埃博拉出血热实验室检测方案二.docx
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埃博拉出血热实验室检测方案二.docx
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埃博拉出血热实验室检测方案二
埃博拉出血热实验室检测方案二
埃博拉出血热实验室检测方案
埃博拉出血热是一种严重的急性传染病,埃博拉出血热患者血液中有较高的病毒载量,可能发生人-人传播和院内感染,病死率高。
直接接触传播是本病最主要的传播途径。
可以通过接触病人或被感染动物的体液、分泌物、排泄物及其污染物等而感染。
埃博拉出血热的临床表现和其他一些病毒性出血热相似,需要通过实验室进行确诊。
在目前阶段,以对病人血液标本检测为主。
为及时检测和确认埃博拉出血热病例,规范实验室检测程序,提高检测质量,为指导病例的管理和出院提供依据,特制定本方案。
检测对象
包括留观病例、疑似病例和确诊病例,病例定义参见国家卫生计生委制定的《埃博拉出血热相关病例诊断和处置路径》。
二、标本采集、保存和运输标本采集
用分离胶无菌真空促凝管采集静脉血,每管3mL,标记后4℃保存,填写标本采集登记表。
留观病例、疑似病例采集4管,其中2管送指定的具有埃博拉出血热检测资质的实验室进行埃博拉病毒检测,2管保存于样本采集单位或所在省疾病预防控制机构,待排除埃博拉病毒感染后用于其他病原体的筛查;确诊病例采集恢复期血标本,送国家疾控中心病毒病所进行检测。
标本保存、运送
未分离血清的全血标本应4℃保存,并尽快分离血清;血清标本长期保存应置于-70℃以下,标本保存不超过1周可置-20℃。
标本运输应按照相关生物安全规定,采取A类包装,低温冷藏运输,避免反复冻融。
三、检测内容
埃博拉病毒核酸检测、埃博拉病毒抗原检测和IgM、IgG抗体检测。
四、实验室检测方法
病原学检测
1.核酸检测:
为目前早期诊断、早期发现埃博拉出血热病例的主要检测方法。
采用荧光定量PCR进行病毒核酸检测,患者标本中扩增到特异性核酸,可确诊埃博拉病毒感染。
传统RT-PCR因易出现污染使用受限,但可以获得病毒基因序列。
发病后3天内,血标本中埃博拉病毒核酸检出率低,检测阴性不能排除埃博拉病毒感染,应结合病例的流行病学史和临床表现进行综合判断。
发病后3~10天血标本病毒核酸检出率高,检测阴性可排除埃博拉病毒感染。
2.病毒抗原检测:
用酶联免疫法检测埃博拉病毒核蛋白抗原。
病毒抗原检测阳性可确诊。
发病后3天内,血标本中埃博拉病毒抗原检出率低,检测阴性不能排除埃博拉病毒感染,发病后3~10天血标本病毒抗原检出率高。
血清学检测
1.血清特异性IgM抗体:
采用捕获法ELISA方法检测。
IgM抗体阳性可确诊。
2.血清特异性IgG抗体:
目前采用间接法ELISA检测IgG抗体。
单份血清埃博拉病毒IgG抗体阳性提示曾感染埃博拉病毒,双份血清埃博拉病毒IgG抗体阳转或恢复期滴度较急性期4倍或者以上增高者可确诊。
结果的报告、复核和反馈
埃博拉病毒检测机构应将所有阳性和部分阴性血清标本送中国疾病预防控制中心病毒病所进行复核检测。
实验室检测结果应及时反馈标本送检单位,并尽快上报上级主管部门。
五、生物安全
按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》等相关规定要求,做好生物安全工作。
实验室检测
1.凡涉及埃博拉病毒的分离、培养和动物实验,需在生物安全4级
实验室内进行。
涉及未经培养有感染性材料的实验活动,需在BSL-3实验室内进行。
血清学检测应在BSL-3实验室内,且标本需先60℃1小时灭活后,再
