乙酰半胱氨酸分析Word文档格式.docx
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全部溶化或轻微浑浊,不得有异物
装量差异
中国药典2010年版二部附录ⅠN颗粒剂-装量差异(SOP/YC005-01-01装量差异)
符合规定
有关物质
HPLC法(SOP/YC005-01-01有关物质)
L-胱氨酸(杂质A)、L-半胱氨酸(杂质B)、N,S-二乙酰-L-半胱氨酸(杂质D)的量均不超过0、5%,N,N’-二乙酰-L-胱氨酸(杂质C)的量不超过0、5%,杂质总量不得过1、0%
L-胱氨酸(杂质A)、L-半胱氨酸(杂质B)、N,S-二乙酰-L-半胱氨酸(杂质D)的量均不超过0、5%,N,N’-二乙酰-L-胱氨酸(杂质C)的量不超过1、0%,杂质总量不得过1、5%
微生物限度
中国药典2010年版二部附录ⅪJ微生物限度检查法(SOP/YC005-01-01微生物限度检查)
细菌数≤1000个/g,霉菌与酵母菌数≤100个/g,大肠埃希菌不得检出
含量
HPLC法(SOP/YC005-01-01含量测定)
95、0%~105、0%
90、0%~110、0%
1性状
本品应为可溶性细颗粒;
气芳香,味酸甜。
1、2鉴别
(1)取本品适量(约相当于乙酰半胱氨酸0、2g),加水20ml溶解,用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6、5,并用水稀释至40ml,作为供试品溶液;
另取乙酰半胱氨酸对照品0、2g,同法制备作为对照品溶液。
照薄层色谱法(附录ⅴB)试验,吸取上述两种溶液各5µ
l,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水(4:
1:
5)混合并平衡10分钟的上层液为展开剂,展开后,取出,在热气流下吹干,再于碘蒸气中显色,供试品溶液所显主斑点的位置与颜色应与对照品溶液的主斑点相同。
(2)HPLC法:
在含量测定项下记录的色谱图中,供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
以上
(1)、
(2)两项可选做一项。
1、3检查
检查方法:
取本品,加水制成10%的溶液,依法测定(2010年版二部附录ⅥH),pH值应为2、0~3、0。
取本品,在70℃干燥4小时,减失重量不得过2、0%(2010年版二部附录ⅧL)。
取供试品10g,加热水200ml,搅拌5分钟,可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊,但不得有异物。
应符合规定(2010年版二部附录ⅠN颗粒剂-装量差异)。
HPLC法
色谱条件:
色谱柱:
C18
流动相:
硫酸铵缓冲液(取硫酸铵5、00g、庚烷磺酸钠4、04g,用水稀释至1000ml,用7mol/L的盐酸溶液调节pH值至2、0):
甲醇(93:
7)
柱温:
30℃检测波长:
205nm
流速:
1、0ml/min进样体积:
10µ
l
理论塔板数:
按乙酰半胱氨酸峰计算不低于1000。
测定法:
取含量测定项下的细粉适量(约相当于乙酰半胱氨酸25mg),精密称定,置50ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,作为供试品溶液;
精密量取供试品溶液1ml,置100ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为自身对照溶液;
另取胱氨酸(杂A)对照品与半胱氨酸(杂B)对照品适量,精密称定,(杂A需加1M盐酸使溶解),加流动相分别溶解稀释制成每1ml中约含有2、5μg的溶液,摇匀,作为杂质A,杂质B对照溶液;
取自身对照溶液20μl注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分峰的峰高约为满量程的20%;
精密量取杂A与杂B对照溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图;
再精密量取供试品溶液20μl,注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分保留时间的5倍。
供试品溶液色谱图中,如有与杂A与杂B保留时间一致的色谱峰,按外标法以峰面积计算,均不得过0、5%;
杂C的峰面积(杂C相对保留时间约为1、6)除以校正因子(校正因子=1、21)之后不得大于自身对照溶液的主峰面积1、0倍(1、0%),杂D的峰面积(杂D相对保留时间约为1、8-2、0)除以校正因子(校正因子=0、78)之后不得大于自身对照溶液的主峰面积的0、5倍(0、5%),各杂质峰面积的与不得大于自身对照溶液主峰面积的1、5倍(1、5%)。
计算公式:
AX×
CR×
Vx×
W×
R
杂A/杂B(%)=—————————×
100%
AR×
MX×
K
式中:
AX为供试品溶液相应杂质的峰面积;
AR为杂质对照溶液的主峰面积;
MX为供试品的称取量,mg;
CR为杂质对照品的浓度,mg;
R为杂质对照品自身的含量;
W为平均袋重,mg;
K为每袋的标示含量,mg。
AX
杂质C(%)=—————×
1%
1、21×
AR
AX为杂质C的峰面积;
AR为自身对照溶液的主峰面积;
杂质D(%)=—————×
0、78×
式中:
AX为杂质D的峰面积;
AX
其她单个杂质(%)=———×
AR
AX为供试品溶液其她单个杂质的峰面积;
AR为自身对照溶液的主峰面积;
杂质总与(%)=杂A(%)+杂B(%)+杂C(%)+杂D(%)+其她单个杂质的与(%)
