旋光法测定淀粉含量实验报告文档格式.docx
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为1.30(20℃),再用1.6%醋酸调整ph为2.3~2.5,过滤后备用。
氯化锡溶液:
溶解2.5gsncl4·
5h2o于75ml上述氯化钙溶液中。
2.仪器—
自动指示旋光计(附钠光灯),wZZ—T1型
容量瓶100ml
烧瓶100ml
四、操作方法
1.把样品研磨并通过40目以上的标准筛,称取2g样品,置于250ml烧杯中。
2.加水10m1,搅拌使样品湿润,加入70ml氯化钙溶液,盖上表面皿,在5min内加热至沸并继续加热15min。
加热时随时搅拌以防样品附在烧杯壁上。
如泡沫过多可加1~2滴辛醇消泡。
3.迅速冷却后,移入l00ml容量瓶中,用氯化钙溶液洗涤烧杯上附着的样品,洗液并入容量瓶中。
4.加5mI氯化锡镕液,用氯化钙溶液定容到刻度,混匀,过滤,弃去初滤液,收集滤液装入旋光管中,并于旋光计中测定样品溶液旋光度。
五、计算
淀粉(%)?
?
100L?
203?
m?
100
式中:
α——旋光度读数,度;
L——观测管长度,dm;
m——样品质量,g
203——淀粉的比旋光度,度
六、说明
1.氯化钙溶液可以作为淀粉的提取剂,是因为钙能与淀粉分子上的羧基形成络合物,使淀粉与水有较高的亲合力而易溶于水中。
2.淀粉溶液加热后,必须迅速冷却,以防止淀粉老化,形成高度晶化的不溶性淀粉分子微束。
3.氯化锡溶液的作用是沉淀蛋白质,因为蛋白质也具有旋光性(左旋性)。
蛋白质含量较高的样品,如高蛋白营养米粉,用旋光法测定时结果偏低,误差较大。
篇二:
植物组织中淀粉含量的测定
植物组织中淀粉含量的测定
20XX-01-1208:
55
Ⅰ蒽酮硫酸法
一、原理
淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖,在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖,然后在浓硫酸的作用下,使单糖脱水生成糠醛类化合物,利用蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应,即可进行比色测定。
二、实验材料、试剂与仪器设备
(一)实验材料
任何植物材料。
(二)试剂
浓硫酸(比重1.84)。
9.2mol/Lhclo4。
2%蒽酮试剂,同实验24。
(三)仪器设备
电子天平,容量瓶:
100mL4个、50mL2个,漏斗,小试管若干支,电炉,刻度吸管0.5mL1支、2.0mL3支、5mL4支,分光光度计,记号笔。
三、实验步骤
1.标准曲线制作
取小试管11支从0~10编号,按表24-3加入溶液和蒸馏水。
以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可,见方法一或方法二,绘制相应的标准曲线。
表24-3各试管加入标准液和蒸馏水量
管号
1~2
3~4
5~6
7~8
9~10
淀粉标准液(ml)
0.4
0.8
1.2
1.6
2.0
蒸馏水(ml)
淀粉含量(mg)
40
80
120
160
200
2.样品提取称取50~100mg粉碎过100目筛的烘干样品,置于15mL刻度试管中,加入6~7mL80%乙醇,在80℃水浴中提取30min,取出离心
(3000rpm)5min,收集上清液。
重复提取两次(各10min)同样离心,收集三次上清液合并于烧杯,置于85℃恒温水浴,使乙醇蒸发至2~3mL,转移至50mL容量瓶,以蒸馏水定容,供可溶性糖的测定。
