培养基平板用途Word格式.docx

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血琼脂层厚4mm凝固后，抽样置于35c培养18〜24h,如无菌生长，冷藏备用。

【接种】取标本增菌培养物或纯培养物划线接种到平板上，置35c培养1〜2d,

观察结果

【观察结果】在血平板上除可以观察菌落的形态外，还可以判断溶血的情况：

落周围的培养基内红细胞完全被破坏为溶血，菌落周围呈绿色为a

【质量控制】化脓性链球菌，ATCC19615生长良好，-溶血。

肺炎链球菌，ATCC6303为a溶血。

表皮葡萄球菌，ATCC12228生长良好，不溶血。

★巧克力培养基

【用途】主要用于嗜血杆菌的分离，亦可用于奈瑟菌的增菌培养。

【原理】流感嗜血杆菌培养时，需要依赖血液中的X及V因子方能生长繁殖，当培养基加热至80〜90c时，可使血液中的红细胞破裂，以利于嗜血杆菌，奈瑟菌等的生长培养。

凡疑有这些菌种存在的标本，均应接种巧克力平板。

血液标本培养，增菌后又细菌生长，若移种巧克力平板上，有利于分离更多的细菌。

【成分】牛肉浸出液1L蛋白陈10氯化钠5琼脂15无菌脱纤维马血、羊血或兔

血100mlpH7.2〜7.4

【制备】将前四项成分混合，加热溶化，校对pH,高压灭菌（121C15min）后在80〜90c以无菌方法加入血液，摇匀后置90c水浴中。

&

t持该温度15min,使之呈巧克力色取出，至室温冷至约50C,倾制平板。

凝固后，抽样置于35C培养18〜24h,如无细菌生长，冷藏备用。

【接种】将可疑标本直接划线接种于该培养基上，置35c普通培养或置含5%-

10%1氧化碳环境培养18〜24h,取出观察细菌生长状况。

【观察结果】流感嗜血杆菌菌落微小（0.8mm）,无色透明、光滑整齐、似露滴状，48h后达1.5mm从血液或脑脊液中分离的菌落往往形成液状，菌落较大，老培养物菌落中心呈凹陷。

