天然药物化学实验指导书详解Word文档格式.docx
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一、实验目的:
1.了解显微镜的基本构造并掌握显微镜的正确使用方法和保养。
2.掌握撕取表皮的制片方法。
3.掌握植物细胞的基本构造。
二、实验仪器与材料
1.仪器:
生物显微镜。
2.用具:
镊子、刀片、解剖针、载玻片、盖玻片、玻璃皿、吸水纸、擦镜纸、棉布块。
3.材料:
洋葱鳞茎的磷叶或大葱磷叶。
4.试液:
蒸馏水、稀碘液、10%硝酸钾溶液。
三、实验内容:
(一)显微镜的构造
1.机械部分次部分是显微镜的骨架,是安装光学部分的基座。
包括:
镜座、镜柱、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调焦装置等。
(1)基座是显微镜的底座,支持整个镜体,使显微镜放置平稳。
(2)基柱镜座上面直立的短柱,支持镜体上部的各部分。
(3)镜臂弯曲如臂,下连镜柱,上连镜筒,为取放镜体时手握的部分。
直筒显微镜的镜臂下端与镜柱连接处有一活动关节,可使镜体在一定范围内后倾,便于观察。
(4)镜筒上端置目镜,下端与物镜转化器相连。
(5)物镜转换器连接于镜筒下端的圆盘,可自由转动,盘子有3-4个安装物镜的螺旋孔。
当旋转转换器时,物镜即可固定在使用的位置上,保证物镜与目镜的光线合轴。
(6)载物台放置玻片标本的平台,中央有一通光孔,两侧有压片夹或机械移动器,既可固定玻片标本,也可以前后左右各方向移动。
(7)调焦装置调节物镜和标本之间的距离,得到清晰的物像。
在镜臂两侧有粗细调焦螺旋各1对,旋转时可使镜筒上升或下降,大的一对为粗调焦螺旋,旋转一圈可使镜筒移动2mm左右。
小的一对为细调焦螺旋,旋转一圈可使镜筒移动0.1mm。
(8)聚光器调节螺旋镜柱一侧,旋转它时可使聚光器上下移动,借以调节光线德鄂强弱。
2.光学部分包括:
物镜、目镜、反光镜、聚光器
(1)物镜安装在镜筒前端物镜转化器上的透镜。
利用光线使被检标本第一次成像,因而直接关系和影响成像的质量,对分辨力有着决定性的影响。
物镜分为低倍、高倍、油浸物镜。
物镜放大倍数愈高,物镜下面透镜的表面与盖玻片的距离愈小,所以使用时应该特别注意。
(2)目镜安装在镜筒上端,可使物镜的成像进一步放大。
目镜上刻有放大倍数,如5×
、10×
、16×
等。
(3)反光镜普通光学显微镜的取光设备。
圆形两面镜,一面平面镜,能反光,另一面为凹面镜,有反光和汇集光线的作用。
(4)聚光器安装在载物台下,由聚光镜和彩虹光圈组成,作用是将光源经过反光镜反射来的光线聚集于标本上,从而得到较强的照明,使物像获得明亮清晰的效果。
聚光器可以上下调节,以改变视野的亮度,使焦点落在被检标本上,从儿得到适度亮度。
彩虹光圈可以放大或缩小,以此来影响成像的分辨力和反差。
调节操作杆,可调节光圈大小,控制通光量。
(二)显微镜的使用方法
1.取镜和放置取镜时应右手握住镜臂,左手平托镜座,保持镜体直立,严禁用单手提镜走,防止某些光学部分脱落损坏。
2.对光
3.低倍镜的使用观察任何标本都必须先用低倍镜,因为低倍镜的视野大,容易发现目标和确定要观察的部位。
(1)放置切片
(2)调节焦距(3)低倍镜的观察
4.高倍镜的使用在低倍镜下选好目标,转动物镜转换器,高倍观察(因高倍镜工作距离很小,操作要格外小心,防止镜头碰见玻片)。
正常情况下,只要调节细调螺旋,即可见到清晰的物像。
5.油镜的使用
6.显微镜使用后整理观察结束后,应先升高镜筒,取下玻片,转动物镜转换器,使物镜镜头与通光孔错开,并将反光镜直立。
(三)显微镜的保养
