玄参提取物抗炎与抗动脉硬化作用的探索Word文档格式.docx
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d-1,正常组和模型组每天灌服等量蒸馏水。
给药70d后处死大鼠,对血脂、TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10及NF-кB进行测定,并观察动脉的病变情况。
结果玄参提取物可明显降低模型大鼠胆固醇和低密度脂蛋白的水平,提高高密度脂蛋白与低密度脂蛋白的比值,降低炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6的浓度,提高抗炎因子IL-10的浓度,抑制动脉NF-кB过量表达,抑制模型大鼠动脉壁中膜的增厚。
结论玄参提取物可通过抗炎和降血脂而发挥一定的抗动脉硬化的作用。
【关键词】玄参提取物;
动脉硬化;
抗炎;
血脂
Abstract:
ObjectiveTostudytheeffectofextractfromRadixScrophulariae(RS)againstatherosclerosisandtherelativemechanismsinwererandomlydividedinto5groups.Theyweretheconrtol,model,lowandhighdoseofRSextractandibuprofenmodelratswereintraperitoneallyinjectedwith600000IU·
kg-1vitamineD3andintragastricallyadministratedhigh-fatemulsion10ml·
kg-1·
d-1for70thesametime,themodelratstreatedwithdrugswereorallygiven·
,mg·
d-1RSextractandmg·
d-1ibuprofensuspension70days,theratswerekilled,andtheserumlevelsofTC,TG,LDL,HDL/LDL,TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10,theexpressionofNF-кBinrataortaandthepathologicalchangeofaortawereextractcouldlowertheserumlevelsofTC,LDL-C,TNF-α,IL-1βandIL-6,increasethelevelofIL-10andtheratioofHDL/LDL,inhibittheexpressionofNF-кBandreducethethicknessofthearteryextracthasanti-atherescleraticmechanismmayberelatedwithinhibitinginflammationandloweringserumlipid.
Keywords:
RadixScrophulariaeextracts;
Atherosclerosis;
Anti-inflammation;
Serumlipid
随着国民经济迅速发展和人们生活水平的不断提高,卫生部1988~1996年疾病死亡统计资料显示,我国与动脉粥样硬化(AS)有关的疾病每年造成的死亡数占到总死亡数的35%~40%,是目前我国人们疾病第一位死因[1]。
于其发病机制尚未完全清楚,临床也无特效药物根治,因此,从中药中发掘抗AS的药物具有特别重要的意义。
玄参为玄参科多年生草本植物玄参ScrophularianingpoensisHemsl的根,是常用的传统中药。
始载于《神农本草经》,被列为中品,性寒,味苦、甘、咸,可入肺、胃、肾经,具有凉血滋阴、泻火解毒之功效。
用于热病伤阴、津伤便秘、目赤、咽痛等[2]。
现代药理研究发现玄参在心血管系统具有广泛而重要的药理作用,而其抗动脉硬化的实验研究尚未见报道。
本实验旨在借助动脉硬化大鼠模型,观察玄参提取物对动脉硬化大鼠及其炎症相关细胞因子的影响,探索中药玄参提取物抗动脉硬化的作用及其机制。
1材料与仪器
动物雄性SD大鼠,体质量180~200g,购自上海斯莱克实验动物有限公司,动物合格证号:
SCXK(沪)2007-0005。
药品与试剂玄参提取物(1g干燥提取物相当于g生药,主要含哈巴俄苷、安格洛苷C、肉桂酸及毛蕊花苷等苯丙素苷类物质),上海中医药大学中药化学教研室提供;
布洛芬混悬液,上海强生制药公司产品,批号080503102;
维生素D3注射液,上海通用药业产品,批号060902;
丙硫氧嘧啶片,批号801720,德国瑞姆斯制药股份公司产品;
脂肪乳自配(每500ml脂肪乳中含胆固醇25g,胆酸钠5g,丙硫氧嘧啶g,猪油75g);
TNF-αELISA试剂盒,批号:
200812156;
IL-1βELISA试剂盒,批号:
IL-6ELISA试剂盒,批号:
IL-10ELISA试剂盒,批号:
200812156,均为上海西唐生物科技有限公司产品;
兔抗鼠一抗,上海卓康公司产品,批号:
860938;
羊抗兔二抗,武汉博士德有限公司产品,批号:
200903。
仪器BX51/BX52型系统显微镜,日本Olympus公司;
