真菌学概述ppt课件 (1)PPT推荐.ppt
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6纲1959属,15000余种。
主要特征:
有性生殖产生子囊和子囊孢子包括:
青霉、曲霉、小孢子菌属、毛癣菌属、组织胞浆菌等有性期、毛癣菌属、酵母菌属等。
真菌分类担子菌亚门具有担子和担孢子,如食用菌蘑菇、灵芝以及致病性真菌新生隐球菌。
半知菌亚门3纲1825个属,约15000种。
包括:
酵母、隐球菌属、念珠菌属、红酵母属、丝孢酵母属、皮肤癣菌、青霉、曲霉及部分双相真菌等。
第二节真菌的基本特性,单细胞真菌圆形或卵圆形酵母菌(yeast),多细胞真菌菌丝和孢子丝状菌(filamentousfungus)交织成团或霉菌(mold),二相性(dimorphic),一、形态与结构,单细胞真菌形态,呈圆形或卵圆形,常见于酵母菌或类酵母菌,对人致病的主要有新生隐球菌和白假丝酵母菌。
这类真菌以出芽方式繁殖,芽生孢子成熟后脱落成独立个体。
多细胞真菌形态,多细胞丝状真菌能长出菌丝,菌丝延伸分枝,有的菌丝上长出孢子。
各种丝状菌长出的菌丝和孢子形态不同,是鉴别真菌的重要标志。
1.菌丝hypha,在环境适宜情况下由孢子长出芽管,逐渐延长呈丝状,称菌丝,菌丝形态(螺旋状、球拍状、结节状、鹿角状、梳状等)有助于鉴别,有性孢子:
同一菌体或不同菌体上的2个细胞融合经减数分裂形成,无性孢子:
菌丝上的细胞分化或出芽生成病原性真菌大多形成无性孢子,分生孢子,叶状孢子,孢子囊孢子,大分生孢子大小、细胞数和颜色是鉴定的重要依据,小分生孢子真菌都能产生,芽生孢子假菌丝,厚膜孢子,关节孢子,多细胞真菌形态,关节孢子,真菌孢子和细菌芽胞的区别,二、真菌的培养特性,特点:
低营养、低PH(4.0-6.0)、高湿度和氧、温度(浅部感染真菌22-28,深部感染真菌37)。
培养基:
沙保(Sabouraud)培养基(常加氯霉素和放线菌酮)菌落:
单细胞-酵母型菌落、类酵母型菌落(假菌丝)多细胞-丝状菌落菌落形态也是鉴别真菌的重要依据,酵母型菌落,是单细胞真菌的菌落形式,菌落光滑湿润,柔软而致密。
形态与一般细菌菌落相似,如隐球菌即属之。
有部分单细胞真菌在出芽繁殖后,芽管延长不与母细胞脱离,形成假菌丝。
假菌丝由菌落向下生长,伸入培养基中,这种菌落称为类酵母菌落,如假丝酵母菌。
C.albicans菌落(类酵母型),真菌在出芽繁殖后,芽管延长不与母细胞脱离,形成假菌丝。
假菌丝由菌落向下生长,伸入培养基中,这种菌落称为类酵母菌落。
2.霉菌型菌落(丝状菌落),是多细胞真菌的菌落形式,由许多管状分支的菌丝体构成。
菌落成棉絮状、绒毛状或粉末状,菌落正背两面呈现不同的颜色。
菌落的形态、结构和颜色常作为鉴定真菌的参考。
真菌有从中心向四周等距离生长形成圆形菌落的倾向,所以临床体癣、股癣、叠瓦癣等皮损表现为环形或多环形。
曲霉属,霉菌型菌落,青霉菌落,霉菌型菌落,双相真菌,凡在组织内和在特殊培养基上37培养时呈酵母相,而在普通培养基上和室温培养时呈菌丝相的一类真菌,统称为双相真菌(dimorphicfungi)。
酵母相也称为组织相,是主要的致病相。
临床上重要的传统双相真菌包括:
孢子丝菌、粗球孢子菌、组织胞浆菌、皮炎芽生菌、副球孢子菌等。
近年发现的马尔尼菲青霉等。
近年来,有学者将双相真菌的概念扩大,认为凡是具有两种表型的真菌均称为双相真菌。
如白念珠菌,在YPD培养基上,表现为酵母相;
而在Lee培养基上则呈菌丝相。
双相真菌,特征菌丝相和酵母相能相互转化,这种转化与培养温度、培养基成分、二氧化碳和氧的浓度变化有关。
