幽门螺杆菌检测PPT文件格式下载.ppt
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PCR等,13C-或14C-尿素呼气试验Hp粪便抗原试验Hp血清抗体试验,试验原理,HP能产生丰富尿素酶,将尿素分解、产生2个分子的氨,使培养基变为碱性,酚红呈粉红色。
操作过程,活检同时取2块组织进行检测(胃窦和胃体各1块),标本放置于试剂后观察颜色变化。
注意事项,检测结果受试剂pH值、取材部位、组织大小、细菌量、观察时间、环境温度等因素影响,
(一)快速尿素酶试验RUT,一、创伤性检查,胃镜检查胃黏膜取材,直接涂片革兰氏染色,也可包埋切片,常规HE染色或银染,直接镜检观察Hp。
直接镜检,其它组织学,
(二)组织学检查,1.免疫组化染色特异性高。
2.HE染色可同时作病理诊断;
3.荧光原位杂交(FISH)具有较高敏感性,1.在胃镜取胃粘膜放在转运培养基中。
2.接种于Hp牛脑浸液培养基,分区划线。
3.置5-12CO2培养箱35-37,3-5d形成小的半透明灰色菌落,有微弱的溶血环。
培养过程,诊断Hp最可靠的方法,可作为验证其他诊断性试验的“金标准”。
一般用于药敏试验和科研。
特点,(三)细菌培养,幽门螺杆菌的尿素酶(A、B、C、D)基因、16S-rDNA基因、VacA及CagA基因均已克隆成功,根据幽门螺杆菌不同的耙基因,设计不同的引物,从而建立不同的PCR系统,扩增产物可经凝胶电泳分析.,原理与方法,特点,(四)聚合酶链反应试验(PCR检测技术),1.与细菌培养和组织学染色镜检比较无明显优越性。
2.现在可收集胃液PCR检测幽门螺杆菌敏感性高,但可能与口腔和胃内其它尿素酶阳性菌丛起交叉反应,注:
HP的基因分型(HP菌属亚群)及致病性,VacA基因表达空泡毒素87KDCagA基因表达细胞毒素相关蛋白128KDCagA基因仅出现于VacA产生细胞毒效应时,是VacA产生效果的标志,原理和过程,HP能产生丰富尿素酶,能分解胃中的尿素,当整粒摄入含同位素碳-13的尿素胶囊后,碳-13尿素在尿素酶作用下,分解为氨和碳-13二氧化碳,碳-13二氧化碳被小肠上段吸收后,进入血循环,并随呼气排出,分析呼气中的碳-13就可诊断该细菌的存在,特点和注意事项,1.易于操作;
可反映全胃Hp感染状况。
2.检测前一个周内应停用抗生素、铋剂、质子泵抑制剂等药。
3.孕妇、哺乳期妇女及儿童不宜做。
(一)13C-或14C-尿素呼气试验,二、非创伤性检查,多采用ELISA双抗体夹心法,或胶体金试条法。
留取晨粪便,用稀释液稀释,再加入试条或微孔板检测。
原理与方法,特点,
(二)幽门螺杆菌粪便抗原检测,1.粪便抗原检测灵敏度高、准确性好,HP死亡但抗原成分仍保留下来,故在治疗前后都可用。
2.适用于所有年龄和类型的患者(儿童)。
多采用ELISA双抗原夹心法,或胶体金试条法。
可快速检测人血清、血浆或全血中幽门螺杆菌抗体。
原理与方法,特点,(三)幽门螺杆菌血清抗体检测,1.检测的抗体是IgG,反映一段时间内Hp感染情况,部分试剂盒可同时检测CagA和VacA抗体。
2.主要适用于流行病学调查。
第三节幽门螺杆菌检测方法的临床应用,小结:
几种HP检测方法的比较,
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