鸡传染性支气管炎研究进展Word格式文档下载.docx
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IB是由传染性支气管炎病毒(IBV引起鸡的一种急性、高度接触性传染病,主要危害鸡呼吸和泌尿生殖道,感染鸡可由于呼吸道或肾脏病变而引起死亡。
耐过鸡生产性能和饲料报酬降低,极易继发细菌感染,因此对本病的研究具有重要意义。
本病最早由Schalk于1930年在美国北科他州发现,随后在世界各地相继发现,自1982年以来,肾型传染性支气管炎在我国广泛流行,目前仍然是威胁集约化养鸡场的主要疫病之一,即使在免疫鸡群中
也时有发生。
1病原学
IBV属于冠状病毒科冠状病毒属,具有囊膜,直径90~200nm,呈不规则形或圆形,表面有长
20nm排列整齐的杆状纤突,似花冠状。
基因组为单股正链RNA,全长约27kb。
其病原血清型众多,同毒株之间又有组织亲嗜性的差异,表现为呼吸型、肾型、肠型、腺胃型等。
化学成分分析发现,IBV的主要结构蛋白有3种,纤突蛋白(S蛋白、膜基质蛋白(M蛋白和核衣壳蛋白(N蛋白,3种结构蛋白分子摩尔比为1∶6∶15。
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簇,N蛋白是病毒内部核衣壳的组成蛋白,S蛋白构成了冠状病毒的最表层纤状突起。
IBV经56℃15min及45℃90min灭活,对乙醚和氯仿极敏感,能被20%的乙醚及5%的氯仿灭活,0.1%去氧胆酸钠4℃作用18h能使IBV完全失去感染性。
1%煤酚、1/10000高锰酸钾、70%酒精和1%福尔马林均可在室温下几分钟内杀死病毒。
不同毒株在pH3时稳定性不同。
2流行病学
本病在世界许多国家均有发生,易感动物主要是鸡,不同品种和品系的鸡对本病的敏感性不同,但是所有年龄的鸡都容易感染,尤其3~26周龄的鸡最易感染。
一年四季均可发生,分布广,传播速度快,发病率和死亡率高,雏鸡死亡率约为15%~30%。
传播途径主要为呼吸道和消化道传染,传染源为病鸡和带毒鸡,从病鸡和带毒鸡呼吸道、粪便排出的病毒经空气、飞沫传染给易感鸡,也可以通过饲养人员、遭受污染的饲料、饮水及用具等经消化道感染本病,通常在48h内出现症状。
3临床症状及病理变化
发病后很快出现幼鸡流鼻涕,发出气管啰音,频繁咳嗽,打喷嚏,精神沉郁,怕冷挤堆,饮水增加,呼吸道症状持续1~4d后消失,鸡群不见异常表现。
随后鸡群突然发病,2~3d内逐渐加剧,病鸡挤堆厌食,排白色稀粪,体重明显减轻,鸡冠和皮肤变暗,肛门周围粘满白色水样粪便,感染幼鸡出现死亡,产蛋鸡群产蛋量下降,部分耐过鸡可逐渐康复。
前期剖检病死鸡可以看到气管和喉头内有多量粘液,气管粘膜充血,肺脏充血,气囊浑浊。
后期病变主要在肾脏,病鸡肾脏肿大、苍白,肾小管和输尿管扩张,里面充满大量白色尿酸盐,整个肾脏外表有许多花纹,呈槟榔样。
切开肾脏有多量白色尿酸盐流出。
严重病例在腹膜、心包膜和胸膜上也有白色尿酸盐沉积,母鸡卵巢发生退行性变化,腹腔内有游离的卵黄样物质,卵巢充血或出血,有的呈紫色。
4诊断
4.1血清学诊断技术自发现IB至90年代初,主要采用血清中和试验(鸡胚气管环培养观测纤毛运动情况、琼脂扩散试验、血凝和血凝抑制试验等常规血清学技术对IB进行诊断。
血清中和试验可用于检测IBV抗体、抗原及分型,虽然方法简便易行,但花费时间长。
琼脂扩散试验用于检测IBV抗体操作简便,但敏感度不高,不适用于免疫后抗体的检测。
血凝和血凝抑制试验可用于检测IBV抗原及抗体,但用不同毒株制成的HI抗原检测抗体时,抗体水平参差不齐。
反向间接血凝试验可用于检测IBV抗原,但可靠性不及中和试验。
王乐元(1993首次成功的建立了检测IBV抗原的间接Dot-ELISA,对IBV抗原的最低检出量为1.36μg/ml,可以作为疫病早期诊断的依据和进行流行病学调查[1]。
王红宁(1996在国内首先采用对流免疫电泳技术对128份人工感染鸡样品进行检测,该方法简便,具有较高的敏感性和准确性,生产场可用此方法进行IB的免疫检测。
刘兴友等(1997建立了胰酶分散抗原间接荧光抗体法,该方法具有良好的特异性,检测程序简单,检测抗原时间短,适合于制备大批量抗原用于临床检测或抗体监测。
王宏俊等(2003将IBVN基因在大肠杆菌中表达,表达产物N蛋白作为ELISA诊断抗原,可用于IBV抗体检测[2]。
4.2分子生物学诊断技术
4.2.1反转录多聚酶链式反应(RT-PCRRT-PCR技术用于IB诊断使诊断技术提高到基因水平,具有简便、快速和敏感性、特异性强的特点。