向沉淀中加蒸馏水3mL,搅拌均匀,放入沸水浴中糊化15min。
冷却后,加入2mL冷的9.2mol/L高氯酸,不时搅拌,提取15min后加蒸馏水至10mL,混匀,离心10min,上清液倾入50mL容量瓶。
再向沉淀中加入2mL4.6mol/L高氯酸,搅拌提取15min后加水至10mL,混匀后离心10min,收集上清于容量瓶。
然后用水洗沉淀1~2次,离心,合并离心液于50mL容量瓶用蒸馏水定容供测淀粉用。
3.测定取待测样品提取液1.0mL于试管中,再加蒽酮试剂5mL,快速摇匀,然后在沸水浴中煮10min,取出冷却,在620nm波长下,用空白调零测定光密度,从标准曲线查出淀粉含量(mg)。
四、结果计算:
含量(%)=100*c*VT/V1*1000*w
c——从标准曲线查得淀粉量,mg。
VT——样品提取液总体积,mL。
V1——显色时取样品液量,mL。
w——样品重,g。
0.9——由葡萄糖换算为淀粉的系数。
Ⅱ碘-淀粉比色法
对于淀粉含量较少的植株样品,也可采用碘–淀粉比色法。
淀粉在加热情况下能溶于硝酸钙溶液中,当碘化钾和硝酸钙共存时,碘能以碘–淀粉蓝色化合物沉淀全部淀粉。
将此沉淀溶于碱液,并在酸性条件下与碘作用形成蓝色溶液进行比色。
1.80%硝酸钙溶液。
2.0.5%碘液:
称5.00g结晶碘和10.00g碘化钾,放入研钵混合干研,然后加10mL蒸馏水研至全部碘溶解,将溶液全部转入1000mL容量瓶定容后,贮于磨口试剂瓶。
3.5%含碘硝酸钙溶液:
取10mL80%的硝酸钙溶液,加入160mL水再加入3mL0.5%的碘液混匀,现用现配。
4.标准淀粉溶液:
称取纯淀粉50mg于研钵中,加3mL80%硝酸钙溶液,研细并转移到100mL的三角瓶中,用15mL80%的硝酸钙溶液冲洗研钵,无损地收
集于三角瓶中。
将三角瓶置于沸水浴中煮沸5min,冷却后全部转入50mL容量瓶中并定容。
此液为1mg/mL的淀粉标准液。
5.0.1mol/Lnaoh。
6.0.1mol/Lhcl。
分析天平,研钵,容量瓶,量筒,三角瓶,水浴,小漏斗,电炉,离心机,离心管,试剂瓶。
1.称取1~3g叶片,剪碎放入研钵,加5mL80%的硝酸钙溶液,研磨成糊状移入100mL的三角瓶中,用10mL80%的硝酸钙冲洗研钵,无损地收集于三角瓶中,瓶口盖上小漏斗,在沸水浴上煮沸3~5min(叶片含淀粉少的3min,含淀粉多的5min),使样品中淀粉转变为胶体溶液。
2.给三角瓶中加20mL蒸馏水,混合液转入离心管中离心
(2000~3000rpm)2~3min,将离心后的淀粉胶体浑浊液移入100mL容量瓶(淀粉含量少时,可移入50mL容量瓶),三角瓶及离心沉淀物
用5~10mL热蒸馏水冲洗并同样离心,离心液并入容量瓶中(共洗2~3次)定容,即为淀粉提取液。
3.取5~10mL淀粉待测液,加入到盛有2mL0.5%碘液的离心管中,混匀静置15min后离心(3000rpm)5min,弃上清液。
沉淀用5%的含碘硝酸钙溶液冲洗两次,向冲洗后的沉淀中加入10mL0.1mol/L的naoh混匀,将离心管浸入沸水内5min,使沉淀溶解。
将溶液转入50mL容量瓶中,加入0.3mL0.5%碘液,用30mL左右的水冲洗并入容量瓶,加入2mL1mol/L的盐酸,用水定容并显色,在590nm波长处测定光密度。
4.绘制标准曲线取标准淀粉溶液
