塞替派残留溶剂分析方法验证药科大学论文Word文档格式.docx

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2.1色谱条件4

2.2溶液配制4

2.3样品测定4

2.4计算5

2.5标准规定5

第三章实验仪器与试剂6

3.1仪器与设备6

3.2实验试剂6

第四章实验色谱条件及溶液配制7

4.1实验色谱条件7

4.2溶液配制7

第五章实验内容与结果8

5.1专属性8

5.2定量限9

5.3检测限10

5.4重复性10

5.5线性11

5.6线性范围内的方法准确度实验14

5.7方法中间精密度16

5.8方法耐用性17

第六章结果20

第七章结论21

第八章讨论21

参考文献22

致谢23

中文摘要

目的：

验证塞替派残留溶剂测定方法。

方法：

用DB-624毛细管柱，照毛细管柱顶空进样程序升温法测定，检测器温度：

250℃，柱温：

40℃，保持5min，以20℃/min程序升温到200℃，进样量：

2μl,载气为N2。

结果：

专属性、定量限、检测限、重复性、准确度、线性、方法中间精密度、方法耐用性等各项都符合预期标准

结论:

该测定方法稳定、正确,可以作为塞替派的残留溶剂测定方法。

关键词：

塞替派/残留溶剂/方法验证

Abstract

Purpose：

Verifythiotepadeterminationofresidualsolvent

Method:

UsingDB-624capillarycolumn,accordingtothecapillarycolumnheadspacesamplingprogramheatingmethod，detectortemperature:

250degreesCelsius，columntemperature:

40degrees,tomaintain5minters,with20degreesCelsius/mintemperatureprogrammedto200degrees,samplevolume:

2μl,carriergasisN2.

Results:

Specificity、Limitofquantitation、.Limitofdetection、Repeatability、Linearity、Degreeofaccurate、Intermediateprecise、MethoddurabilityAndotherstandardsareinlinewithexpectations.

Conclusion:

Theassaymethodisstable,accurate,andcanbeusedasthiotepadeterminationofresidualsolvent

KeyWord:

Thiotepa/residualsolvent/Methodvalidation

第一章绪论

药品中的残留溶剂是指在合成原料药、辅料或制剂生产过程中使用的，但是在工艺中未能完全除去的有机溶剂。

从20世纪90年代起,药物中残留下来的有机溶剂的毒性或致癌作用开始引起国际医药界以及相关的管理部门的关心和重视。

ChP中残留溶剂的要求与人用药品注册技术规范的国际协调（ICH）的要求是相一致的[1]，中国药典规定残留溶剂的检查方法为GC法，可采用填充柱，也可以采用毛细管柱，检测器一般采用火焰离子化检测器（FID）,采用FID时需加尾吹气[2]。

塞替派残留溶剂二氯甲烷、三氯甲烷属于第二类有机溶剂，对人有一定的毒性，应限量使用，而戊烷属于第三类有机溶剂，对人体健康危险性小，GMP或其他质控要求限制使用。

所以对塞替派残留溶剂二氯甲烷、三氯甲烷、戊烷必须进行定量检测，满足GMP或其他质控要求的溶剂残留量限度。

按2015版GMP的要求，残留溶剂测定方法应当且必须进行验证[3]，只有通过了方法验证，才能按照这个方法去检验。

按照ICH对药品中残留溶剂含量的要求及本公司塞替派的生产工

艺，塞替派生产过程中使用到的溶剂包括戊烷、二氯甲烷、三氯甲烷的残留量必须得到严格的控制。

通过查阅相关文献并摸索研究以及实验，确定了塞替派残留溶剂的分析方法，该品种的残留溶剂分析方法为杂质定量方法（外标法）[4]，对该分析方法进行验证内容包括有专属性、定量限、检测限、重复性、中间精密度、线性、方法准确度、方法耐用性[5]。

以上几项验证结果均需符合验证要求。

经过了本次的验证后可以了解塞替派残留溶剂的检测方法是否是合适的正确的以适合于塞替派残留溶剂的限度控制，是否可以用这种方法对塞替派残留溶剂进行检验，从而确保检验数据准确可靠，保证药品质量。

第二章塞替派残留溶剂分析方法

2.1色谱条件

色谱柱：

DB-624毛细管柱

FID检测器，检测器温度：

250℃

进样口温度：

80℃

柱温：

40℃，保持5min，以20℃/min升温至200℃。

载气为N2

分流比为3：

1

流速：

4ml/min

进样量：

2μl

2.2溶液配制

（1）储备溶液

戊烷储备液：

取戊烷适量置50ml量瓶中，用DMF稀释至刻度。

二氯甲烷储备液：

取二氯甲烷适量置50ml量瓶中，用DMF稀释至刻度。

三氯甲烷储备液：

取三氯甲烷适量置50ml量瓶中，用DMF稀释至刻度。

（2）对照溶液

精密量取戊烷储备液、二氯甲烷储备溶液和三氯甲烷储备溶液适量置25ml量瓶中，用DMF稀释至刻度，得到含戊烷50g/ml、二氯甲烷60g/ml和三氯甲烷6g/ml的对照品溶液。

