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2012年5月
生物学实验教学中心
黄鳝的人工繁殖技术的研究
(指导老师:
董昌金)
(湖北师范学院生命科学学院生物科学0904班湖北黄石435002)
摘要:
黄鳝(Monopterusalbus)属鱼纲,合鳃目,合鳃科,黄鳝属[1]。
近年来,由于受环境的污染及滥捕的加剧,致使黄鳝的自然资源量不断下降。
虽然黄鳝的人工繁殖在我国许多地方均已获得成功,但因黄鳝的性转化现象、怀卵量低及吐泡沫营巢孵卵[2]等特点,使黄鳝人工繁殖首先不同与其它鱼类的人工繁殖。
其次在全人工条件下,黄鳝雌雄性腺发育不能完全同步,受精率、孵化率不高,孵化时间长、出膜时间不整齐等因素,这使黄鳝的人工繁殖更具特殊性,要获得大量的苗种有相当的难度。
目前这已成为制约黄鳝的大规模人工集约化养殖及取得更多发展的主要因素之一。
本实验就是基于以上情况主要针对黄鳝人工繁殖技术而进行的研究.,主要研究了不同的外源性激素对黄鳝的催产效果的影响,并通过与拟自然繁殖对照[3],观察了解人工繁殖的效应。
关键词:
黄鳝人工繁殖外源性激素
ArtificialreproductiontestofMonopterusalbus
ZhaoShuangshuang(Tutor:
dongchangjin)
(CollegeofLifeSciencesdepartment,HubeiNormalUniversity,Huangshi,435002)
Abstract:
Ricefieldeel(Monopterusalbu)isoneoftheeconomicallyimportantfishspeciesinChina.Itbelongstoclasspisces,ordersynbranchiformes,familysynbranchidae,andgenusmonopterusintaxonomy.Inrecentyears,thenaturalresourceofricefieldeelisdecliningconstantlybecauseoftheexcessiveenvironmentalpollutionandoverfishing.Ontheotherhand,thericefieldeelpossessesspecialcharacteristicsofsexreversal,lowfecundityandspittingfrothnestforhatching.So,theartificialreproductionofricefieldeelisdifferencewithotherfishspecies.Itisquiltdifficulttoproduceseedsinlargescaleoncontrolledconditions.Thesuccessfulartificialbreedingislimitedbysuchfactorsasasynchronizationofthemaleandfemalegonaddevelopment,lowfertilizingrateandhatchingrate,longhatchingperiodandasynchronoushatchingout,etc.
ThispaperstudiesontheartificialreproductionofMonopterusalbus,.Themainresearchisthedifferenteffectofexogenoushormones:
andcontrastwiththenaturalbreeding,observetheeffectofartificialbreeding.
Keywords:
MonopterusalbuArtificialpropagationExogenoushormone
引言
黄鳝属鱼纲,合鳃目,合鳃科,黄鳝属。
。
黄鳝是我国重要的经济鱼类之一,由于黄鳝属洞穴性底栖鱼类,不同于一般鱼类,观察它的繁殖生态的难度大,加之近年来,黄鳝栖息的自然生态环境随着农药、化肥的使用,日益受到污染,而资源减少刺激市场价格上扬又导致人为滥捕加剧,黄鳝资源濒临枯竭。
为满足市场需要,人工繁殖在所必行。
由于黄鳝属吐泡营巢繁殖的鱼类,且怀卵量低,一般黄鳝在繁殖期间,黄鳝先在水表面吐泡沫,做成泡沫巢,然后雌鳝在水中产卵,与此同时,雄鳝即排精,精液将卵子托于泡沫巢中,受精卵在泡沫巢中孵化。
而黄鳝在全人工条件下,雌雄性腺发育不能完全同步,致使黄鳝在人工饲养的条件下,很难得到大量的繁殖,这已经成为至于黄鳝养殖业快速发展的最主要的因素之一,为了解决黄鳝大规模的人工繁殖问题,传统的方法已不可行,因此本实验就是基于以上情况主要针对黄鳝人工繁殖技术而进行的研究.,主要研究了不同的外源性激素对黄鳝的催产效果的影响,并通过与拟自然繁殖对照,观察了解人工繁殖的效应。
1,实验时间
有实验结果表明,雌黄鳝的卵粒直径、卵巢重量和成熟系数为6-7月达到最大值,这是黄鳝卵巢发育的最佳时期;
而精巢系数的变化不大,在0.16—0.44之间,同样为6—7月达到最大值。
因此黄鳝的人工繁殖时间选在6、7两个月份进行。
2,前期准备
2.1鳝种选择:
(体长、体重、种属…)
雌性:
体长35cm以下(最好26-30cm),腹部臌胀、透明,有明显的卵巢轮廓,体质健壮,无明显伤病。
