地黄饮片HPCE-DAD指纹图谱的研究中药材Word文档格式.doc
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指纹图谱
StudiesonHPCE-DADfingerprintofRehmanniaglutinosa
XuHu,HANLe,LIUXunhong*,FUXingsheng,LIJunsong,CAIBaochang,SHENZezhong
(NanjingUniversityofChineseMedicine,Nangjing210046,China)
AbstractObjective:
ToestablishtheanalyticalmethodforthefingerprintofRehmanniaglutinosabyHPCE-DADandcomparethefingerprintsofRehmanniaglutinosaanditsprocessedproducts.Method:
Basedonthemodeofhighperformancecapillaryelectrophoresis,60mmol·
L-1sodiumboratewasusedasbuffersolution(5%MeOH,pH9.5).Theseparationvoltagewas20kVandthedetectionwavelengthwassetat210nm.Catalpolwasusedasareferencestandard,thechromatographicfingerprintweredetermined.Thedatawereanalyzedbyfuzzyclusterandfingerprintsimilarityevaluationsoftwaretocomparethesimilarityofsamples.Result:
HPCE-DADfingerprintswith7commonpeaksofRehmanniaglutinosawereestablishedpreliminarily.Itwasdiscoveredthatasmallnumberofsamplesdifferedfromothers.RegardingtothefingerprintsofRehmanniaglutinosaanditsprocessedproducts,therewereobviousdifferencesintherelativeareasofcommonpeaks.Conclusion:
Themethodisreliable,accurateandcanbeusedforqualitycontrolofRehmanniaglutinosa.
KeywordsRehmanniaglutinosa;
HPCE-DAD;
fingerprint
地黄为地黄科植物地黄RehmanniaglutinosaLibosch..的块根,具有清热凉血、养阴、生津之功效,始载于《神农本草经》,列为上品,为我国“四大怀药”之一。
《中国药典》2010版收载有鲜地黄、生地黄、熟地黄,功效各不相同。
鲜地黄凉血清火、生津止渴,生地黄清热凉血、滋阴生津,熟地黄补血、滋阴[基金项目:
江苏省中药炮制重点实验室开放式课题(ZYPZ007);
南京中医药大学“药用生物资源研究与利用”优秀科技创新团队支持计划
作者简介:
许虎(1986-),男,硕士研究生,从事中药品质评价研究。
*通讯作者:
刘训红,Tel:
(025)85811511E-mail:
liuxunh1959@。
]。
临床上也有用生地炭、熟地炭,生地炭长于凉血止血,熟地炭长于补血止血[2]。
现代药理研究表明,地黄对免疫系统、心脑血管系统、中枢神经系统具有显著作用,还具有抗肿瘤、降血糖、抗胃溃疡等作用[3]。
其主要有效成分为环烯醚萜类化合物。
目前对地黄的质量控制,多以梓醇等作为考察指标[4-5],这种对单一成分的检测不足以全面反映药材的质量,也缺乏专属性。
中药色谱指纹图谱用于中药质量控制,比目前沿用的方法提供的信息要丰富,高效液相色谱法已应用于地黄的指纹图谱研究[6]。
本文采用高效毛细管电泳法对地黄饮片指纹图谱的构建进行了探讨,并与其炮制品进行比较分析,以期为规范地黄饮片市场及确保药材内在质量的均一性和稳定性提供较全面的质量控制手段。
1仪器与材料
G1600-AX高效毛细管电泳仪(美国Agilent公司),配惠普化学工作站、二极管阵列检测器(DAD)、自动进样器;
RotavaporR-3旋转蒸发仪(瑞士BUCHI公司);
pHS-3C型pH计(上海康仪仪器有限公司);
KQ-500E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