【质量控制】流感嗜血杆菌ATCC10211生长良好，菌落典型。

肺炎链球菌，ATCC6305生长良好，菌落典型。

【保存】置冰箱，1周内用完。

★营养肉汤

【用途】用于一般细菌的增加培养，加入1%勺琼脂粉亦可作营养琼脂。

【原理】该培养基含有氮及微量无机盐，适宜一般细菌的生长繁殖，因此是最基础的培养基。

【成分】牛肉浸液1L蛋白陈10氯化钠5PH7.2〜7.4（牛肉浸液可用3.0g牛肉膏和1L蒸储水代替）

【制备】上述各成分混合溶解，校正pHo分装试管，每管3〜5ml。

高压灭菌（121C15min）,做无菌试验后冷藏备用。

【质量控制】金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、化脓性链球菌均生长良好。

★肉浸液培养基

【用途】供作基础培养用。

营养比肉膏汤好，一般营养要求不高的细菌均可生长。

【原理】牛肉含有丰富的营养物质，如蛋白质、碳水化合物及无机盐类等，通过

水解并用Nacl

【成分】新鲜牛肉500蛋白陈10氯化钠5蒸储水1LpH7.4〜7.6

【制备】1.将新鲜牛肉去除脂肪、肌膜及肌腱，切成小块后用绞肉机绞碎（或用

刀剁碎）。

取500g碎肉，加蒸储水1L,混合后置冰箱中冷浸过夜。

2.将肉浸液取出，煮沸20〜30min（并不断搅拌，以免沉底、烧焦）。

冷后，用绒布或麻布挤压过滤，使所有的肉浸汁尽量挤出。

3.加入蛋白陈、氯化钠，加热溶解，补足蒸发的水分。

矫正Ph至7.4〜7.6。

4.用滤纸过滤，装瓶。

高压灭菌（121c15min）即成肉浸液。

5.与1L肉浸液中加入2〜3g琼脂，即成肉浸液琼脂。

【使用】根据用途不同可以制成营养肉汤，以此为基础制成其他培养基。

如制作固体培养基，加入琼脂1.5〜2端成。

【质量控制】金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、伤寒沙门菌、痢疾志贺菌等均生长良好。

【保存】置冰箱可使用较长时间。

★蛋白月东水

【用途】1.供细菌靛基质（呷深）试验用2.一般细菌培养和传代

【原理】培养基中的蛋白陈含有色氨酸，能被有些细菌利用而成靛基质，与试剂对二甲氨基苯醛缩二呷咪。

而不利用色氨酸的细菌则无此反应，故可鉴别细菌。

因含有陈和氯化钠，故可供一般培养和传代。

【成分】蛋白陈（或胰蛋白陈）10氯化钠5蒸储水1LpH7.2

【制备】将上述成分溶于水中，校正pH,分装试管，每管2〜3ml,至121c灭菌15min备用

【接种】将待检菌接种培养基内，经35c培养18〜24h。

【质量控制】大肠埃希菌，生长极好，靛基质（+）伤寒沙门菌，生长良好，靛基质（-）金黄色葡萄球菌，生长良好，靛基质（-）

★血液增菌培养基

【用途】用于从血液、骨髓中分离常见病原菌。

【成分】牛肉浸液1L际陈或多价蛋白陈10氯化钠5葡萄糖3〜枸檬酸钠3酵母

浸膏3琼脂0.750.75%对氨基苯甲酸5mlpH7.4

【制备】将上述各成分混合校正pHo分装于螺旋盖有橡皮塞可穿刺的瓶，每瓶

50ml。

高压灭菌（121C15min）后，无菌手续加入灭菌硫酸镁（24.65%）溶液1ml。

也可选用各种商品血液培养系统。

★葡萄糖肉汤

【用途】用于血液增菌。

【成分】蛋白陈10氯化钠5肉浸液（或心浸液）1L葡萄糖3枸檬酸钠30.5%对氨基苯甲酸水溶液10ml24.65%MgSO4?