双相真菌既能引起皮肤感染又能引起内脏器官的感染。
鉴定双相真菌的鉴定主要依赖于转化试验。
真菌的繁殖方式,有性繁殖无性繁殖出芽繁殖:
为酵母菌的主要繁殖方式。
分裂繁殖:
以二分裂法进行繁殖,可见于某些双相真菌在体内的繁殖。
芽管繁殖:
真菌孢子萌发芽管,芽管延长后形成菌丝。
生隔繁殖:
分生孢子在分生孢子梗某一段落形成一横隔,原生质浓缩后形成一个新的孢子,该孢子又可再独立进行繁殖。
致病性,病原性真菌感染:
主要为外源性真菌感染。
条件致病性真菌感染:
主要为内源性真菌感染。
真菌变态反应性疾病真菌性中毒真菌与肿瘤,抵抗力,对干燥、日光、紫外线及一般消毒剂抵抗力强对热敏感,601小时菌丝、孢子均被杀死对细菌抗生素不敏感对二性霉素B、制霉菌素、咪康唑、酮康唑、氟康唑和伊曲康唑敏感,临床标本的采集及检验程序浅部感染真菌的检查可用70%乙醇棉球擦拭局部后取皮屑、毛发、指(趾)甲屑等标本。
深部感染真菌的检查可根据病情取痰、血液、脑脊液等标本。
标本类型:
皮肤的角质性物质:
皮屑、毛发、指(趾)甲屑等。
分泌物和排泄物:
痰、生殖道分泌物、尿液等。
血液和体液:
血液、脑脊液、胸水、腹水、淋巴穿刺液、脓液及渗出液等。
注意事项:
若为浅部真菌感染,应刮片取病变部位边缘的痂鳞屑。
余同细菌感染标本采集事项。
真菌检验,各种真菌的形态结构有其一定的特殊性,一般可以通过直接镜检和培养进行鉴定,但具体方法应根据标本种类和检查目的而异。
一、标本的直接检查,显微镜检查抗原检测,显微镜检查,皮屑、毛发、指(趾)甲屑等标本置玻片上,滴加10%KOH少许,以盖玻片覆盖后在火焰上微微加温,使被检组织中的角质软化。
轻压盖玻片,使标本变薄透明,然后在低倍或高倍镜下检查。
若见菌丝或孢子,即可初步诊断患有真菌癣,但一般不能确定其菌种。
皮肤癣标本检查常用湿标本,不加染色。
假丝酵母菌感染则取材涂片,行革兰染色;
隐球菌感染取脑脊液离心。
沉淀物用墨汁作负染色后镜检。
结果的判断:
直接检查阳性有意义,阴性不能排除感染。
但阴道、痰等分离出假丝酵母菌、曲霉等条件致病菌需多次阳性才有意义。
组织中发现分隔分枝的菌丝多为曲霉;
粗大、不分隔或不分枝的菌丝多为毛霉。
假丝酵母菌出现假菌丝代表活动性,有意义。
皮肤癣菌菌丝肥大粗长,提示处于活跃状态。
酵母型和二相型真菌在组织内常表现为孢子。
10,10%KOH压片:
浅部真菌感染,敏感性更高,抗原检测,近年来有许多方法用于检测深部感染真菌的抗体,作辅助诊断荚膜组织胞浆菌、念珠菌、曲霉菌。
但系统性感染患者常因免疫功能降低不出现抗体;
而且许多真菌间抗原性有交叉反应;
有的产生抗体后维持时间较长,正常人群中有一定比例的阳性率,则必须结合临床情况分析结果才能作出恰当的诊断。
由于上述检测抗体受到许多因素的限制,及深部真菌感染时,早期培养阳性率甚低,晚期则多于失去治疗时机,因此用免疫学方法从血清或其他部位检测真菌抗原,对早期诊断具有重要意义。
如乳胶凝集法检测新型隐球菌病患者的荚膜多糖抗原,ELISA法检测白色念珠菌感染者的甘露聚糖抗原及免疫荧光法检测孢子丝菌病患者的可溶性抗原等,均为早期,快速、特异的诊断方法。
血清学试验,
(1)测抗原胞壁1,3-D-葡聚糖(G试验),表面抗原甘露聚糖(LA试验),热不稳定蛋白(LA试验),胞浆蛋白烯醇化酶(ELISA和WB),Mr65000蛋白(抑制ELISA)等。
(2)测抗体烯醇化酶(P47)抗体(ELISA),白念珠菌芽管抗体(CAGTA)间接免疫荧光法。
(3)GM试验临床意义:
早期诊断侵袭性曲霉菌感染检测物质:
半乳甘露聚糖(Galactomannan)试验原理:
双抗夹心法酶联吸附试验标本:
血清、肺泡灌洗液、脑脊液,二、分离培养,直接镜检不能确诊时应作真菌培养。
皮肤、毛发、甲屑标本经70%乙醇或2%石炭酸浸泡23min杀死杂菌,无菌盐水洗净后接种于含放线菌酮和氯霉素的沙保培养基上,2528数日至数周,观察菌落特征。
必要时做小培养,于镜下观察菌丝、孢子特征进行鉴定。
阴道、口腔粘膜材料可用棉拭子直接在血平板上分离。
若为血液需先增菌,脑脊液则取沉淀物接种于血平板上37培养。
若疑为假丝酵母菌取菌落研种于0.5ml血清试管内,371h后涂片革兰染色。
见有假丝酵母菌细胞长出芽管即可初步鉴定为假丝酵母珠菌。
培养基的选择1、葡萄糖蛋白胨琼脂:
也叫Sabourand(沙保罗或沙氏)琼脂。
它适合于多种霉菌的生长。
2、血琼脂培养基:
适合于假丝酵母菌3、DTM:
含蛋白胨、葡萄糖、酚红、放线菌酮、庆大霉素、四环素等。
它用于分离皮肤真菌。
4、左旋多巴-枸橼酸铁=咖啡酸培养基:
用于新生隐球菌的分离。
5、酵母浸膏磷酸盐琼脂:
分离荚膜组织胞浆菌和皮炎芽和菌。
二、分离培养,培养方法:
玻片培养法(小培养);
平皿培养法;
大试管培养法,二、分离培养,培养温度:
2528和3537,菌落直接观察观察菌落的生长情况是鉴别真菌的主要方法之一。
观察菌落时注意菌落性质菌落大小菌落颜色菌落是否下沉,是否使培养基开裂。
菌落涂片观察:
丝状菌菌落用乳酸酚棉兰染色镜检。
1.在玻片滴上棉兰,2.制作胶带粘菌小旗,3.胶带黏面轻压菌苔粘菌,4.在胶带与棉棒交接处滴数滴75%酒精,丝状真菌鉴定重要步骤乳酸酚棉兰压片,5.翻转棉棒有菌面贴在拨片33,6.胶膜上再滴棉兰,7.再加上盖玻片,丝状真菌鉴定重要步骤乳酸酚棉兰压片,8.用手压实盖玻片34,三、生化试验,糖发酵试验:
利用真菌对各种糖的分解能力及代谢产物不同,借以鉴别。
试验方法同细菌试验,主要用于检验深部感染真菌如假丝酵母菌、隐球菌等。
常用的有单糖(葡萄糖、果糖、半乳糖),双糖(麦芽糖、蔗糖、乳糖、海藻糖),三糖(蜜三糖),多糖(淀粉);
醇类有甘油、甘露醇、山梨醇、肌醇等。
同化碳源试验:
将1ml含菌生理盐水与已融化的固体同化碳源培养基(45)混合,然后在培养基上分别加入各种糖少许,置25或37孵育后观察结果。
若24h后无变化可重复加糖少许。
如能同化,在加入糖的周围有生长圈,否则无生长。
固体平板培养基适用于生长快的真菌,而液体培养基则适合于生长慢的真菌。
三、生化试验,同化氮源试验或利用硝酸甲试:
方法同同化碳源试验,但需无氮源的培养基,不加糖,加入硝酸甲。
其它:
另外还有牛乳分解试验和脲酶试验、明胶液化试验等,操作方法同细菌鉴定。
四、动物试验,主要用于分离、鉴定致病菌。
常用实验动物有小鼠、豚鼠和家兔等。
应按实验要求,选用一定的体重和年龄,具有高度易感性的健康动物。
接种途径有皮内、皮下、腹腔、肌肉、静脉、脑内和灌胃等。
接种后应仔细观察动物的食量、精神状态和局部变化,有时尚要测定体重、体温和血液等指标。
若死亡应立即解剖,检查病变,或进一步作分离培养,证实由何病菌所致。
五、核酸检测,
(一)DNA中G+Cmol%含量测定
(二)电泳核型(EK)分析(三)随机扩增多态性DNA(RAPD)分析,
(一)DNA中G+Cmol%含量测定,是最早用于真菌分类学研究的分子生物学技术。
目前在酵母菌的应用较为成功。
即利用真菌DNA中核酸序列
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