精。
七、思考题
1、制板时,80摄氏度烘干是为了什么目的?
2、山梨酸、苯甲酸在食品中是否允许使用?
剂量是多少?
3、展开剂的选择原则是什么?
(二)食品中着色剂的测定
1、明确测定各类色素的原理与方法。
2、通过此实验掌握层析定性法与提纯色素的定量法。
单个操作薄层层析的制板。
三、实验原理
聚酰胺是具有二极性的化合物,水溶性酸性染料在酸性条件下被聚酰胺吸附,而在碱性条件下解吸附,再用纸色谱法或薄层色谱法进行分离后与标准比较定性、定量。
试剂
1、聚酰胺粉(尼龙6)
2、硫酸1:
10
3、甲醇—甲酸溶液:
6:
4
4、甲醇
5、20%柠檬酸溶液
6、10%钨酸钠溶液
7、石油醚:
沸程60-90℃
8、海砂:
先用l:
10盐酸煮沸15min,用水洗中性,再用5%氢氧化钠溶液煮沸15min,再于105℃干燥,贮于具玻璃塞的瓶中,备用。
9、乙醇-氨溶液:
取1毫升氨水,加70%乙醇至100毫升。
10、50%乙醇溶液
11、硅胶G。
12、pH6的水:
用20%柠檬酸调节至PH6。
13、盐酸:
1:
10
14、5%氢氧钠溶液
15、碎瓷片:
处理方法同海砂
16、展开剂
a、正丁醇-无水乙醇-1%氨水(6:
2:
3):
供纸色谱用。
b、正丁醇-吡啶-1%氨水(6:
3:
4):
c、甲乙酮-丙酮-水(7:
d、甲醇-乙二胺-氨水(10:
2):
供薄层色谱用。
e、甲醇-氨水-乙醇(5:
10):
f、2.5%柠檬酸钠-氨水-乙醇(8:
2)供薄层色谱用。
17、色素标准溶液{以下商品作为标准以100%计。
胭脂红:
纯度60%;
苋菜红:
柠檬黄:
纯度60%;
靛蓝:
纯度40%;
日落黄:
纯度60%,亮蓝;
纯度60%。
精密称取上述色素各0.100克,用pH6的水溶解,移入100毫升容量瓶中并稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于1毫克商品色素。
靛蓝溶液需在暗处保存。
18、色素标准使用液:
用时吸取色素标准溶液各5.0毫升,分别置于50毫升容量瓶中,加PH6的水稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于0.1毫克商品色素。
仪器:
1、分光光度计
2、微量注射器或色素吸管
3、展开槽,25X6x4cm
4、层析缸
5、滤纸、中速滤纸,纸色谱用
6、薄层板:
5X20em
7、电吹风机
8、水泵
1、样品处理
A、果味水、果子露、汽水:
吸取50.0毫升样品于100毫升烧杯中,汽水需加热驱除二氧化碳。
B、配制酒:
吸取100.0毫升样品于烧杯中,加碎瓷片数块,加热驱除乙醇。
C、硬糖:
蜜饯类,淀粉软糖:
称取5.0或10.0克粉碎的样品,加30毫升水,温热溶解,若样液pH值较高,用20%柠檬酸溶液调至PH4左右。
D、含蛋奶的样品
(1)奶糖:
称取10.0克粉碎均匀的样品,加30毫升乙醇-氨溶液溶解,置水浴上浓缩至约20毫升,立即用1:
10硫酸调溶液至微酸再加1.0毫升1:
l0硫酸,加1毫升l0%钨酸钠溶液,使蛋白质沉淀,过滤,用少量水洗涤,收集滤液。
(2)蛋糕类:
称取10.0克粉碎均匀的样品,加海砂少许,混匀、用热风风干样品(用手摸已干燥即可以),加入30毫升石油醚搅拌,放置片刻,倾出石油醚,如此重复处理三次,以除去脂肪吹干后研细,全部转人G3垂融漏斗或普通漏斗中,用乙醇—氨溶液提取色素,直至色素全部提完以下按