(1mg/mL)0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于6个离心管中,用80%硝酸钙溶液将各管的体积补足至5mL,再向各管加入2mL0.5%碘液,混匀静置15min后离心,其他操作同样品测定步骤,显色后在590nm波长下测定光密度。
此系列溶液的淀粉含量分别
为0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mg,然后以光密度为横坐标,以淀粉含量为纵坐标绘制标准曲线。
w——样品重(g)。
III旋光法(谷物淀粉含量的测定)
一、原理:
酸性氯化钙溶液与磨细的含淀粉样品共煮,可使淀粉轻度水解。
同时钙离子与淀粉分子上的羟基络合,这就使得淀粉分子充分地分散到溶液中,成为淀
粉溶液。
淀粉分子具有不对称碳原子,因而具有旋光性,可以利用旋光仪测定淀粉溶胶的旋光度(α),旋光度的大小与淀粉的浓度成正比,据此可以求出淀粉含量。
溶提淀粉溶胶所用的酸性氯化钙溶液的ph值必须保持2.30,密度须为1.30,加时间的长短也要控制在一定范围。
因为只有在这些条件下,各种不同来源的淀粉溶液的比旋度[α]才都是203°
,恒定不变。
样品中其他旋光性物质(如糖分)须预先除去。
二、材料、仪器设备及试剂:
(一)材料:
面粉或其他风干样品
(二)仪器设备:
1.植物样品粉碎机;
2.离心机;
3.分析天平;
4.粗天平;
5.旋光仪及附件;
6.三角瓶;
7.分样筛(100目);
8.布氏漏斗、抽滤瓶及真空泵;
9.离心管;
10.小电炉。
(三)试剂:
三、实验步骤:
1.样品准备:
(1)称取样品:
将样品风干、研磨、通过100目筛,精确称取约
2.5g样品细粉(要求含淀粉约2g,请参考附注估计),置于离心管内。
(2)脱脂:
加乙醚数ml到离心管内,用细玻棒充分搅拌,然后离心。
倾出上清液并收集以备回收乙醚。
重复脱脂数次,以去除大部分油脂、色素等(因油脂的的存在会使以后淀粉溶液的过滤困难)。
大多数谷物样品含脂肪较少,可免去这个脱脂手续。
(3)抑制酶活性:
加含有氯化高汞的乙醇溶液10ml到离心管内,充分搅拌,然后离心,倾去上清液,得到残余物。
(4)脱糖:
加80%乙醇10ml到离心管中,充分搅拌以洗涤残余物(每次都用同一玻棒),离心,倾去下清液。
重复洗涤数次以去除可溶性糖分。
2.溶提淀粉:
(1)加醋酸-氯化钙:
先用醋酸氯化钙溶液约10ml加到离心管中,搅拌后全部倾入25
0ml三角瓶内,再用醋酸氯化钙溶液50ml分数次洗涤离心管,洗涤液并入三角瓶内,搅拌玻棒也转移到三角瓶内。
(2)煮沸溶解:
先用蜡笔标记液面高度,直接置于加有石棉网的小电炉上,在4min~5min内迅速煮沸,保持沸腾15min~17min,立即将三角瓶取下,置流水中冷却。
煮沸过程中要时加搅拌,勿令烧焦;
要调节温度,勿使泡沫涌出瓶外;
常用玻璃将瓶侧的细粒擦下;
并加水保持液面高度。
3.沉淀杂质和定容:
(1)加沉淀剂:
将三角瓶内的水解液转入100ml容量瓶,用醋酸氯化钙溶液充分洗涤三角瓶瓶,并入容量内,加30%Znso41ml混合后,再加15%K4Fe(cn)61ml,用水稀释至接近刻度时,加95%乙醇一滴以破坏泡沫,然后稀释到刻度,充分混合,静置,以使蛋白充分沉淀。
(2)滤清:
用布氏漏斗(加一层滤纸)吸气过滤。
先倾清溶液约10ml于此滤纸上,使其完全湿润,让溶液流干,弃去滤液,再倾清溶液进行过滤,用干燥的容器接受此滤液,收集约50ml,即可供测定之用。
4.测定旋光度:
用旋光测定管装
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