血液标本采集处理标准操作规程精品文档Word文档格式.docx
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肿瘤病人血液标本采集及处理。
责任人:
操作流程:
1.仪器设备:
高速低温离心机、-80℃冰箱。
2.材料与试剂:
试剂:
10×
红细胞裂解液(CatNO:
420301;
试剂公司:
Biolegend)
胎牛血清(100ml;
天津康源生物技术有限公司)
DMEM(500ml;
试剂公司:
ThermoCatNO:
SH30033.01B)
DMSO(100ml;
材料:
4ml血清真空采血管(黄盖无抗凝剂)
4ml血浆真空采血管(紫盖含抗凝剂)
移液器、50ml离心管、1ml冻存管、吸头等
3.样本采集:
3.1分离血清
3.1.1血清管(黄盖无抗凝剂),标本于4℃,3300rpm离心10分钟。
3.1.2吸取血清分装于1.5ml冻存管内,每管300µ
l,分装4管,若
血清量较多,则将剩余血清全部加入最后一个冻存管中。
3.1.3贴条形码标签,-80℃储存。
3.2分离血浆
3.2.1血浆管(紫盖含抗凝剂),标本于4℃,3300rpm离心10分钟。
3.2.2吸取血浆分装于1.0ml冻存管内,每管300µ
l,分装4管,若血浆量较多,则将剩余血清全部加入最后一个冻存管中。
3.2.3贴条形码标签,-80℃储存。
3.2.4采血管扣紧管盖,放存旁边,准备下一步分离有核细胞的操作。
3.3分离有核细胞
按每4ml全血需要配制40ml用量稀释红细胞裂解液。
3.3.1取50ml离心管,加36ml去离子水,加4ml红细胞裂解液混匀。
3.3.2用移液器将分离血浆后剩余血液转移至装有裂解液离心管中,轻轻颠倒混匀,室温静置10min(观察裂解效果适当延长裂解时间,液体呈现透明状为宜)。
3.3.3于4℃,800g离心5min,吸去上清,加入4mlDMEM轻轻吹打混匀
沉淀。
3.3.4于4℃,800g离心5min,吸去上清。
3.3.5将4ml细胞冻存液(400µ
lDMSO+3600µ
l胎牛血清;
血液和冻存液体积比为1:
1)加入离心管里,轻轻吹打混匀,按1ml分装到4个冻存管里。
3.3.6贴条形码标签,放入细胞程序降温盒-80℃冰箱过夜,第二天转入液氮罐保存。
注:
细胞冻存液应当新鲜配制,胎牛血清:
DMSO=9:
1
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