进行后续实验操作。
核酸检测时,需在BSL-3实验室内加入核酸提取裂解液,完成病毒RNA提取,并对装有病毒RNA样品管的外表面进行彻底消毒后,可在BSL-3实验室以外进行扩增检测。
2.在进行感染性材料操作时,每次标本份数不宜过多,每份标本量不宜过大。
生物安全防护
在实验室处理感染性标本时,应严格按照操作规范在BSL-3实验室内进行。
实验室工作人员应穿着遮盖全身的个人防护装备,包括防渗漏防护服、N95或以上口罩、防护目镜、防护面罩、乳胶手套等,当需进行感染性标本离心、较大量标本分装处理等时应使用正压头盔。
实验人员有体表开放式伤口时不宜参加实验活动。
涉及感染性材料的离心应使用有密封盖的离心桶或转头进行标本离心,应在生物安全柜内打开离心转头放入或取出装有标本的离心管。
在标本的采集、包装和实验室检测等过程中所产生的医疗废物,可能具有生物危险性,应当按照《医疗废物管理条例》和《医疗卫生机构医疗废物管理办法》等相关规定及时处理。
实验室检测埃博拉病毒相关感染性标本的实验活动发生意外时,应及时启动相关应急预案。
附件:
附件1.埃博拉出血热相关标本采集、包装、运输技术指南附件2.埃博拉病毒核酸检测方法
附件3.埃博拉病毒核蛋白抗原检测方法附件4.埃博拉病毒IgM抗体检测方法附件5.埃博拉病毒IgG抗体检测方法附件6.埃博拉出血热相关标本实验活动意外应急预案附表:
附表1.埃博拉出血热送检材料一览表附表2.埃博拉出血热实验室检测结果一览表
附件1
埃博拉出血热相关标本采集、包装、运输技术指南
埃博拉出血热(Ebolahemorrhagicfever)是埃博拉病毒(Ebolavirus)引起的一种急性出血性传染病。
人主要通过接触病人或感染动物的体液、分泌物和排泄物等而感染,临床表现主要为突起发热、出血和多脏器损害,病死率可高达50%-90%。
20XX年,在几内亚、利比里亚和塞拉利昂等西非国家发生历史上最严重的埃博拉出血热暴发疫情。
本病潜伏期为2~21天,通常为8~10天。
为使医疗机构疾病预防控制机构在埃博拉出血热患者或疑似患者的诊治过程中,指导埃博拉出血热相关标本的采集、包装和运输工作,保证生物安全,特制定本指南。
一、生物安全防护
所有样本的采集或处理应遵守《医院感染管理规范》和《病原微生物实验室生物安全管理条例》等相关生物安全规定,在标准预防的基础上采用飞沫和接触隔离的预防措施。
2、样本采集时,应严格按照BSL-3级实验室规定做好个人防护。
应穿戴医用防护服、可遮盖口鼻的医用防护口罩(N95)、双层乳胶手套、护目镜、头部面部保护罩、专用橡胶靴等。
二、标本采集。
采集时间
一般发病后2周内,可在患者血标本中检测到病毒核酸和抗原,发病后3~10天的标本核酸和抗原的检出率高。
在发病后数月内,可在特定分泌物中持续检出病毒。
最早可从发病后2天的患者血清中检出特异性IgM抗体,IgM抗体可维持数月。
发病后7-10天可检出IgG抗体,康复者IgG抗体可维持数年。
发病10-14天以后的标本病毒特异性抗体的检出率高。
应根据不同检测目的确定采样时间,疑似患者排除埃博拉病毒感染需采集发病3天以后的血标本。
标本采集
1.采血场所应在相对独立的场所,病人房间和服务间及外侧环境相比应符合负压要求,配备二级生物安全柜。
如果不具备上述条件,可用相邻的房间提供足够的
安全空间,备有除了病人常规护理的材料外应具备手套、防护服和防护面具等,同时要装备有洗手的设施和装有消毒液的桶。
2.采集埃博拉出血热患者血样会给医护人员带来风险,应经过生物安全防护培训的人员执行,采血时应2人在场。
