总杞菊地黄丸定性鉴别和含量测定研究_精品文档Word格式文档下载.doc
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实验试剂:
乙酸乙酯,甲醇,甜菜碱对照品,甲苯
薄层板:
硅胶G薄层板
展开剂:
甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15:
2:
1)的上层溶液
供试品溶液的制备方法:
取本品15g,研碎,加水100ml,加热回流30分钟3次,放冷,离心,取上清液,用乙酸乙酯50ml振摇提取3次,分取乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇lml使溶解,作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备:
取枸杞子对照药材0.5g,加水50ml,加热回流30分钟3次,放冷,离心,取上清液,用乙酸乙酯30ml振摇提取3次乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇lml使溶解,作为对照药材溶液。
对照品溶液制备:
取甜菜碱对照品,加甲醇制成每lml含lmg的溶液。
阴性对照溶液的制备:
取阴性样品(缺枸杞子药材的样品),按照供试品溶液制备的条件制备样品,得阴性对照溶液。
操作方法:
照薄层色谱法(通则0502)试验,吸取上述两种溶液各10微升,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15:
1)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。
供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
2、山药
冷凝管1个,圆底烧瓶1个,分液漏斗1个,蒸发皿1个,硅胶G薄层板2个,离心管2个
95%乙醇,乙酸乙酯,二氯甲烷,甲醇,浓氨试液,氯仿,10%磷钼酸乙醇溶液,香兰素硫酸溶液
乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(9:
1:
0.5);
氯仿:
甲醇:
水(64:
50:
10)
显色剂:
10%磷钼酸乙醇溶液;
香兰素硫酸溶液
供试品溶液的制备:
取本品8粒研碎,加二氯甲烷30ml,加热回流2小时,滤过,滤液蒸干,残渣加二氯甲烷1ml使溶解,作为对照药材溶液。
取山药对照药材5g,加二氯甲烷30ml,加热回流2小时,滤过,滤液蒸干,残渣加二氯甲烷1ml使溶解,作为对照药材溶液。
操作方法(薄层色谱法)
吸取上述2种溶液各4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(9:
0.5)或氯仿:
10)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以显色剂:
10%磷钼酸乙醇溶液或香兰素硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
3、茯苓
冷凝管1个,圆底烧瓶1个,分液漏斗1个,硅胶G薄层板2个
甲醇,乙醇,乙酸乙酯,乙醚,10%硫酸乙醇溶液,2%香草醛酸溶液-乙醇(4:
1),三氯甲烷,茯苓多糖对照品。
硅胶G板
三氯甲烷-甲醇(3:
1)或正丁醇-冰乙酸-水(4:
1:
5上层)或甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20:
5:
0.5)
10%硫酸乙醇溶液或2%香草醛酸溶液-乙醇(4:
1)混合溶液
取本品杞菊地黄丸(浓缩丸)15g,研碎,加水100mL,加热回流30分钟,放冷,离心,取上清夜,用乙酸乙酯50mL振摇提取3次,分取乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇lml使溶解,作为供试品溶液。
对照品溶液的制备:
取茯苓多糖加甲醇溶液1ml制成对照品溶液。
阴性对照品溶液的制备:
取阴性样品(缺茯苓药材的样品),按照供试品溶液制备的条件制备样品,得阴性对照溶液。
对照药材溶液的制备;
取茯苓对照药材1g,加乙醚50ml,超声处理10分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇lml使溶解,制成对照药材溶液。
照薄层色谱法(通则0502)试验,吸取上述供试品溶液,对照药材溶液,阴性对照液,分别点于同一块硅胶G板上,以三氯甲烷-甲醇(3:
0.5)或为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液或2%香草醛酸溶液-乙醇(4:
1)混合溶液,在105°
C加热至斑点显色清晰,在紫外光(365nm)下检视。
4、泽泻
实验仪器:
冷凝管3个、圆底烧瓶3个、硅胶G薄层板2个、离心管2个
实验试剂:
乙酸乙酯、乙醇、乙醚、丙酮,环己烷,石油醚,5%硅钨酸乙醇溶液,
薄层板:
硅胶G薄层板
展开剂:
环己烷-乙酸乙酯(1:
1)或石油醚-乙酸乙酯(3:
1)或三氯甲烷-丙酮(3:
1)
显色剂:
5%硅钨酸乙醇溶液
供试品溶液的制备:
方法1取本品杞菊地黄丸(浓缩丸)15g,加水100ml,加热回流30分钟3次,放冷,离心,取上清液,用乙酸乙酯50ml振摇提取,分取乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
方法2取本品杞菊地黄丸(浓缩丸)6g,研碎,加乙醚40ml,加热回流1小时3次,滤过,滤液挥去乙醚,残渣加丙酮1ml使溶解,作为供试品溶液。