体重在90~150g之间。
雄性:
体长40cm以上,腹部不透明,体质健壮,活动能力强,无明显伤病。
体重在160~280g之间。
从绝对繁殖力、相对繁殖力以及成熟系数来看,黄斑鳝的繁殖力最强,青黄斑鳝次之,青斑鳝最弱。
所以亲鳝采用黄斑鳝。
亲本雌鳝应选择26—30cm体长段的黄鳝,才能在整体上获得较高的怀卵量和仔鳝数。
外观上雌鳝头较小、不隆起,体背青褐色、无斑点,性温和游态稳重,而且,成熟的雌亲鳝下腹部应膨大柔软,卵巢轮廓明显,腹部呈桔红色,稍透明,透过腹壁可见卵粒排列整齐,用手抚摩腹部则感觉柔软而有弹性,生殖孔微红肿。
外观上雄鳝头较大、隆起明显,体背有色斑,活动能力强,腹部不膨大、有网状血丝纹,生殖孔红肿较突出。
雄亲鳝选择个体大些的,这些精巢内精子活动激烈。
2.2实验器材:
(培养器材、观察器材、分析器材、预防器材…)解剖刀,小剪刀,5ml注射器和5号或6号针头,水葫芦若干,烧杯,量筒,玻璃棒,电子天平,研钵,胶头滴管,毛巾或着纱布,羽毛,温度计,pH试纸,恒温培养箱、显微镜。
……
2.3实验药品:
2.3.1鱼用任氏液配方:
NaCI0.78克\CaCl20.021克\NaHCo30.0021克\蒸馏水100毫升\KCI0.02克。
催熟素:
促黄体生成激素(LRH-A5)……
催产素:
促黄体生成激素(LRH-A5)、促黄体生成素释放激素类似物(LRH-A)、绒毛膜促性腺激素(HCG),鲤、鲫脑垂体(PG),马来地欧酮(DOM)助产剂2#(HWHO-2)。
2,3.2催产药物的配制:
LRH-A和HCG按产品包装标明的剂量换算,用生理盐水稀释溶解,达所需浓度。
PG按所需剂量称出,放入干燥洁净的研钵中,干研成粉末。
再加人几滴生理盐水研成糊状,充分研碎后加入相应的生理盐水,配成所需浓度的悬浮液。
消毒杀菌:
对亲鳝、培养器皿、实验用具进行杀菌消毒,创造一个良好的环境,一提高实验的成功率。
…….
2.4亲鳝处理
2.4.1催熟:
催熟注射最佳时间在5月25日上午9时左右,水温260C。
注射催熟针,旨在提高黄鳝的性成熟度,每尾注射LRH-A512.5ug、药液量0.5mI,注射部位与方法:
将黄鳝用千毛巾或纱布包好,防止其滑动,然后在腹腔注射,注射深度不超过0.5cm,注射后的黄鳝放回培养箱继续暂养。
2.4.2催产:
2.4.2.1催产药物的种类及其剂量
[4]
黄鳝的催产药物可采用促黄体生成素释放激素类似物(LRH-A),绒毛膜促性腺激素(HCG),鲤、鲫脑垂体(PG)。
注射剂量须根据水温、亲鱼的成熟度和亲鱼大小等情况灵活掌握。
但诱导排卵效果以LRH-A5+DOM和LRH-A5+HWHO-2组合为最佳,HCG为最差。
2.4.2.2催产时间
根据卵细胞的形态、大小和卵黄的分布,黄鳝的卵细胞可以分为五期:
第I期为染色质核仁期;
第II期为周边核仁期;
第III期为初级卵黄期;
第4期为次级和三级卵黄期;
第5期为成熟期。
其中第4期又可分为早、中、晚三期,在晚期的催产可达理想的效果。
催产注射最佳时间在5月31日上午9时,水温250C。
注射催产针,进行催产实验。
黄鳝注射催产剂后48小时还没有开始达到效应时间,催产后72小时即己经逐步达到效应时间,而大部分在90小时开始排卵。
2.4.2.3催产方法
将选好的亲鳝用干毛巾或纱布包好,防止其滑动,然后在胸腔进行注射。
针头先刺进胸部皮肤及肌肉,在肌肉内平行前移约0.5厘米,然后插入胸腔注射,注射垂直深度不超过0.5厘米,注射药液量不超过1毫升。
注射后的亲鳝放在培养箱中暂养,水深控制在20一30厘米,每天换水一次,大约换1/2水量。
由于亲鳝的大小和成熟度不一致,同批注射的亲鳝,其效应时间长短差别很大,因此要持续不断检查,在水温25℃左右时,注射40小时后每隔3小时检查一次。
要检查到注射后80小时左右。
检查的方法是:
捉住亲鳝,用手触摸其腹部,并由前向后移动,如感到鳝卵已经游离,则表明开始排卵,应立即进行人工授精。
2.4.2.4最佳催产剂量探索
因催产剂量为80ug/g体重的DOM或0.08ug/g体重+50ug/g体重的LRH-AS+DOM催产效果相对最好[5]。
所以设计实验
(1)将黄鳝平均分成四组,第一组对照,催熟后,第二组注入70ug/g体重的DOM,第三组注入80ug/g体重的DOM,第四组注入90ug/g体重的DOM。
(2)将黄鳝平均分成五组,第一组对照,催熟后,第二组注入0.08ug/g体重+40ug/g体重的LRH-AS+DOM,第三组注入0.08ug/g体重+50ug/g体重的LRH-AS+DOM,第四组注入0.08ug/g体重+60ug/g体重的LRH-AS+DOM,第五组注入0.08ug/g体重+70ug/g体重的LRH-AS+DOM。
(3)将黄鳝平均分成四组,第一组对照,催熟后,第二组注入0.07ug/g体重+50ug/g体重的LRH-AS+DOM,第三组注入0.08ug/g体重+50ug/g体重的LRH-AS+DOM,第四组注入0.09ug/g体重+50ug/g体重的LRH-AS+DOM。
各组分别在48.72,90h的排卵量。
2.5人工受精[6_9]
先选择雄鳝,生殖孔红肿,用手挤压腹部,能挤出少量透明液体;
有条件的为慎重起见,取少量液体放在400倍以上的显微镜下观察,如见有活
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