急性毒性试验 LD的测定Word文档格式.docx

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□参与科研□科技活动√自选实验□素质培养

指导教师及实验技术人员姓名：

李岩

实验项目起止日期：

2013-4-5至2013-5-5

利用何种时间段开展实验：

课余时间

开展实验的累计总学时数：

32学时

实验项目基本原理：

急性毒性试验是临床前新药安全性评价的第一步，与其它毒性实验相比具有简单、经济、易行等特点。

因此新药研究开发时往往通过该项试验，尽可能多的了解一些新药的毒理学特点，为早期判断侯选新药是否具有研究开发价值提供毒性强度资料。

通常测定药物ED50及LD50以初步估计药物毒性大小。

实验项目的实验方法概述：

给不同组的小白鼠腹腔注射不同剂量的戊巴比妥钠，并观察记录各组别小鼠的行为变化，通过比较不同组别小鼠出现死亡的数量来计算LD50。

实验项目的仪器设备组成情况：

天平，1000ul的移液枪，200μl移液枪，2ml离心管，1ml注射器，手术器械（包括剪刀、镊子等），鼠笼，离心管架

实验项目的消耗材料明细：

乳胶手套，KM小鼠,封口膜

实验项目的主要结论：

戊巴比妥钠的半数致死量为134.32mg/kg

用Bliss法计算半数致死量，回归方程y（Probit）=-24.916+14.058Log（D）

半数致死量LD50=134.32mg/kg

LD50（Feiller校正）95%的可信限=92.405--205.57mg/kg

LD5=102.59mg/kg

LD95=175.85mg/kg

二、实验项目技术报告

1．实验原理

戊巴比妥钠属于巴比妥类镇静催眠药，对中枢神经系统有普遍性抑制作用，可起到镇静、催眠、抗惊厥作用。

一定剂量的戊巴比妥钠引起一般实验动物死亡。

半数致死量（LD50）,即在一群实验动物中，能使实验动物一半死亡的药量，其值越大越好。

2．实验内容

（1）探测戊巴比妥钠LD50的剂量范围。

（2）确定组数并计算各组剂量。

（3）正式实验：

给不同组的小白鼠腹腔注射不同剂量的戊巴比妥钠，并观察记录各组别小鼠的行为变化及死亡情况。

（4）记录实验结果，并计算LD50。

3．实验方法：

1、预试溶液配制和样品处理（预实验）

（1）探索剂量范围：

取小鼠9到12只，以3只为一组，分成3到4组，包括组距较大的一系列剂量，按组分别腹腔注射戊巴比妥钠溶液，观察出现的症状并记录动物死亡数，找出引起0及100%有效剂量的所在范围，此即上下限剂量Dn和Dm。

（2）：

确定组数并计算各组剂量

确定组数《G》：

根据适宜的组距确定组数，一般分为5到8个剂量，这里我们分为5组，按等比级数增减

计算各组剂量：

在找出Dm、Dn和确定组数后，课按下列公式求出公比r<

r=lg-1[（lgDm—lgDn）/（G—1）]>

.再按公比计算各组剂量Dl-Dm,其中D1=Dn=最小剂量。

配置等比药液系列，让每只小鼠给药量相等，一般为0.1ml/10g体重

经过预实验的五个剂量浓度分别是77、96、120、150、190mg/kg,相应浓度：

0.77、0.96、1.2、1.5、1.9%，在随后的急性毒实验中对这些剂量进行验证

2、急性毒性试验：

昆明种小鼠共15只，实验前一天晚禁食不禁水，实验当天称重，标记，随机分组。

给5组小鼠分别按77、96、120、150、190mg/kg,腹腔注射，给药后观察动物死亡情况。

记录小鼠死亡时间，死亡数目。

利用Bliss法计算LD50。

分组

动物数（N）

剂量（mg/kg）

对数剂量（X）

动物死亡数（n）

死亡率（P=n/N）

1

2

3

4

5

77

96

120

150

190

1.89

1.98

2.08

2.18

2.28

0％

33.3％

66.7％

100％

表1药物对小白鼠产生效应情况

【实验结果】：

LD50的测定

依据药物剂量依次给药。

利用Bliss法计算LD50

样品名称戊巴比妥钠

实验动物昆明小鼠

给药途径腹腔注射

实验日期2013.5.5

用Bliss法计算半数致死量

--------------------------------------------------------------------------

剂量对数剂量动物数死亡数死亡百分率实验机率单位回归机率单位

（x）（只）（只）（%）（Y）（Y）

771.8865300.00----1.6031

961.9823300.00----2.9495

1202.07923133.004.56974.3119

1502.17613267.005.43035.6742

1902.2788331E2----7.1173

回归方程y（Probit）=-24.916+14.058Log（D）

三、参加开放性实验的体会与建议

四、评价与认定

指导教师评价意见与成绩评定：

实验态度积极认真，并且能够较好的完成实验包含的内容。

试验后积极思考老师提出的问题。

成绩：

指导教师签字：

年月日

院系主管领导审核与学分评定意见：

同意核准该生选修学分数分。

院系主管签字：

学校主管部门审批意见：

部门签章：

备注：