（3）供试溶液

取本品0.5g，2份，精密称定，置5mL的量瓶中，用DMF溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试液（应为1mL中含100mg）。

2.3样品测定

1.空白试验，精密量取DMF2μl，注入气相色谱仪，进样1次。

2.系统适用性试验，精密量取对照液2μl，注入气相色谱仪，连续进样5次。

对照溶液第一针三氯甲烷峰的信噪比（S/N）应不得低于10。

计算5次对照溶液进样中待测溶剂峰面积RSD%应不得超过10%，并用平均值参与残留溶剂含量计算，出峰顺序依次为戊烷、二氯甲烷、三氯甲烷，各相邻峰之间的分离度应大于1.5。

3.供试品试验，精密量取供试品溶液2μl，注入气相色谱仪，每份进样1次。

4.系统确认，供试液进样结束后以及供试溶液连续进样超过6小时的，每隔6小时应追加对照溶液进样1针，计算6次进样（系统适用性5次+系统确认1次）各待测溶剂峰面积的RSD%应不得超过10%。

2.4计算

按公式：

计算，

其中，Ai—供试品溶液中各待测组分峰面积的平均值

Ci—供试品溶液的浓度

As—对照品溶液中各待测组分峰面积的平均值

Cs—对照品溶液中各待测组分的浓度

2.5标准规定

含戊烷应不得过2300ppm，含二氯甲烷应不得过350ppm，含三氯甲烷应不得过60ppm。

第三章实验仪器与试剂

3.1仪器与设备

表1.仪器和设备

名称

型号

编号

厂商

有效期至

气相色谱仪

Agilent7890A

DQYZ46

Agilent

2016.07.20

DQYZ23

2016.11.30

色谱柱

DB-624UI（30m×

0.53mm×

3μm）

USF421126H

/

DB-624（30m×

USD344526H

1μm）

USB1017070

电子天平

BS224S

DTPZ33

Sartorius

2016.06.20

3.2实验试剂

表2.实验试剂

规格

批号

来源

塞替派

API

105141020

公司自制

戊烷

AR

1002008

SCRC

二氯甲烷

20140718

三氯甲烷

20141224

DMF

HPLC

DI840

Honeywell

第4章实验色谱条件及溶液配制

4.1实验色谱条件

表3.实验色谱条件

FID检测器

检测器温度：

进样口温度

80℃

柱温

40℃，保持5min，以20℃/min升温至200℃。

载气

N2

分流比

3：

流速

4ml/min

进样量

2μl

4.2溶液配制

1）储备溶液

戊烷储备液：

精密称量戊烷62mg置于50ml量瓶中，用DMF稀释至刻度，摇匀。

二氯甲烷储备液：

精密称量二氯甲烷75mg置于50ml量瓶中，用DMF稀释至刻度，摇匀。

三氯甲烷储备液：

精密称量三氯甲烷7.5mg置于50ml量瓶中，用DMF稀释至刻度，摇匀。

2）对照溶液

精密量取戊烷储备液、二氯甲烷储备溶液和三氯甲烷储备溶液各1ml置于25ml量瓶中，用DMF稀释至刻度，摇匀，得到含有戊烷50g/ml、二氯甲烷60g/ml和三氯甲烷6g/ml的对照品溶液。

3）供试品溶液

1.精密称量塞替派0.5g，置于5mL的容量瓶中，用DMF溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试液1。

2.精密称量取塞替派0.5g，置于5mL的容量瓶中，用DMF溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试液2。

第五章实验内容与结果

5.1专属性

5.1.1操作过程

1）空白试验，精密量取DMF2μl，注入气相色谱仪，进样1次。

记录图谱20160204001.D。

2）移取戊烷储备液、二氯甲烷储备液、三氯甲烷储备液各量取1ml，分别置于25ml容量瓶中，用DMF稀释定容摇匀,进样量2ul，分别进样1次，记录色谱图20160204002.D、20160204003.D、20160204004.D。

3）取对照品溶液，进样量2ul，进样1次，记录色谱图20160204005.D。

5.1.2数据与结果

表4.专属性数据与结果

单独进样RT（min）

混合进样RT（min）

分离度

3.696

3.692

5.265

5.270

9.6

7.393

7.397

11.2

10.902

10.895

11.3

图1.专属性实验色谱图

v从以上试验可知，本方法所用溶媒DMF不干扰待测溶剂的测定，且相邻溶剂之间的分离度均＞1.5，可以被该方法分离，符合验证预期目标，该方法专属性良好。

5.2定量限

5.2.1进样过程

配制储备溶液及对照溶液，连续进样对照溶液5次。

计算各待测溶剂峰面积的RSD应≤10.0%及计算各待测溶剂峰高与噪声的比值（信噪比），以其信噪比（S/N）在10±

1的样品浓度确定定量限浓度，配制定量限溶液，连续进样3次，其相对于理论样品浓度的比值为定量限。

表5