USP71-无菌检查法Sterility-Tests.docx
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USP<71>无菌检查法SterilityTests
无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药物、制剂产品和其他物品是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
Thetestisappliedtosubstances,preparations,orarticleswhich,accordingtothePharmacopeia,arerequiredtobesterile.However,asatisfactoryresultonlyindicatesthatnocontaminatingmicroorganismhasbeenfoundinthesampleexaminedundertheconditionsofthetest.
1预防微生物污染
PrecaotionsAgainstMicrobialContamination
无菌检查应在无菌条件下进行,为了达到条件,检测环境应符合无菌检查的规定。
防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
检测环境应定期抽样监测并进行适当控制。
Thetestforsterilityiscarriedoutunderasepticconditions.Inordertoachievesuchconditions,thetestenvironmenthastobeadaptedtothewayinwhichthesterilitytestisperformed.Theprecautionstakentoavoidcontaminationaresuchthattheydonotaffectanymicroorganismsthataretoberevealedinthetest.Theworkingconditionsinwhichthetestsareperformedaremonitoredregularlybyappropriatesamplingoftheworkingareaandbycarryingoutappropriatecontrols.
2培养基和培养温度
CultureMediaandIncubation
无菌检查需制备下表所述培养基,或者是能够符合需氧菌、厌氧菌、真菌促生长试验要求的同等的商用培养基。
MediaforthetestmaybepreparedasdescribedbeloworequivalentcommercialmediamaybeusedprovidedthattheycomplywiththerequirementsoftheGrowthPromotionTestofAerobes,Anaerobes,andFungi.
以下培养基已经被证实适合用于无菌检查。
硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养,但其也可用于需氧菌培养。
大豆酪蛋白培养基适合于培养真菌和需氧菌。
Thefollowingculturemediahavebeenfoundtobesuitableforthetestforsterility.FluidThioglycollateMediumisprimarilyintendedforthecultureofanaerobicbacteria.However,itwillalsodetectaerobicbacteria.Soybean–CaseinDigestMediumissuitableforthecultureofbothfungiandaerobicbacteria.
将L-胱氨酸、氯化钠、葡萄糖、酵母提取物、酪蛋白胰酶消化物与纯化水混合,并加热至溶解。
将硫乙醇酸钠或硫乙醇酸溶解于该溶液,如果需要可再加入1mol/L氢氧化钠溶液,以便在灭菌后该溶液呈pH值7.1±0.2。
如需要过滤,再次加热该溶液但不得煮沸,并趁热以润湿滤纸将该溶液过滤。
加入刃天青钠溶液,混匀,并将该培养基置于适当容器中,该容器应为培养基提供特定的面积/深度比,以使在培养期结束后能明确显示氧气摄入的变色部分不超过培养基的上半部分二分之一。
使用经过验证的工艺进行灭菌。
如果需要贮存该培养基,应将其置于无菌、气密容器中,在2~25℃贮藏。
如果超过上部三分之一的培养基已经呈粉红色,可以用以下方法恢复该培养基功能,但每批培养基仅能恢复一次:
在水浴锅中或者自由流动蒸汽中加热该容器,直至粉色消失,并迅速放凉,须小心防止非无菌空气进入到容器中。
灭菌后培养基存放时间超过验证期限时,不得使用。
MixtheL-cystine,agar,sodiumchloride,dextrose,yeastextract,andpancreaticdigestofcaseinwiththepurifiedwater,andheatuntilsolutioniseffected.Dissolvethesodiumthioglycollateorthioglycolicacidinthesolutionand,ifnecessary,add1Nsodiumhydroxidesothat,aftersterilization,thesolutionwillhaveapHof7.1±0.2.Iffiltrationisnecessary,heatthesolutionagainwithoutboiling,andfilterwhilehotthroughmoistenedfilterpaper.Addtheresazurinsodiumsolution,mix,andplacethemediuminsuitablevesselsthatprovidearatioofsurfacetodepthofmediumsuchthatnotmorethantheupperhalfofthemediumhasundergoneacolorchangeindicativeofoxygenuptakeattheendoftheincubationperiod.Sterilizeusingavalidatedprocess.Ifthemediumisstored,storeatatemperaturebetween2℃and25℃inasterile,airtightcontainer.Ifmorethantheupperone-thirdofthemediumhasacquiredapinkcolor,themediummayberestoredoncebyheatingthecontainersinawater-bathorinfree-flowingsteamuntilthepinkcolordisappearsandbycoolingquickly,takingcaretopreventtheintroductionofnonsterileairintothecontainer.Donotusethemediumforalongerstorageperiodthanhasbeenvalidated.
硫乙醇酸盐流体培养基
FluidThioglycollateMedium
L-胱氨酸L-cystine
0.5g
氯化钠SodiumChloride
2.5g
水合葡萄糖/无水葡萄糖DextroseMonohydrate/Anhydrous
5.5/5.0g
琼脂Agar
0.75g
酵母提取物(水溶的)YeastExtract(water-soluble)
5.0g
胰酶消化酪蛋白胨PancreaticDigestofCasein
15.0g
硫乙醇酸钠SodiumThioglycollate
0.5g
或硫乙醇酸orThioglycolicAcid
0.3ml
新配制的刃天青水溶液(1:
1000)
ResazurinSodiumSolution(1in1000),freshlyprepared
1.0ml
纯化水PurifiedWater
1000ml
灭菌后pH:
7.1±0.2
pHaftersterilization:
7.1±0.2.
硫乙醇酸盐流体培养基应在30~35℃条件下进行培养。
含有汞制剂防腐剂的产品不能使用膜过滤方法检测。
经需氧菌、厌氧菌、真菌促生长试验验证,在20~25℃培养时,大豆酪蛋白消化培养基可以替代硫乙醇酸盐流体培养基。
经合理授权,不含琼脂和刃天青钠溶液配制的硫乙醇酸盐流体培养基可以替代硫乙醇酸盐流体培养基使用。
按上述方法灭菌,灭菌后pH值为7.1±0.2。
使用前使用水浴加热,置于30~35℃厌氧条件下培养。
FluidThioglycollateMediumistobeincubatedat30–35℃.Forproductscontainingamercurialpreservativethatcannotbetestedbythemembranefiltrationmethod,FluidThioglycollateMediumincubatedat20–25℃maybeusedinsteadofSoybean–CaseinDigestMediumprovidedthatithasbeenvalidatedasdescribedinGrowthPromotionTestofAerobes,Anaerobes,andFungi.Whereprescribedorjustifiedandauthorized,thefollowingalternativethioglycollatemediummightbeused.PrepareamixturehavingthesamecompositionasthatoftheFluidThioglycollateMedium,butomittingtheagarandtheresazurinsodiumsolution.Sterilizeasdirectedabove.ThepHaftersterilizationis7.1±0.2.Heatinawaterbathpriortouseandincubateat30–35℃underanaerobicconditions.
大豆酪蛋白消化物培养基
Soybean–CaseinDigestMedium
酪蛋白胰酶消化物PancreaticDigestofCasein
17.0g
大豆粉木瓜蛋白酶消化物
PapaicDigestofSoybeanMeal
3.0g
氯化钠SodiumChloride
5.0g
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