硼砂(南京化学试剂一厂,分析纯),氢氧化钠(上海化学试剂有限公司,分析纯),乙腈(德国Merck公司,HPLC级),甲醇(国药集团化学试剂有限公司,分析纯),无水乙醇(南京化学试剂有限公司,分析纯),盐酸(上海化学试剂有限公司,分析纯),乙酸(南京化学试剂有限公司,分析纯),配制缓冲溶液和供试品溶液所用的水均为重蒸馏水。
对照品:
梓醇(批号:
110808-200508)、桃叶珊瑚苷(批号:
111761-200601)、栀子苷(批号:
110749-200714)、肉桂酸(cinnamicacid,批号:
786-9001)购于中国药品生物制品检定所;
毛蕊花糖苷购于上海永叶生物科技有限公司。
样品:
地黄不同产地(批次)样品编号见表1。
S1~S7为商品生地黄,S8~S10为自制生地黄,S11~S13为自采鲜地黄,S14为自制熟地黄,S15为自制地黄炭,S16为自制熟黄炭,均经南京中医药大学中药鉴定教研室刘训红教授鉴定为地黄科植物地黄RehmanniaglutinosaLibosch.的新鲜或干燥块根,或生地黄的加工炮制品。
其中S11相对应的加工炮制品为S8、S14、S15、S16。
留样凭证存放于南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室。
表1地黄饮片样品
编号
品名
产地
提供厂商
批号或采集时间
S1
生地黄
河北
南京市中医院
080831
S2
南中医药大百草堂
100607
S3
河南
江苏省中医院
20100803
S4
南京轩德堂中医门诊部
100722
S5
南京市传统中医门诊部
100626
S6
南中医药大国医堂
100801
S7
河南宛西制药股份有限公司
1000031
S8
河南焦作温县
实地采集,品种:
温85-5
20101110
S9
沁怀一号
S10
红薯王
S11
鲜地黄
S12
S13
S14
熟地黄
S15
生地炭
S16
熟地炭
2方法与结果
2.1电泳条件未涂渍标准熔融石英毛细管(64.5cm´
75µ
m,有效长度56cm,Agilent科技有限公司);
运行缓冲液:
60mmol·
L–1硼砂(5%甲醇,Ph9.5);
检测波长:
210nm;
分离电压:
20kV;
压力进样:
5kPa×
6s;
毛细管温度:
25℃。
毛细管使用前依次用0.1mmol·
L–1氢氧化钠溶液、重蒸馏水和运行缓冲液压力冲洗5、10、5min,样品分析间隔用0.1mmol·
L–1氢氧化钠溶液、水、缓冲液平衡3、5、5min。
上述试剂使用前均经0.22μm滤膜过滤,并超声脱气。
2.2对照品溶液制备称取桃叶珊瑚苷20.00mg、栀子苷5.13mg、毛蕊花糖苷4.02mg、肉桂酸10.32mg,精密称定,分别置于10mL容量瓶中;
称取梓醇3.92mg,精密称定,置于5mL容量瓶中。
上述对照品用50%甲醇溶液溶解并定容至刻度,使上述5种对照品浓度依次为2.000、0.513、0.402、1.032、0.784mg·
mL–1,作为对照品储备液。
精密量取梓醇2mL、桃叶珊瑚苷1mL、栀子苷1mL、毛蕊花糖苷1mL、肉桂酸0.4mL,移至10mL容量瓶中,用50%甲醇稀释并定容,即得梓醇0.157mg·
mL–1、桃叶珊瑚苷为0.200mg·
mL-1,栀子苷0.051mg·
mL-1、毛蕊花糖苷为0.040mg·
mL-1,肉桂酸为0.103mg·
mL-1混合对照品储备液。
3 2.3供试品溶液制备精密称取经50℃干燥2h后的样品粉末(过60目筛)1.0g,置具塞锥形瓶中,精密加入50﹪(体积分数)甲醇50mL,加热回流1.5h,过滤,滤液用50%甲醇定容至50mL量瓶,用0.22μm滤膜过滤,作供试品溶液。
2.4方法学考察
2.4.1精密度试验:
取同一批次供试品(S1)溶液,连续进样5次,测定指纹图谱,用“中药指纹图谱相似度评价系统(2004A)”软件计算,结果相似度均大于0.98,表明供试品进样精密度良好。
2.4.2稳定性试验:
取同一批次供试品(S1)溶液,分别在1、2、4、8、16、24h进样6次,测定指纹图谱,用“中药指纹图谱相似度评价系统(2004A)”软件计算,结果相似度均大于0.94,说明供试品溶液在24h内稳定。
2.4.3重复性试验:
取同一批次样品(S1)粉末6份,平行操作,制备供试品溶液,测定指纹图谱,用“中药指纹图谱相似度评价系统(2004A)”软件计算,结果相似度均大于0.91,表明本法测定的重现性尚好。
以上结果表明指纹图谱中各色谱峰的相对迁移时间和峰面积基本一致,相似度较高,符合指纹图谱研究的的技术要求。
2.5指纹图谱的建立将供试品溶液分别放入自动进样的样品管中,按选定的测试条件进行检测。
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