微生物限度
含量测定
0、05mol/L磷酸氢二钾溶液(用稀磷酸调节pH值3、0)
214nm
20µ
测定法:
取本品10袋,将内容物全量转移至500ml量瓶中,加焦亚硫酸钠溶液(1→2000)适量,振摇使溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取25ml,置100ml量瓶中,用焦亚硫酸钠溶液(1→2000)稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液;
精密量取20μl注入液相色谱仪,记录色谱图。
另取乙酰半胱氨酸对照品约50mg,精密称定,置100ml量瓶中,加焦亚硫酸钠溶液(1→2000)溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液,同法测定。
按外标法以峰面积计算,即得。
AX×
MR×
R×
VX
含量(%)=————————×
VR×
式中:
AX为供试品溶液的峰面积;
AR为对照品溶液的峰面积;
MR为对照品的称取量,g;
VR为对照品稀释体积,ml;
VX为供试品稀释体积,ml;
R为乙酰半胱氨酸对照品的含量;
K为乙酰半胱氨酸颗粒的规格,g。
分析方法的验证
按照《化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则》、《化学药物质量标准建立的规范化过程技术指导原则》、《化学药物杂质研究技术指导原则》、《化学药物残留溶剂研究技术指导原则》以及2010年版《中华人民共与国药典》附录中有关的指导原则提供方法学验证资料,进行方法学验证,结果如下:
含量测定方法学验证结果
项目
验证结果
专属性
空白辅料基本无干扰
线性与范围
在108、44µ
g/ml~1084、40µ
g/ml范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系,R=0、9998
定量限、检测限
主成分的定量限为0、856ng,峰面积的RSD%=2、75,保留时间的RSD%=0、76
准确度
在80%~120%浓度范围内,回收率为:
99、21%-104、75%,平均回收率为101、74%,RSD为1、77%
精密度
重复性:
平均值为99、95%,RSD为0、61%
中间精密度:
平均值为99、93%,RSD为0、06%
溶液稳定性
测试液在5小时内稳定
耐用性
参数的微小调整对结果均无显著影响
方法的确定
参考乙酰半胱氨酸颗粒(中国药典2010版第二部)的含量测定方法,照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录VD)对本品的含量测定条件进行了试验。
色谱条件与系统适用性试验:
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;
以0、05mol/L磷酸氢二钾溶液(用稀磷酸调节pH值3、0)为流动相;
检测波长为214nm。
理论板数按乙酰半胱氨酸峰计算不低于1000。
取本品10袋,将内容物全量转移至500ml量瓶中,加焦亚硫酸钠溶液(1→2000)适量,振摇使溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取25ml,置100ml(0、1g规格)或200ml(0、2g规格)量瓶中,用焦亚硫酸钠溶液(1→2000)稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液;
仪器、试剂及色谱条件
仪器:
岛津SPD-10AVP紫外可变波长检测器
岛津LC-10ATVP高压恒流泵
HW2000色谱工作站
试剂:
磷酸氢二钾分析纯南京化学试剂有限公司
水纯化水自制
磷酸分析纯南京化学试剂有限公司
焦亚硫酸钠分析纯国药集团
C18柱,5μm,4、6mm×
250mm;
流动相:
0、05mol/L磷酸氢二钾溶液(用稀磷酸调节pH值3、0);
检测波长:
214nm;
流速:
1、0ml/min;
检测波长的确定
取乙酰半胱氨酸对照品适量,精密称定,用焦亚硫酸钠溶液(1→2000)稀释制成每1ml含乙酰半胱氨酸10μg的溶液;
照紫外-可见分光光度法(中国药典2010版二部附录ⅣA),于190nm~400nm扫描,结果发现乙酰半胱氨酸对照品为末端吸收。
参照乙酰半胱氨酸颗粒质量标准(中国药典2010年版二部),选用214nm为含量的测定波长。
见附件5,第1页。
空白辅料干扰
称取处方量空白辅料约0、225g,置50ml量瓶中,用焦亚硫酸钠溶液(1→2000)溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为空白辅料溶液。
取空白辅料溶液20μl注入液相色谱仪,记录谱图。
见附件5,第2、3页。
结果显示:
空白辅料不干扰本品含量的测定。
含量测定线性试验
精密称取乙酰半胱氨酸对照品27、11mg,精密称定,置25ml容量瓶中,加焦亚硫酸钠溶液(1→2000)溶解并稀释至刻度、摇匀,作为贮备液。
分别精密量取贮备液适量置合适量瓶中,用焦亚硫酸钠溶液(1→2000)稀释制成一系列浓度的供试品溶液,分别精密吸取供试品溶液及贮备液各20μl注入液相色谱仪,记录色谱图。
以峰面积为纵坐标(Y),对照品浓度(mg/ml)为横坐标(X),绘制标准曲线。
图谱见本资料附图第15-20页,结果见表1。
表1乙酰半胱氨酸颗粒含量测定线性试验
浓度
(µ
g/ml)
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- 乙酰 半胱氨酸 分析