方法3取本品杞菊地黄丸(浓缩丸)3g,研细,加乙醇40ml,加热回流30分钟3次,滤过,滤液回收溶剂至干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
对照药材溶液制备:
方法1取泽泻对照药材0.5g,加水50ml,加热回流30分钟3次,放冷,离心,取上清液,用乙酸乙酯30ml振摇提取3次,分取乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液。
方法2取泽泻对照药材1g,加乙醚40ml,加热回流1小时,滤过,滤液挥去乙醚,残渣加丙酮1ml使溶解,作为对照药材溶液。
方法3取泽泻对照药材1g,加60%乙醇40ml,加热回流30分钟,滤过,滤液回收溶剂至干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为对照药材溶液。
按处方比例称取除泽泻外的其他药材同法制成阴性对照品溶液。
操作方法:
照薄层色谱法(通则0502)试验,分别吸取上述供试品溶液,对照药材溶液,对照品溶液和阴性对照液各5μL、3μL、3μL、5μL点于同一块硅胶G板上,以环己烷-乙酸乙酯(1:
1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷5%硅钨酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。
5、熟地黄
容量瓶,玻璃漏斗1个,分液漏斗1个,硅胶G薄层板2个
水饱和正丁醇,甲醇,毛蕊花糖苷对照品,0.1%2,2-二苯基-1-苦胼基无水乙醇溶液
乙酸乙酯-甲醇-甲酸(16:
0.5:
2)
0.1%2,2-二苯基-1-苦胼基无水乙醇溶液
取本品(以下“本品”均指:
杞菊地黄丸,2010版药典中规定每8丸相当于饮片3g)8粒,研碎,加80%甲醇50ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水5ml使溶解,用水饱和正丁醇振摇提取4次,每次10ml,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液。
取熟地黄药材粉末lg,同法制成对照药材溶液。
取毛蕊花糖苷对照品,加甲醇制成每lml含lmg的溶液。
取阴性样品(缺熟地黄药材的样品),按照供试品溶液制备的条件制备样品,得阴性对照溶液。
照薄层色谱法(通则0502)试验,吸取供试品溶液5^1,对照品溶液2pl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-甲醇-甲酸(16:
0.5:
2)为展开剂,展开,取出,晾干,用0.1%的2,2-二苯基-1-苦胼基无水乙醇溶液浸渍,晾干。
供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的颜色斑点。
6、牡丹皮
冷凝管3个,圆底烧瓶3个,硅胶G薄层板2个,玻璃漏斗1个
乙醚,丙酮,环己烷,三氯甲烷,丹皮酚对照品,盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液
硅胶G薄层板两个
环己烷-乙酸乙酯(3:
1);
环己烷-三氯甲烷-无水乙醇(7:
3:
盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液
取本品6g,研碎,加乙醚40ml,加热回流1小时,滤过,滤液挥去乙醚,残渣加丙酮lml使溶解,作为供试品溶液。
对照药材溶液制备:
取牡丹皮对照药材lg,同法制成对照药材溶液。
取丹皮酚对照品,加丙酮制成每lml含lmg的溶液,作为对照品溶液。
按处方比例称取除牡丹皮外的其他药材同法制成阴性对照品溶液。
阴性对照溶液制备其它各药材用量
药材名称
枸杞子
菊花
熟地黄
酒萸肉
山药
茯苓
泽泻
用量(g)
0.4138
1.6552
0.8276
0.6207
照薄层色谱法通则(0502)试验,吸取供试品溶液,对照品溶液,阴性对照溶液各10ul分别点于同一硅胶G薄层板上,使成条状,以环己烷-乙酸乙酯(3:
1)或者环己烷-三氯甲烷-无水乙醇(7:
1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液,加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的条斑。
同时用阴性对照品与对照药材对比以排除浓缩丸中其他药材的干扰。
定量鉴别研究
本品方中牡丹皮为较主要的一味中药,故选其为测定对象。
根据文献的有关报道,牡丹皮中有效成分为丹皮酚及芍药苷等,中国药典2015年版该方中以丹皮酚为其含量测定项目,故本品以丹皮酚为含量测定指标,采用HPLC色谱法,并参考有关文献进行系统的方法学研究。
高效液相色谱仪,具塞锥形瓶2个,25ml移液管1个,1ml移液管1个,分析天平(万分之一),冷凝管2个,圆底烧瓶2个。
70%甲醇,甲醇-水(7:
3),丹皮酚对照品。
取本品1.5g,研细,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇25ml,密塞,称定重量,加热回流1小时,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
取丹皮酚对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每lml中含丹皮酚45ug的溶液,即得。
按处方比例称取除牡丹皮外的其他药材,按杞菊地黄丸的制备工艺及供试品的制备方法制备阴性溶液。
阴性对照溶液其它各药材
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- 关 键 词:
- 总杞菊 地黄 定性 鉴别 含量 测定 研究 精品 文档