7H2O溶液20ml青霉素酶1000U

【制备】将蛋白陈、氯化钠混合于肉浸液中加热溶解，再加入葡萄糖、枸檬酸钠、对氨基苯甲酸及硫酸镁，继续煮沸5min,并补足失水，调整pH至7.8。

过滤分装于带有反口橡皮塞的玻璃瓶内，每瓶装50ml,高压灭菌115c20min,每瓶加入青霉素酶50U,经无菌试验合格后，冷却备用。

【接种】将采取的血液标本，以无菌手续注入培养液瓶中（血液1ml,培养液10ml）,置35c培养箱内，每日取出观察一次结果。

【观察结果】经35c培养，如有细菌生长，可出现数种不同的表现，应随时做分离培养，可选用血琼脂、EMBt巧克力平板等。

无细菌生长表现的培养瓶，需连续观察7d,仍无细菌生长方可弃去。

在观察的过程中，至于应做2次分离培

养。

【临床经验】1.枸檬酸钠为抗凝剂，使血液加入培养基中不凝固。

2.对氨基苯甲酸能中和血液中磺胺类药物的抑制作用。

3.硫酸镁能破坏血液中存在的四环素、金霉素、新霉素、多粘菌素及链霉素的抑制作用。

4.本培养基近年来有许多改良配方，如加入0.3〜0.5%酵母浸膏以增菌培养；

加0.2%a酸刺激细菌生长；

力口0.1%占液素能被覆于细菌的表面，使细菌免受抗体破坏；

加入SPS可提高检出率。

常用阳性及阴性球菌分离培养基

★甘露醇琼脂

【用途】供致病性葡萄球菌分离培养用。

【原理】根据致病葡萄球菌耐盐性强和发酵甘露醇的两大特性，在25g/L含盐量

的甘露醇琼脂平板上能生长，并形成橙黄色均落，酚红指示剂起显色作用。

而凝固酶阴性葡萄球菌不发酵甘露醇呈现红色菌落。

微球菌及大部分革兰阴性杆菌基本不生长。

因此该平板起选择性分离和鉴别作用。

【成分】际蛋白陈10牛肉膏10氯化钠25琼脂20甘露醇100.2%酚红水溶液

12.5ml蒸储水1LpH7.4

【制备】将上述成分（除甘露醇、酚红外）溶于水中，加热后溶解，校正pH后

加入甘露醇和酚红水溶液，摇匀分装，经115C15min灭菌，待冷却到50c时倾注平皿，凝固后冷藏备用。

【接种】取待检标本或增菌培养物划平板，置35c培养18〜24h。

【观察结果】挑取橙黄色菌落，接种营养琼脂斜面，经培养后做涂片和其他生化鉴定0

【质量控制】金黄色葡萄球菌，生长，菌落呈黄色，直径>

1.0mm表皮葡萄球菌，生长，菌落呈红色，直径〉1.0mm.普通变形杆菌、大肠埃细菌，基本不生长。

【保存】置冰箱内，使用期限2〜3d,如用无菌塑料袋包装可延长使用时间。

★哥伦比亚血琼脂

【用途】供革兰阳性球菌分离用。

【原理】培养基内含有蔡噬酸和黏菌素，对革兰阴性菌有很强的抑制作用。

【成分】胰酪蛋白冻12牛肉蛋白冻15玉米淀粉1氯化钠5黏菌素10mg蔡噬酸15mg琼脂粉12蒸储水1L脱纤维羊血50mlpH7.2〜7.4

【制备】将上述各成分（羊血和抗菌药物除外）充分混合，加热溶解，调pH7.2〜7.5,115C15min灭菌。

待冷至50c时加入脱纤维羊血50ml及黏菌素和紊噬酸

（预先溶于5ml水中）。

混匀，勿使产生气泡。

倾入无菌平皿，凝固后备用。

【接种】取经过增菌的标本或其他标本，直接划种于平板上，置35c24〜48h

观察结果。

【质量控制】配成的培养基应呈鲜红色，冰箱放置后可变为暗红色。

大肠埃希菌，ATCC25923抑制性生长。

肺炎链球菌，ATCC6303生长良好。

化脓性链球菌，ATCC19615生长良好。

★淋病奈瑟菌分离琼脂（GCAgar）

【用途】用于分离培养淋病奈瑟菌（亦可分离培养脑膜炎奈瑟菌））

【原理】因淋病奈瑟菌的繁殖对营养要求较高，标本含杂菌又多，难以分离，所有培养基内必须含有马血、血清及卵黄，以及多种氨基酸、维生素和辅酶等增补剂，如lsovitaleX（BBL）\Vitox（Oxoid）等。

另外，T-M（Thayer-Martin）培养基是在GC®

脂的基础上，添加抗菌药物抑制剂以抑制革兰阳性细菌和真菌的生长，增强其选择性，提高检出率。

【成分】基础琼脂（双倍浓缩）多价陈（Oxiod）15麦淀粉1.0氯化钠

5K2HPO44.0KH2PO41球月旨粉10蒸储水500mlpH7.2增补齐1J2ml/100ml培养基马血（水溶解物）100ml/100ml培养基

【制备】将基础琼脂成分混合溶于水中，煮沸溶解，矫正pH,分装每瓶100ml,

经121

C灭菌15min备用。

临用时将琼脂基础100ml加热熔化，冷却至50c时加入无菌的5%^血水溶液（先欲温50C）100ml,再加入增补剂2ml,倾注平板。

注：

T-M培养基：

取GC®

脂9、（双倍浓度）100ml,加入血红蛋白2%K溶液100ml,增补剂2ml,在倾注平板前加入抗菌药物混合液1ml。

抗菌药物培养基内最终浓度含有发：

TMP5ug/ml万古霉素3ug/ml,多黏菌素7.5ug/ml,制霉菌素12.5ug/ml。

【接种】取病灶部位分泌物（棉拭子），在取样现场迅速直接涂布在平板上，保温到实验室再做4区划线，立即置含10%C氧化碳温箱内，亦可用二氧化碳（或蜡烛缸），注意培养环境的适度，培养1〜d。

【观察结果】菌落较小（0.5〜1.0mm，湿润，光滑，凸起，透明无色成水珠状。

然后做涂片染色镜检和氧化酶等实验等进行鉴定。

【质量控制】使用前必须进行目的菌的生长试验，质量合格者，方可使用。

【保存】置冰箱内，一周内用完。

★中国蓝琼脂

【用途】可抑制革兰阳性细菌，使较好的弱选择性培养基。

【原理】以中国蓝为指示剂，无抑制作用，玫瑰红酸仅能抑制革兰阳性细菌生长，而对大肠杆菌没有抑制作用。

发酵性革兰阴性杆菌因分解乳糖能力不同，在此种

平板上的菌落颜色不同，便于鉴别菌种。

该培养基中不含胆盐，与SS琼脂配对用于粪便中志贺菌和沙门菌的分离是比较合理的。

【成分】牛肉膏5氯化钠5蛋白陈10琼脂15乳糖10蒸储水1L无菌1刈国蓝水溶液3ml1%玫现红酸乙醇溶液3