平菇对降血脂的作用_精品文档Word格式文档下载.doc
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1实验药品与仪器
实验用干平菇为新鲜采摘的平菇晾干后剪碎得到。
Wistar大鼠18只,雄,体重180-260g。
柠檬酸,浓硫酸,无水乙醇,氯化钠,甲醇,柠檬酸钠,1,2-丙二醇,甲醛,2,4-二硝基苯肼均为分析纯,吐温80为化学纯。
甘油三酯试剂盒,肝/肌糖元试剂盒,游离脂肪酸试剂盒,总胆固醇试剂盒,大鼠胰岛素ELISA试剂盒,高密度脂蛋白试剂盒。
HH-S型恒温水浴锅(江苏省水浴化学科技有限公司);
GZX-GW2-BS高温干燥箱(上海博泰实验设备有限公司);
SHB-ⅢA循环水式真空泵(郑州长城科技工贸有限公司);
RT-08多功能粉碎机(荣聪精密科技有限公司);
752型紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司);
KQ118超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);
FA2004电子分析天平(上海精细科技仪器厂);
RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。
ELX800型酶标仪(美国伯腾仪器有限公司);
TDL-400型低温冷冻离心机(金坛市白塔新宝仪器厂);
DW-86L338型超低温冰箱(青岛海尔特种电器有限公司);
NRY-200型全温恒温培养摇床(上海双舜实业发展有限公司);
QL-866型漩涡混合器(海门市其林贝尔仪器有限公司);
TZB/湘0045-2012型安准血糖仪(三诺生物传感股份有限公司)。
1.2实验方法
1.2.1糖尿病大鼠模型的建立
随机从18只大鼠中取出6只作为空白组,自由饮食饮水。
剩余的12只大鼠,每天给予脂肪乳,给药时间为14天,第14天结束时,向12只大鼠注射链脲佐菌素(STZ),给药体积0.1mL/100g,72h后测量血糖值,血糖值大于11.1mmol/L,表明造模成功。
1.2.2糖尿病大鼠的分组及给药
将造模成功的12只大鼠,随机分为两组,即模型组和平菇组。
灌胃给药,给药体积10mL/kg,给药过程中,2型糖尿病大鼠继续给予脂肪乳,每两天一次,平菇组每天给予平菇多糖溶液,给药体积10mL/kg,连续给药4周。
1.2.3实验过程
记录大鼠每天的饮食和饮水量,每周测量大鼠的体重,每周割尾取血,测量空腹血糖值。
末次测定各组空腹血糖值后,3%戊巴比妥钠30mg·
kg-1麻醉,断头取血,并分离血清。
采集肝脏,肌肉,胰腺,肾脏,一部分用10%甲醛固定,一部分放进密封袋,用超低温冰箱进行冷冻保存。
1.2.3药理活性研究
用采集的血清,测定大鼠胰岛素含量,胆固醇,甘油三酯,高密度脂蛋白,低密度脂蛋白,游离脂肪酸含量;
肝脏,肌肉测定糖元含量。
1.2.5平菇多糖抗2型糖尿病作用的初步机制
将用10%甲醛固定的肝脏,肌肉,胰腺,肾脏,进行H-E染色,制备病理蜡块。
1.2.6数据统计方法
采用SPSS统计软件进行数据处理。
实验结果以均数±
标准差,表示,Student’st-test进行组间比较。
差异为P<
0.05有统计学意义。
2结果与分析
2.1平菇多糖对2型糖尿病大鼠体重的影响
由表1可知,大鼠在经过脂肪乳28天的喂食后,模型组和平菇组的体重均升高;
开始给药之后,与模型组相比,平菇组大鼠体重逐渐升高(P<
0.05或P<
0.01)。
表1平菇多糖对大鼠体重的影响
序号
0W(g)
1W(g)
2W(g)
3W(g)
4W(g)
空白组
188.83±
9.28
190.83±
5.85
191.00±
4.69
193.17±
7.41
195.33±
6.68
模型组
239.83±
15.50**
219.67±
16.57**
227.00±
24.02**
227.33±
23.03*
213.50±
22.95
平菇组
231.50±
13.94
226.83±
9.97
245.33±
14.43
245.00±
12.79
253.33±
15.17##
2.2平菇多糖对2型糖尿病大鼠血糖的影响
由表2可知,与空白组相比,模型组大鼠血糖值,在0W,1W,2W,3W,4W,明显升高(P<
0.01),与模型组相比,平菇组大鼠的血糖值随着给药时间,明显降低(P<
0.01),表明平菇多糖可以改善大鼠高血糖的症状。
表2平菇多糖对大鼠血糖的影响
0W
(mmol·
L-1)
1W
2W
3W
4W
4.23±
0.27
4.43±
0.39
4.60±
0.53
4.35±
0.72
4.50±
0.65
24.93±
5.21**
19.43±
3.79**
20.65±
3.87**
17.58±
7.45**
