THP-1-细胞培养文档格式.docx
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THP-1是人外周血的单核细胞系,最初来源于急性单核细胞性白血病患者。
属于悬浮细胞,适合用于转染或感染实验。
其表面抗原HLA型为:
A2,A9,B5,DRw1,DRw2。
工具/原料
·
培养基:
RPMI-1640(Invitrogen#11875-093)
胎牛血清:
FetalBovineSerum(FBS,GIBCO#10099-141)
二甲亚砜:
DMSO(SIGMAD2650)
双抗P/S(Penicillin/Streptomycin)(GIBCO#15140-122)
方法/步骤
1.1
细胞培养:
THP-1细胞培养于含有10%FBS+1%P/S的RPMI-1640培养基中,培养环境为37℃,5%CO2。
可以每隔3-4天加一些新鲜的培养基,或直接传代。
2.2
细胞传代:
当细胞密度达到约8x10^5cells/ml左右时,即可进行传代。
由于是悬浮细胞,可直接将细胞吸出,离心之后传代。
传代最少浓度不应少于1x10^5cells/ml。
3.3
细胞冻存:
取差不多1x10^7个细胞,用1ml含有10%DMSO的FBS重悬,转入冻存管,于-80℃冰箱过夜。
第二天移入液氮中长期保存。
END
注意事项
细胞养不好,可能的原因有,THP-1细胞特别依赖细胞浓度,ATCC上105到106每ML,是一个很高的密度,细胞少了就不太容易养好。
细胞株的来源很重要,如直接来源于ATCC(AmericanTypeCultureCollection美国模式菌种保藏中心)生命力要强于国内细胞库的。
注意细胞的密度一定要高,介于5×
105——106/ML之间,增值的快。
细胞数量太少,不适合THP-1生长,一般状态不好的THP-1在培养了3天后数量仍然不多,继续培养一天或者两天,培养基严重泛黄,细胞数会增加。
这一点不同于同是单核细胞系的U937细胞。
THP-1细胞适合在细胞Ph环境偏酸性环境生长,对培养基变化非常敏感,所以尽量使用相同Ph的1640。
传代后切忌常移出培养箱观察,否则会影响细胞生长,状态变差,一般首先表现为细胞内颗粒变多。
一般THP-1生长相当快,对于状态已经不好的情况,建议传代后3~4天再观察,一般4天时间培养基已明显泛黄,细胞数量巨增;
1)THP-1细胞喜欢酸性条件,你不要老是换培养基。
越酸的条件,细胞密度越大,细胞就长得越好;
2)不要频繁换液,一般2-3次换液离心一次(只是补充培养基)3)使用1640(ATCC推荐),注意加碳酸氢钠2.5g就可以了,宁酸勿碱;
4)注意冻存的时候密度大些,推荐用血清冻存。
复苏比较慢,建议开始用小瓶,不要用一次性的。
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- THP 细胞培养