PCR引物流程设计详解知识讲解Word下载.docx
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1、进入NCBI主页,下拉选框选择Nucleotide,在搜索栏输入要查找的目的基因,即IL-4,点击搜索
2、在搜索结果选择灵长类(Homosapiens)
2、在灵长类IL-4基因中选择需要的mRNA序列
3、查看基因的相关信息
外显子区域
CDs区域
4、点击FASTA格式,并将序列保存到文档
二、使用primerpremier5.0设计引物
1、建立新文件,将所得的序列复制进输入框内
2、点击搜索按钮,搜索引物
3、设置引物设计参数(因为在之前查找基因序列的时候获知,外显子区域分别为:
1-200、201-248、249-425、426-618,又知在引物设计时引物位置最好跨越一个内含子,PCR产物长度通常为100-150bp,故设定上游引物位置为201-248,下游引物位置为249-425,产物长度为100-150bp)
4、确认条件后,显示搜索结果
4、双击选中得分最高的引物查看引物情况
(上图为上游引物情况,下图为下游引物情况)
5、将设计的上下游引物复制出来,保存到文档中
三、使用oligo6.0对设计的引物进行评价
1、建立新文件,将从cnki上获得的cDNA复制进输入框,并点击accept接收
2、接收后显示出该序列的相关信息
3、点击edit按钮录入用primer设计的上游引物,每一次输入新数据后都需要点击accept按钮接收
4、同理,录入下游引物
5、分析上下游引物二聚体形成情况
6、分析上下游引物发卡形成情况
7、
8、PS:
消费者分析分析上下游引物GC%
9、
10、附件
(一):
检测上下游引物与PCR模板其它位置错配情况
5、就业机会和问题分析
是□否□
11、分析PCR整体情况
当然,在竞争日益激烈的现代社会中,创业是件相当困难的事。
我们认为,在实行我们的创业计划之前,我们首先要了解竞争对手,吸取别人的经验教训,制订相应竞争的策略。
我相信只要我们的小店有自己独到的风格,价格优惠,服务热情周到,就一定能取得大多女孩的信任和喜爱。
(1)政策优势
四、
五、可见“体验化消费”广受大学生的欢迎、喜欢,这是我们创业项目是否成功的关键,必须引起足够的注意。
引物特异性检验(primerblast)
1、进入NCBI主页,并选择blast
2、选择primerblast
经常光顾□偶尔会去□不会去□
3、
4、300元以下□300~400元□400~500□500元以上□在输入框内输入模板序列和上下游引物,并设定对比数据库,点击getprimer进行对比
5、查看blast结果
与此同时,上海市工商行政管理局也对大学生创业采取了政策倾斜:
凡高校毕业生从事个体经营的,自批准经营日起,1年内免交登记注册费、个体户管理费、集贸市场管理费、经济合同鉴证费、经济合同示范文本工本费等,但此项优惠不适用于建筑、娱乐和广告等行业。
Blast结果显示,尽管IL-4与其它基因有相似区,但是引物的3’端没有完全互补。
故设计的引物能特异性的扩增出目的基因
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