23.43±
5.60**
16.22±
5.99#
11.15±
5.08#
6.73±
2.78##
4.20±
0.96##
5.52±
0.65##
2.32型糖尿病大鼠饮水和饮食情况
2.3.2.1饮食量
由图1可知,在第2周,用高脂饲料喂养模型组和平菇组大鼠之后,与空白组相比,模型组和平菇组的饮食量在逐渐上升;
在第4周,造大鼠2型糖尿病模型后,平菇组大鼠开始给药,与模型组相比,饮食量在逐渐下降。
2.3.2.2饮水量
由图2可知,在第2周,用高脂饲料喂养模型组和平菇组大鼠之后,与空白组相比,模型组和平菇组的饮水量在逐渐上升;
在第4周,造大鼠2型糖尿病模型后,平菇组大鼠开始给药,与模型组相比,饮水量在逐渐下降。
2.4平菇多糖对2型糖尿病大鼠糖元含量的影响
由表3可知,与空白组相比,模型组肝糖元、肌糖元含量明显减少(P<
0.01);
与模型组相比,平菇组肝糖元、肌糖元含量明显升高(P<
0.01),表明平菇多糖可以提高大鼠肝糖元、肌糖元含量。
2.5平菇多糖对2型糖尿病大鼠血脂的影响
由表4可知,与空白组比较,模型组甘油三酯、低密度脂蛋白含量均显著升高(P<
0.05或P<
0.01),胆固醇、高密度脂蛋白含量明显下降(P<
与模型组比较,平菇组甘油三酯、低密度脂蛋白含量均显著降低(P<
0.01),胆固醇、高密度脂蛋白含量明显升高(P<
0.01),表明POP可以调节T2DM大鼠的血脂代谢紊乱。
2.6平菇多糖对2型糖尿病大鼠胰岛素水平及胰岛素抵抗指数的影响
2.6.1胰岛素水平
如表5所示,与空白组相比,模型组胰岛素水平明显升高(P<
0.01),与模型组相比,平菇组胰岛素水平明显下降(P<
0.01),表明平菇多糖可以改善2型糖尿病大鼠胰岛素水平。
2.6.2胰岛素抵抗指数
如表5所示,与空白组相比,模型组homa-IR明显升高(P<
0.01),homa-β和ISI明显降低(P<
0.01),与模型组相比,平菇组homa-IR明显降低(P<
0.01),homa-β和ISI明显升高(P<
0.01),表明平菇多糖可以改善2型糖尿病大鼠高血糖、高胰岛素的状态,增强组织对胰岛素有效利用,改善胰岛素抵抗。
2.7平菇多糖对2型糖尿病大鼠游离脂肪酸含量的影响
由表6可知,与空白组相比,模型组游离脂肪酸含量明显升高(P<
0.01),与模型组相比,平菇组游离脂肪酸含量逐渐下降(P<
0.05)。
2.8对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞的影响
空白对照组大鼠胰腺未见病理损伤改变。
由胰腺腺泡构成的腺小叶和分隔腺小叶的结缔组织所组成,胰腺的神经纤维、导管、血管、淋巴管等,均穿行于胰的结缔组织内,内分泌部胰岛与外分泌部胰腺小叶清晰可辨,胰岛体积大,细胞核居中,胞浆均匀。
与空白对照组相比,模型对照组部分腺泡细胞见有脂肪组织增生,腺泡细胞呈空泡状,腺泡细胞体积缩小,胞浆减少,核浓缩深染;
胰岛数目减少,胰岛结构失去完整性,胰岛细胞分散,分布不均匀,胰岛内β细胞数明显减少。
与模型对照组比较,平菇组部分腺泡细胞见有脂肪组织增生,内分泌部胰岛与外分泌部胰腺小叶清晰可辨。
部分胰腺腺泡周围有少量空泡,胰岛体积大,细胞核居中,胞浆较均匀,胰岛结构趋于完整。
提示POP能增加胰岛内β细胞数目,对胰岛的损伤有较好的改善作用。
各组大鼠胰腺组织HE染色照片见图3。
2.9平菇多糖对肝脏组织中胰岛素抵抗相关蛋白的影响
与空白组比较,模型组肝脏AKT磷酸化水平降低,GSK3磷酸化水平增加;
与模型组比较,平菇组可增加小鼠肝脏AKT磷酸化,减少GSK3磷酸化水平,即通过激活PI3K/AKT信号转导通路,减少GSK3对糖原生成的抑制作用,增加肝糖储备,改善肝脏胰岛素抵抗。
2.11平菇多糖对肌肉组织中胰岛素抵抗相关蛋白的影响
与空白组比较,模型组肌肉AKT磷酸化水平降低,GSK3磷酸化水平增加,GLUT4水平降低;
与模型组比较,平菇组可明显增加小鼠肝脏AKT磷酸化水平,减少GSK3磷酸化水平,增加GLUT4水平,即通过激活PI3K/AKT信号转导通路,减少GSK3对糖原生成的抑制作用,增加GLUT4转位,改善肌肉胰岛素抵抗。
3实验讨论
近年来国外学者提出的脂毒性理论认为,脂代谢紊乱不单是糖尿病发生的结果,而是在糖尿病的发生、发展过程中一个相当重要的因素。
血脂异常以TC、TG、LDL-c水平升高,且HDL-c水平降低为特征,控制血脂水平是防治糖尿病的一个重要环节。
造模后,模型组甘油三酯、低密度脂蛋白含量与空白组比较,明显升高;
胆固醇、高密度脂蛋白含量明显下降;
平菇多糖给药组与模型组比较,胆固醇、高密度脂蛋白含量明显升高,甘油三酯、低密度脂蛋白含量均显著降低,提示实验性糖尿病
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