Lamage-ProplusMediaCybernetics图象分析系统,USA;
DL250RC2L离心机,上海中科生物医学高科技开发有限公司;
DENLEYDRAGONWellscanMK3酶标仪,芬兰Thermo公司。
2方法
动物分组及给药40只SD大鼠,雄性,随机分为正常组、模型组、布洛芬组、玄参提取物低剂量组、玄参提取物高剂量组,每组8只。
按照文献方法[3],采用一次性腹腔注射维生素D3,60万单位/kg,同时每天灌服脂肪乳10ml/kg,连续70d,制备动脉硬化大鼠模型。
正常组一次性注射同等体积的生理盐水,并每天灌服蒸馏水。
各药物组在造模的同时,每天给予相应的药物进行防治。
玄参提取物低剂量组:
灌服玄参提取物mg/kg;
玄参提取物高剂量组:
布洛芬组:
灌服布洛芬mg/kg;
正常组和模型组:
灌服等量蒸馏水。
检测指标
血脂、细胞因子的测定动物给药70d后,禁食12h,不禁水,25%乌拉坦腹腔注射麻醉大鼠,腹主动脉取血,4000r/min,离心15min,分离血清,将其分为5份,-20℃保存。
1份血清用于血脂的测定:
全自动生化分析仪测定大鼠的胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白水平,并计算高密度脂蛋白与低密度脂蛋白的比值;
其余4份用于炎症细胞因子的测定:
ELISA法分别测定TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10的浓度,实验严格按照试剂盒步骤操作。
NF-κB的测定取腹主动脉,石蜡包埋与切片,免疫组化分析采用SABC法观察动脉中膜NF-кB的阳性表达,实验严格按照试剂盒的步骤操作。
NF-кB活化表现为胞浆、胞核黄染,以核黄染为阳性细胞。
观察位置为动脉中膜,每张切片选取细胞分布均匀的3个高倍视野作为观察区,计数3个视野内细胞数和阳性细胞数,计算阳性细胞率,取其平均值。
染色结果参见阳性细胞半定量分析法[4]。
在高倍镜下对细胞核内的反应作如下评分:
染色强度:
0为无染色;
1为染色弱;
2为中等染色强度;
3为染色强。
阳性细胞率:
0为 3结果
玄参提取物对血脂的影响与正常组比较,模型组大鼠的三酰甘油浓度无明显差异(数据略),胆固醇、低密度脂蛋白的水平明显升高,高密度脂蛋白与低密度脂蛋白的比值明显降低;
各药物组大鼠均可见胆固醇、低密度脂蛋白的水平明显降低,高密度脂蛋白与低密度脂蛋白的比值明显升高。
结果见表1。
玄参提取物对炎症相关细胞因子的影响与正常组比,模型组大鼠TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10的浓度明显提高;
玄参提取物低剂量可明显降低TNF-α,IL-6的浓度,提高IL-10的浓度;
玄参提取物高剂量可显著降低TNF-α,IL-1β,IL-6的浓度,提高IL-10的浓度;
布洛芬可降低TNF-α,IL-1β,IL-6浓度,但对IL-10无明显影响。
结果见表2。
表1玄参提取物对动脉硬化大鼠血脂的影响表2玄参提取物对动脉硬化大鼠细胞因子的影响与正常组比较,△P 4讨论
AS的确切病因至今未明,导致AS发生和发展的因素有很多,研究和解决这些因素都可能起到不同程度的抗AS效应。
已有文献提出AS与炎症过程有关[5]。
越来越多的证据表明,动脉粥样硬化性心血管病人(ASCVD)和相应的动物模型中都存在全身性的炎症反应[6],且炎症反应在AS过程中起决定性作用[7]。
TNF-α是触发与炎症有关的许多细胞因子释放的关键物质,在炎症反应中具有核心作用地位[8]。
内皮细胞可被炎症因子包括TNF-α激活,从而生成黏附分子使单核细胞与血管内皮细胞黏附。
IL-6的致AS作用也日益受到重视[9,10]。
除致炎因子外,抗炎因子如IL-10也参与了AS的发生和发展,并发挥了重要的保护作用[11,12]。
其中IL-6、IL-10被认为是AS的标志物[13,14]。
研究发现,冠心病患者血清中TNF-α和IL-1β水平明显升高[15,16]。
提示血清中炎症因子水平与动脉硬化密切相关,因此对细胞因子水平的检测具有重要意义。
NF-κB是一种能够调节多种炎症和免疫基因表达的重要转录因子。
活化的NF-κB可以在转录水平调节巨噬细胞活化后炎症因子和细胞因子基因的表达,如TNF-α和IL-1、IL-6、IL-8、IL-18及组织因子ICAM-1等。
而这些分泌物又可促进斑块内细胞的NF-κB进一步活化,形成正反馈,放大斑块中的炎症反应,促进AS的发展[17]。
所以,NF-кB过度激活有可能是动脉粥样硬化发生与发展的因素之一。
本实验利用维生素D3腹腔注射,加服脂肪乳制备大鼠动脉硬化模型,旨在观察玄参提取物对动脉硬化及其相关炎症细胞因子的影响。
结果发现,玄参提取物能降低模型大鼠胆固醇和低密度脂蛋白的水平,升高高密度脂蛋白与低密度脂蛋白的比值,抑制动脉硬化大鼠动脉壁的增厚,从而显示一定的降血脂和抗动脉硬化作用。
玄参提取物降低炎症细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6的浓度,升高抗炎细胞因子IL-10的浓度,抑制NF-кB的过量表达,可能是其抗动脉硬化的主要作用机制。
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- 玄参 提取物 动脉硬化 作用 探索