防潮、放热、防腐蚀、防撞击
注意:
不能用手指或纱布等粗糙物擦试镜头,必须用试镜纸轻擦或用镜头毛刷拂取灰尘。
(四)植物学基本实验技术及细胞的基本结构
1.洋葱内表皮细胞的制片
取洋葱磷茎,镊取3-5mm大小的内表皮,放于加蒸馏水的载玻片上,用解剖针展平,将盖玻片沿水滴一侧慢慢盖下,防止产生气泡,用吸水纸沿盖玻片一侧吸掉多余的水分。
2.观察洋葱内表皮细胞基本构造
将制好的洋葱内表皮装片置于显微镜下观察,洋葱内表皮细胞为长方形,排列紧密,没有细胞间隙。
换用高倍镜可见:
细胞壁、细胞质、细胞核和液泡
(1)细胞壁是植物细胞所特有的结构。
洋葱表皮细胞的细胞壁为无私透明的,镜下可见初生壁和相邻细胞所共有的胞间层。
(2)细胞质年幼细胞中,细胞质呈现细小颗粒分布均匀,细胞核位于中央;
成熟细胞中,细胞质为紧贴细胞壁的薄薄一层,细胞核位于边缘。
(3)细胞核为半透明且有较强折光性的小物体。
细胞核内可见1-3个核仁。
(4)液泡年幼细胞中,液泡分散存在,成熟细胞中一个大液泡占据细胞中央绝大部分,细胞质、细胞核则靠近细胞壁边缘。
3.碘试液染色观察
装片盖玻片一侧滴稀碘液,进行洋葱内表皮细胞染色,观察可见细胞核呈深黄色,细胞质呈浅黄色,液泡未染色。
4.细胞的质壁分离
在显微镜下观察完细胞的正常形态后,用吸水纸在盖玻片的一测将清水吸去,而同时在盖玻片的相反一侧用滴管滴加10%硝酸钾溶液,注意观察细胞中的变化,可见到原生质体,开始由细胞角隅脱离细胞壁,而后逐渐脱离全部细胞壁,最后整个原生质体缩成球形一团,这就是质壁分离现象。
四、作业
1.写出显微镜各部分构造的名称
2.绘制洋葱表皮细胞图及质壁分离图
3.为什么植物细胞会出现质壁分离现象?
这种现象在生产实践中有什么意义?
实验二植物细胞后含物——淀粉粒、草酸钙结晶体
1.掌握中草药粉末的临时制片方法。
2.掌握淀粉粒的形态、结构、类型和检识方法。
3.掌握草酸钙结晶体的形态、类型和检识方法。
1.仪器:
生物显微镜
2.用具:
镊子、解剖针、牙签、载玻片、盖玻片、玻璃皿、吸水纸、火柴、擦镜纸、棉布块、酒精灯、刀片。
3.材料:
马铃薯块茎、小麦粉、大黄粉末、半夏粉末、甘草粉末、牛膝粉末。
4.试液:
蒸馏水、水合氯醛试液、稀甘油、稀碘液、甘油、醋酸液、酒精。
三、实验内容:
(一)淀粉粒的观察
1.观察马铃薯块茎的淀粉粒
(1)操作:
取马铃薯块茎一小块,用刀片刮取少许汁液,置于载玻片水滴中,滴稀甘油一滴,加盖玻片,制成临时装片,置显微镜下观察。
(2)观察:
可见到各种大小且成卵圆形或椭圆形颗粒状的淀粉粒。
每一个淀粉粒中,可见到明暗交替的层纹,在层纹围绕的中心有一个特别明亮的脐点,脐点位于卵圆状淀粉粒较窄的一端。
马铃薯淀粉粒多为单粒淀粉,且脐点多为偏心型,少有复粒淀粉,偶见半复粒淀粉。
在观察过的淀粉粒装片上,加一滴碘液于盖玻片的一边,使碘液逐渐进入盖玻片下,立即在显微镜下观察,淀粉粒变成蓝紫色。
2.观察半夏粉末、小麦粉末的淀粉粒时,取粉末少许,置载玻片上的水滴中,加盖玻片,制成临时水装片,放在显微镜下观察,注意淀粉粒的形状、大小及脐点的形状。
(二)草酸钙结晶体的观察
实验方法:
采用中草药粉末的临时制片法。
此法适用于干燥中草药粉末,即取药材粉末少许,放在载玻片的中央,滴加水合氯醛溶液2~3滴,用解剖针调和均匀,在酒精灯上以小火微微加热约1分钟,到江津煮沸为止(可反复加热三次),加热过程中,由于蒸发的关系可随时添加水合氯醛溶液,以免蒸干,待载玻片冷却时,再加稀甘油1~2滴,用解剖针拌匀,加盖玻片,制成临时装片。
1.簇晶:
取大黄根茎粉末的水合氯醛透化片,置显微镜下观察,可见分散的大型星状结晶,是由许多三棱形结晶的基部集合而成。