3.采用分离胶无菌真空促凝管采集静脉血,每管3mL,采集后用封口膜封闭管口,标记清楚后放入自封袋或50mL离心管内,并在自封袋或离心管外表面再清楚标记,4℃保存,填写标本采集登记表。
4、留观病例和疑似病例应在发病3天后,采集静脉血4管,其中2管送指定的具有埃博拉出血热检测资质的实验室进行埃博拉病毒检测,2管保存于样本采集单位或所在省疾病预防控制机构,待排除埃博拉病毒感染后用于其他病原体的筛查。
5、确诊病例采集恢复期血标本,包括并不限于出院前标本2份,每份2管,采集时间间隔不少于48小时。
四、标本包装、运输。
所有疑似埃博拉病毒相关感染性标本的运输应按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》和《人间传染的病原微生物名录》等相关规定,采取A类包装,符合UN2814要求。
按照三重包装系统包装:
第一层包装为自封袋或50mL离心管;第二层包装为防水、防漏的安全壳容器;第三层为运输包装组成。
封在防漏自封袋或离心管内的样本应首先放置在耐用、防水防漏的第二层安全壳容器中,用吸水纸等填充物将封好的标本固定好。
安全壳容器和外包装须与IATA危险物品条例包装制度650相符合。
写明标本的详细情况、运送者及预期接收者地址,并密封在塑料袋里,用胶布分别粘在外层容器里面和外面并留档以便追踪,方便实验室操作人员查对标本数量。
样本运输之前,应按相关生物安全规定先和样本接收单位相关生物安全负责人联系,办理相关手续,运送日确定后即通知接收实验室标本运送的时间和运输方式。
五、样本保存和销毁
实验室检测埃博拉病毒阳性血标本,应根据《病原微生物实验室生物安
全管理条例》等相关生物安全规定保存在-70℃以下,实行“双人双锁”管理和取样“审批”制度。
实验室检测埃博拉病毒阴性血标本,应所采集疑似患者或密切接触者完全排除埃博拉病毒感染后,转入其他血清库保存或销毁。
所有血清销毁时,均应在冰箱内取出后,在生物安全柜内,待其自然融化后,置于含有效消毒剂内浸泡,然后高压灭活。
所有销毁样本均应在相应数据库清单内标明,销毁的时间和操作人,阴性样本灭活记录保存1年以后可以清除,阳性样本的销毁记录应保存5年以上。
附件2
埃博拉病毒核酸检测方法
1目的
埃博拉病毒核酸的提取及PCR检测。
2适用范围
适用于检测血标本中埃博拉病毒核酸。
3实验前准备
核对被检样品患者的姓名、编号及检测项目等。
4检测仪器设备和材料
实时定量核酸扩增检测仪,常规核酸扩增检测仪,RNA提取试剂盒,一步法RT-PCR扩增试剂盒,一步法实时定量RT-PCR扩增试剂盒等。
5实验步骤实验准备
a.提取埃博拉病毒RNA要求在BSL-3级实验室内操作。
b.进入实验场所之前,要事先准备好所需试剂,样品。
预约实验场所。
RNA的提取
使用QIAampViralRNAMini试剂盒提取血清标本中病毒RNA。
a.吸取560μl包含载体RNA的AVL缓冲液(核酸提取裂解液)至的离心管中。
b.向上述的液体中加入140μl样品,脉冲涡旋式混匀15秒,室温孵育10分钟,简单离心使离心管顶端液体落到底部。
c.在样品中加入560μl96-100%的乙醇,混匀15秒,再简单离心。
d.小心将630μl液体加入未浸湿的QIAamp小柱中,盖好盖,离心8000rpm/min1min,弃去收集管,将柱子置于一新的2ml收集管上。
e.打开QIAamp小柱的盖子,重复步骤6,直至样品全部离心。
f.打开盖子,向柱中加入500μlAW1缓冲液,盖好盖,离心8000rpm/min1min。
弃去收集管,将柱子置于一新的2ml收集管上。
g.打开盖子,加入500μlAW2缓冲液,盖好盖,离心14,000rpm/min3min。
将柱子置于一新的2ml收集管上,空离1min。
