A260、A230、A280的含义Word文档格式.docx
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如果吸光度小于0.05,检查是否存在操作因素(如移液不准确,样品内有悬浮物等)影响。
DNA样品的A260吸光度值是否>
0.1。
(请注意,这个值跟仪器无关,核酸的吸光度必需大于0.1,其值才有效和可靠,因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收,其值<
0.1);
朗伯-比尔定律:
A吸光值
I0入射光强度
I投射光强度
c吸光物质的摩尔浓度(mol/L)
d光通过的液层厚度(cm)
ε摩尔吸光系数(Lmol-1cm-1)
2.A280nm
是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长,比值可进行核酸样品纯度评估:
纯DNA的A260/A280比值为1.8,纯RNA为2.0。
如果比值低,表示受到蛋白(芳香族)或酚类物质的污染,需要纯化样品。
比值=1.5相当于50%蛋白质/DNA溶液
3.A230nm
是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长,比值可进行核酸样品纯度评估:
纯DNA和RNA的A260/A230比值为2.5。
若比值小于2.0标明样品被碳水化合物(糖类)、盐类或有机溶剂污染,需要纯化样品。
A230产生负值主要是由于在很低DNA浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。
在下一个测定中,需要降低样品的稀释度,A230的负值会被校正。
4.A320nm或A340nm
为检测溶液样品的浊度和其他干扰因子。
该值应该接近0.0。
如果不是,标明溶液中有悬浮物,需要纯化样品。
纯样品的A320一般是0。
5.A260/A280和A260/A230
是核酸纯度的指示值,纯度好的DNA,在pH7-8.5下其比值应该在2.0或2.5,A260/A280的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是280nm。
纯净的样品比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。
如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。
A230是多肽、芳香基团、苯酚和一些碳氢化合物的吸光度,A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物、多肽、苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。
A280是蛋白质的吸光度。
2.纯净的DNA和RNA在A260和A280都有吸收值,但以260最高。
而核酸提取过程中最主要的污染物蛋白质在A280处有强烈的吸收值,所以计算这两个吸收峰的比值就可以确定核酸的纯度。
DNA的这个值一般是1.8~2.0,而RNA则是2.0。
值得注意的是,这个比值并不能很好的反应出核酸的纯度,简单来说寡聚核酸会造成A260值升高,如果核酸有降解,则会导致A260/A280值上升。
另外,如果A280值偏高,并不一定是蛋白污染。
蛋白在A280有吸收值是因为其苯丙氨酸等氨基酸残基中所含有的苯环的缘故,所有含苯环的化合物都会在A280有吸收峰。
所以如果A280升高虽然有最有可能是蛋白污染,但也有可能是其他苯环物质。
如植物DNA提取过程中的多酚类物质污染。
另外,如果要求高的话,我们还会要求测量A230的值,正常情况下,核酸的A260/A230和A260/A280是一致的,如果这个值上升则样品可能会含有多糖类的污染。
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