2.方晶:
取甘草根粉末(或黄柏粉末)的水合氯醛透化片,置显微镜下观察,可见纤维束旁侧的薄层细胞中含有方晶,其形状有方形、棱形、八面体或长方形。
3.针晶:
取半夏球茎粉末的水合氯醛透化片,置显微镜下观察,可见细针状结晶,呈束状存在于粘液细胞中。
4.砂晶:
取牛膝根粉末的水合氯醛透化片,置显微镜下观察,可见随处散在的略呈箭头形的极细结晶,有的薄层细胞内充满砂晶。
1.绘制马铃薯块茎中观察到的淀粉粒,并注明脐点和层纹。
2.绘制半夏、小麦淀粉粒各3~5粒。
3.绘制大黄簇晶、甘草方晶、半夏针晶、牛膝砂晶图。
实验三保护组织和分泌组织
一、实验目的
1.掌握气孔、腺毛、非腺毛、油细胞及油室的特征。
2.掌握撕取表皮及徒手切片的方法。
3.熟悉乳管、树脂道的形状特征。
镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、玻璃皿、吸水纸、火柴、擦镜纸、棉布块、酒精灯、刀片、毛笔。
薄荷叶、生姜、桔皮、人参粉末。
蒸馏水、水合氯醛试液、稀甘油、酒精。
三、实验内容
1.观察薄荷叶中的直轴式气孔、腺毛、腺鳞、非腺毛
采用撕取表皮法。
用镊子撕取薄荷叶的下表皮一小片,将外表皮向上,置于载玻片上的蒸馏水中,展平,加盖玻片。
将制好的标本片置显微镜下观察,可见:
①表皮细胞及气孔:
可见表皮是由多数不规则的细胞镶嵌连接而成,细胞壁呈波状弯曲,细胞内不含叶绿体。
表皮细胞之间有一些小孔,每一小孔由两个肾形的保卫细胞对合而成,此孔即为气孔。
保卫细胞中含叶绿体,与保卫细胞相连的表皮细胞为副卫细胞。
气孔轴式多为直轴式。
②腺毛:
腺毛较小,由单细胞的腺头和单细胞的腺柄构成,腺头细胞中常充满黄色挥发油。
③腺鳞:
腺鳞较多,腺头大而明显,扁圆球形,常由8个分泌细胞组成,角质层囊内贮有黄色挥发油,腺柄极短,为单细胞。
④非腺毛:
非腺毛较大,顶端尖锐,由3~8个细胞单列构成,也有单细胞的,细胞壁较厚。
如果上述观察效果不好,可将标本片的盖玻片取下,用吸水纸吸取蒸馏水,然后加水合氯醛试液一滴,微热透化,用稀甘油装片观察。
2.观察生姜根茎中的油细胞
操作方法:
采用徒手切片法:
此法操作简便迅捷,能保持细胞及其含有物的原有形态,且利于进行各种显微化学反应。
将姜的根状茎切成长和宽各0.5cm,高1~2cm的长方条,用左手的拇指和食指捏紧,拇指略低于食指,长方条上端露出1~2mm,两臂夹紧,刀片放平,刀口朝向怀内,从材料的左前方向右后方作水平方向的连续拉切,拉切时速度宜快,要用臂力。
切下的薄片应尽快用毛笔刷入盛水的玻璃皿中,选择其中最薄者用蒸馏水装片。
将制好的标本片置显微镜下观察,可见薄壁组织中,有些细胞较大,充满淡黄色油滴,散在或成群,即是油细胞。
3.观察桔皮中的油室
采用徒手切片法。
取桔皮横切薄片,制成水装片或水合氯醛液微热透化装片,置显微镜下观察,可见一些大而椭圆形的腔隙,其周围有被溶解破坏的分泌细胞,该腔隙就是油室。
4.观察人参中的树脂道
取人参粉末,制成水合氯醛透化片,置显微镜下观察,树脂道碎片呈管状,内含黄色滴状或块状分泌物。
1.绘制薄荷叶表皮中的气孔、非腺毛、腺毛、腺鳞。
2.绘制生姜根状茎中的油细胞。
3.绘制桔皮中的油室。
4.绘制人参中的树脂道。
实验四机械组织和输导组织
1.掌握机械组织纤维、石细胞的特征。
2.了解导管和管胞,筛管和伴胞的形状。
镊子、刀片、解剖针、载玻片、盖玻片、玻璃皿、酒精灯、火柴、吸水纸、擦镜纸、棉布块。
肉桂粉末、甘草粉末、红梨、薄荷茎
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