h.将柱子置于一新的离心管上,加入50μlAVE洗脱缓冲液,室温孵育1min,离心8000rpm/min1min。
离心液即为病毒RNA,立即检测或-70℃以下保存。
实时定量RT-PCR法分型检测埃博拉病毒核酸引物与探针引物/探针检测引物探针1
ZEBOV-FZEBOV-RZEBOV-P检测引物探针2EBOGP1D-fwdEBOGP1D-revEBOGP1DZ-Prb
序列CGCCGAGTCTCACTGAATCTG
AGTTGGCAAATTTCTTCAAGATTGTFAM-CGGCAAAGAGTCATCCCAGTGTATCAAGTAA-BHQ1
TGGGCTGAAAAYTGCTACAATCCTTTGTGMACATASCGGCAC
FAM-CTACCAGCAGCGCCAGACGG-BHQ1
荧光标记
FAM/BHQ-1
FAM/BHQ-1
实时荧光定量RT-PCR扩增
实时荧光定量RT-PCR扩增反应配置体系:
RNA模板5μl,酶1μl,缓冲液μl,引物各1μl,探针μl,加水至总体积25μl。
推荐反应条件为50℃30min,95℃10min,95℃15s、60℃45s反应40个循环。
结果判断
以定量荧光PCR反应的前3~15个循环的荧光信号作为本底信号,以本底信号标准差的10倍作为荧光阈值,标本扩增产生的荧光信号达到荧光阈值时所对应的循环数为循环阈值,以Ct<35荧光信号数据线性化处理后对应循环数生成的曲线图成“S”形的标本,可判断为相应的埃博拉病毒核酸检测阳性。
意义
荧光定量PCR是一种灵敏、特异、低污染的病毒RNA检测方法,可以定性或定量检测标本中的埃博拉病毒。
阳性具有确诊意义。
一步法常规RT-PCR方法检测埃博拉病毒核酸
引物:
引物序列见下表引物
方法1EBV-GPF451-472EBV-GPR1024-1003
序列
5’-TGGGCTGAAAACTGCTACAATC-3’5’-TTTTAGTTTCCCAGAAGGCCCA-3’
片段大小
570bp
方法2
Filo-AFilo-B
ATCGGAATTTTTCTTTCTCATT
ATGTGGTGGGTTATAATAATCACTGACATG
414bp
Filo-A-nestedGTCAAAGCATTTCCTAGCAACATGATGGFilo-B-nestedATAATAATCACTCACATGCATATAACA
282bp
PCR扩增
用引物对EBV-GPF和EBV-GPR、FiloA和FiloB进行PCR扩增。
推荐反应条件为
94℃预变性2min,然后94℃变性30秒,55℃退火30秒,72℃延伸1分钟,反应
40循环,最后72℃延伸10分钟。
如为套式PCR则开展第二轮扩增。
第二轮分型PCR扩增体系配置采用正向引物Filo-A-nested与反向引物
Filo-B-nested。
推荐反应条件为94℃预变性2min,然后94℃变性30秒,55℃退火30
秒,72℃延伸1分钟,反应30循环,最后72℃延伸10分钟。
%浓度琼脂糖电泳分析。
结果判读
a,阳性:
电泳显示相应大小DNA片段。
b,阴性:
无特异性核酸片段扩增。
意义
阳性结果可以初步判断埃博拉病毒感染,需排除交叉污染。
7清场与消毒
操作结束后,及时清理生物安全柜内的物品,用%次氯酸钠溶液和75%乙醇擦试外表面后,移出生物安全柜放入冰箱中。
未使用完的感染性生物材料销毁或放入BSL-3级实验室-70℃冰箱,并如实填写操作和处理记录。
实验区内的污染材料高压处理后,再进行集中高压处理。
附件3
埃博拉病毒核蛋白抗原检测方法
1目的
双抗体夹心法ELISA检测血清中埃博拉病毒核蛋白抗原。
2适用范围