Jackwook(1992提取了分属于5个血清型的8株IBV的RNA,将其反转录成DNA后,用PCR扩增,然后用一生物素标记的探针进行斑点杂交,结果这8株病毒均被检出。
王林川等(1992率先在我国采用RT-PCR技术检测了广东分离的IBV。
黄勇等(2000对四川分离的多株IBVS1基因和N基因用RT-PCR进行了扩增,结果证明RT-PCR检测方法具有敏感、特异、快速等特点,适用于不同来源及不同血清型IBV的检测。
胡建和等(2003应用设计合成的RT-PCR技术检测鸡传染性支气管炎,特异性强,成本低,检出率高,可有效用于鸡传染性支气管炎的早期检测和流行病学研究[3]。
程晓霞等(2009以IBV疫苗株为模板,建立了检测IBV的RT-PCR方法,对IBV的检测敏感性高、特异性强,可用于IBV感染的诊断和流行病学调查[4]。
刘金朋等(2011根据鸡传染性支气管炎
病毒(IBVN基因序列(FJ767920,利用引物软件Premier5.0,设计并合成了1对特异引物,通过RT-PCR扩增条件的优化,建立了一种快速检测IBV的RT-PCR方法,应用该方法成功地从IBVM41和河南株HN99中扩增出318bp的目的片段,而传染性喉气管炎病毒、新城疫病毒及马立克病毒基因组均未扩增出相应的片段;
将回收的RT-PCR产物克隆到pGEM-TEasy载体后测序,进一步证实RT-PCR检测方法的特异性,对IBV的最低检出量为0.6pg的cDNA;
经初步应用表明,该方法的建立为IBV的早期诊断和临床检测奠定基础[5]。
张琳等(2011根据禽呼肠孤病毒(ARV、禽流感病毒(AIV、新城疫病毒(NDV和鸡传染性支气管炎病毒(IBV的基因保守区设计了4对特异性引物,建立了针对四种病毒的多重PCR检测体系,并对该体系进行了条件优化及特异性、敏感性试验,该体系扩增的四种病毒基因片断大小分别为199bp(ARV、264bp(AIV、362bp(NDV和459bp(IBV,且特异性、敏感性良好,能够检出1pgAIV和10pgARV、NDV、IBV的RNA,临床应用结果证明,该体系具有很高的实用价值和应用前景[6]。
4.2.2核酸探针技术核酸探针技术具有很高的敏感性。
Kwon(1993将此法同电镜(EM观察病毒方法进行了比较,发现此法敏感度比EM高。
刘苹等(1997用地高辛标记IBV标准强毒株M41的S1基因,将标记的S1基因探针与12株已知IBV的RNA提取物进行斑点杂交,结果该探针与12株已知IBV毒株均成阳性反应,而与NDV、IBDV、ILTV、正常胚液、蒸馏水对照均成阴性。
该探针的检测灵敏度为9.77fg,杂交灵敏度为24.41pg,具有很高的灵敏性。
莫胜兰等(2007用该方法检测了38份疑似IBV临床病料,31份阳性,而用RT-PCR法扩增IBVS2基因确诊为阳性的只有29份;
对人工接种IBVH
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弱毒苗鸡咽喉和肛门拭子32份进行检测,检出15份阳性,表明利用DIG探针检测IBV的RT-PCR产物,特异性和敏感性强,可重复,能克服RT-PCR非特异性反应和探针Northern杂交的不稳定性。
4.2.3限制性酶切片断长度多态性分析(RFLP这是一种通过病毒基因限制性酶切图谱进行分型的方法,该法新颖,重复性好,可用于IBV从分子水平上进行了分型。
Kown等(1993对IBVS1基因的RT-PCR扩增产物,经限制性内切酶消化后电泳,根据电泳图谱对25株IBV进行了分类,结果得到了与中和试验相一致的结论。
黄勇等(1996、王林川等(1997、磨美兰等(2001、Jackwood(1997等人均用限制性酶切片段长度多态性分析对IBV进行了分型研究。
4.2.4寡核苷酸指纹图谱分析主要用于IBV的流行病学调查,可区分新的变异株是由当地株变异而来,还是从外地传入的。
尽管该法重复性好、灵敏,可以区分同一血清型不同突变株之间的差异。
但该法只有用于基因序列同源率在95%以上时才有价值。
Butcher等(1990利用此法对DPI毒株10代、100代鸡胚传代物、T株、M41株进行了分析,结果发现这4株图谱都有差别。
该法一般应与其它方法相结合来进行IBV的诊断。
5防治技术
传染性支气管炎病毒血清型众多,新的变异株不断出现,不同血清型之间没有
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