(1)自“置水浴下浓缩至约20毫升”起依法操作。
2、吸附分离
将处理后所得的溶液加热至70℃,加入0.5-1.0克聚酰胺粉充分搅拌,用20%柠檬酸溶液调pH至4,使色素完全被吸附,若溶液还有颜色,可以再加一些聚酰胺粉。
将吸附色素的聚酰胺全部转入G3垂融漏斗或玻璃漏斗中过滤(如用G3垂融漏斗过滤,可以用水泵慢慢地抽滤)。
用20%柠檬酸酸化pH=4的70℃水反复洗涤,每次20毫升,边洗边搅拌,若含有天然色素再用甲醇-甲酸溶液洗涤1-3次,每次20毫升,至洗液无色为止。
再用70℃水多次洗涤至流出的溶液为中性。
洗涤过程中必须充分搅拌。
然后用乙醇-氨溶液分次解吸全部色素,收集全部解吸液,于水浴上驱氨。
如果为单色,则用水准确稀释至50毫升,用分光光度法进行测定。
如果为多种色素混合液,则进行纸色谱或薄层色谱法分离后测定,即将上述溶液置水浴上浓缩至约2毫升后移人5毫升容量瓶中,用50%乙醇洗涤容器,洗液并入容量瓶中并稀释至刻度。
3、定性
A、纸色谱
取色谱用纸,在距底边2cm的起始线上分别点3-10微升样品溶液,1-2微升色素标准溶液,挂于分别盛有a、b、c、d、e、f的展开剂的层析缸中,用上行法展开,待溶剂前沿展至15cm处,将滤纸取出于空气中晾干,与标准斑比较定性。
也可取0.5毫升样液,在起始线上从左到右点成条状,纸的右边点色素标准溶液,依法展开,晾干后先定性后定量,靛蓝在碱性条件下易褪色可用e展开剂。
B、薄层色谱
(1)薄层板的制备
称取1.6克聚胺粉,0.4克可溶性淀粉及2克硅胶G,置于合适的研钵中,加15毫升水研匀后,立即置涂布器中铺成厚度为0.3mm的板。
在室温晾干后,于80℃干燥1小时置于燥器中备用。
(2)点样
离板底边2cm处将0.5毫升样液从左到右点成与底边平行的条状的右边点2微升色素标准溶液。
(3)展开
苋菜红与胭脂红用d展开剂,靛蓝与亮蓝用e展开剂,柠檬黄与其他色素用f展开剂。
取适量展开剂倒入展开槽中,将薄层板放入展开,待色素明显分开后取出,晾干,与标准斑比较,如比移值相同即为同一色素。
4、定量
A样品测定
将纸色谱的条状色斑剪下,用少量热水洗涤数次,洗液移入10毫升比色管中,并加水稀释至刻度,作比色法定用。
将薄层色谱的条状色斑包括有扩散的部分,分别用刮刀刮下,移入漏斗中,用乙醇-氨溶液解吸色素,少量反复多次至解吸液无色,收集解吸液于蒸发皿中,于水浴上挥发除去氨,移入10毫升比色管中,加水至刻度作比色用。
B、标准曲线制备
分别吸取0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml胭脂红,柠檬黄,日落黄色素标准使用液或0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml亮蓝,靛蓝色素标准溶液,分别置于10ml比色管中,各加水稀释至刻度。
上述样品与标准管分别用1cm比色杯,以零管调节零点,于一定波长下(胭脂红510nm,苋菜红520nm,柠檬黄430nm,日落黄482nm,亮蓝627nm),测定吸光度,分别绘制标准曲线比较或与标准色列目测比较。
X=
A*100
m*-------*1000
计算:
式中:
样品中色素的含量,克/千克/升
测定用样液中色素的含量,毫克
m:
样品质量(体积),克(毫克)
V1:
样品解吸后总体积,毫升
样液点板(纸
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- 食品科学 工程 基础 实验