适用于人血清或血浆中埃博拉病毒核蛋白抗原的检测。
3实验前准备
核对被检样品患者的姓名、编号及检测项目等。
检测前将60℃1小时灭活的待测样品置于BSL-3实验室生物安全柜内。
4检测项目
本方法检测项目为检测血清或血浆中埃博拉病毒核蛋白抗原。
5检测仪器设备和材料
加样器、温箱、洗板机、含波长450nm的酶标仪、病毒病所出血热室自制埃博拉病毒抗原检测试剂盒。
6操作步骤
将试剂盒在冰箱中取出,放置室温平衡30分钟,使用前将试剂轻轻震荡混匀。
配液:
将浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释注入洗涤瓶或洗板机的桶内。
编号:
将样品对应微孔板编号,每板设阴性对照3孔,模拟阳性对照2孔和空白对照1孔。
加稀释液:
每孔加稀释液50μL,空白孔除外。
加样:
分别在相应孔加入待测样品或阴阳性对照各50μL,空白孔除外。
温育:
用封板膜封板后,置37℃温育60分钟。
每孔加酶标试剂50μL,空白孔除外,轻轻震荡混匀。
温育:
用封板膜封板后,置37℃温育30分钟。
洗板:
小心揭掉封板膜,用洗板机洗涤5遍。
显色:
每孔加入显色剂A、B液各50μL,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分
钟。
测定:
每孔加终止液50μL,10分钟内测定结果。
设定酶标仪波长于450nm处,用空白孔调零后测定各孔A值。
7结果判定
临界值计算:
临界值=+阴性对照孔A值均值。
阴性对照的正常值范围:
阴性对照孔A≤。
阳性对照的正常值范围:
≤A≤
阳性判定:
样品A值≥临界值者为埃博拉病毒抗原阳性。
阴性判定:
样品A值<临界值者为埃博拉病毒抗原阴性。
8意义
结合临床信息,阳性结果可以诊断为埃博拉病毒感染,但阴性结果并不排除埃博拉病毒感染的可能。
9清场与消毒
操作结束后,及时清理生物安全柜内的物品,用%次氯酸钠溶液和75%乙醇擦试外表面后,移出生物安全柜放入冰箱中。
将未使用完的感染性生物材料按销毁或放入BSL-3级实验室-70℃冰箱,并如实填写操作和处理记录。
将实验区内的污染材料按高压处理后,再进行集中高压处理。
附件4
埃博拉病毒IgM抗体检测
1目的
检测埃博拉病毒特异性IgM抗体。
2适用范围
适用于人血清或血浆中埃博拉病毒特异性IgM抗体的检测。
3样品接收和准备
核对被检样品患者的姓名、编号及检测项目等。
检测前应将60℃1小时热灭活的待测样品置于BSL-3实验室生物安全柜内。
4检测项目
本方法检测项目为检测血清或血浆中病毒特异性IgM抗体5检测仪器设备和材料
加样器、温箱、洗板机、含波长450nm的酶标仪、埃博拉病毒IgM抗体检测试剂盒,或实验室自备材料:
抗原:
阳性抗原标记物:
酶标原核表达埃博拉病毒核蛋白。
阴性抗原标记物:
酶标原核表达汉坦病毒核蛋白。
抗人IgM单克隆抗体或多克隆抗体;汉坦病毒IgM阳性、阴性对照血清;
辣根过氧化物酶标记埃博拉病毒单克隆抗体;缓冲液:
洗涤液:
PBS-T;稀释液:
PBS;
封闭液:
碳酸缓冲液;显色液:
A/B液终止液:
4NH2SO4
6检测原理
本方法采用抗人μ链捕获人血清IgM抗体,加辣根过氧化物酶标记的病毒抗原,用以检测埃博拉病毒特异性IgM抗体。
适用于埃博拉出血热的早期诊断及其它实验性研究。
7检测步骤:
用稀释液按效价稀释抗人μ链单克隆抗体,100μl/孔,加盖,4℃过夜;弃去抗人μ链,用洗涤液重复洗3次,加封闭液,100μl/孔,置37℃水浴孵育2小时;
弃封闭液,用洗涤液重复洗3次。
将待检血清1:
100稀释液,加入酶标板孔中,100μl/孔,同时将1:
100稀释的阳性血清、阴性血清对照分别加入,100μl/孔,置37℃水浴孵育1小时;
弃去血清,用洗涤液重复洗3次,分别加入酶标埃博拉病毒抗原及汉坦病毒抗原,100μl/孔,4℃过夜;
弃抗原,用洗涤液重复洗3次,于各反应孔内加A/B液各一滴,37℃,避光3~5分钟;
加终止液于每反应孔,一滴/孔。
8结果判断:
临界值计算:
临界值=+阴性对照孔A值均值。
阴性对照的正常值范围:
阴性对照孔A≤。
汉坦病毒阳性对照的正常值范围:
≤A≤
阳性判定:
样品A值≥临界值者为埃博拉病毒IgM抗体阳性。
阴性判定:
样品A值<临界值者为埃博拉病毒IgM抗体阴性。
阳性结果,提示患者埃博拉病毒感染,用于埃博拉出血热早期诊断。
9清场与消毒
操作结束后,及时清理生物安全柜内的物品,用%次氯酸钠溶液和75%乙醇擦试外表面后,移出生物安全柜放入冰箱中。
未使用完的感染性生物材料销毁或放入BSL-3级实验室-70℃冰箱,并如实
填写操作和处理记录。
将实验区内的污染材料高压处理后,再集中高压处理。
附件5
埃博拉病毒IgG抗体检测方法
1目的
检测埃博拉病毒特异性IgG抗体。
2适用范围
适用于人血清或血浆中埃博拉病毒特异性IgG抗体的检测。
3实验前准备
核对被检样品患者的姓名、编号及检测项目等。
检测前应将60℃1小时热灭活的待测样品置于BSL-3实验室生物安全柜内的冰上。
4检测项目
本方法检测项目为检测血清或血浆中埃博拉病毒特异性IgG抗体5检测仪器设备和材料
加样器、温箱、洗板机、含波长450nm的酶标仪、埃博拉病毒IgG抗体检测试剂盒,或实验室自备材料:
抗原:
阳性抗原:
原核表达埃博拉病毒核蛋白。
阴性抗原:
原核表达汉坦病毒核蛋白。
辣根过氧化物酶标记的抗人IgG抗体;汉坦病毒IgG阳性、阴性对照血清;缓冲液:
包被液:
碳酸缓冲液;稀释液:
PBS
洗涤液:
PBS-T;显色液:
A/B液终止液:
4NH2SO4酶标板、酶标仪。
6检测步骤:
用包被液按工作浓度稀释埃博拉病毒抗原和阴性对照抗原,100μl/孔,4℃过夜;
弃去包被液,用PBS-T重复洗涤3次;
将待检血清用稀释液从1:
100开始作2或4倍连续稀释,加入抗原孔,100μl/
孔,同时设汉坦病毒阴、阳性血清对照,37℃水浴30分钟;弃去血清,用洗涤液洗涤5~6次;
加酶结合物,用稀释液按工作浓度稀释,100μl/孔,37℃水浴30分钟;弃去酶标抗体,用洗涤液洗涤6次;
加显色液:
于各反应孔内加A/B液各一滴,37℃,避光3~5分钟;加终止液于每反应孔,100μl/孔。
7结果判断:
于450nm待检血清孔OD值与阴性对照孔OD比值≥,则标本为埃博拉病毒IgM抗体阳性,反之阴性。
.
阴性对照的正常值范围:
阴性对照孔A≤。
汉坦病毒阳性对照的正常值范围:
≤A≤8意义:
阳性结果,表明曾受到埃博拉病毒感染;恢复期血清抗体阳转,或抗体滴度比急性期抗体滴度有4倍及以上升高则可确诊。
9清场与消毒
操作结束后,及时清理生物安全柜内的物品,用%次氯酸钠溶液和75%乙醇擦试外表面后,移出生物安全柜放入冰箱中。
未使用完的感染性生物材料销毁或放入BSL-3级实验室-70℃冰箱,并如实填写操作和处理记录。
将实验区内的污染材料高压处理后,再集中高压处理。
附件6
埃博拉出血热相关标本实验活动意外应急预案
1总则目的
为有效预防、及时发现和有效控制发生在实验室范围内的埃博拉病毒相关感染性样品实验活动意外,最大限度的减轻意外事件对实验室人员和环境造成的危害,指导和规范生物安全工作,保障实验室工作人员身体健康、生命安全和环境的安全,保障埃博拉病毒实验室相关检测活动的顺利进行,特制定本预案。
编制依据
《中华人民共和国传染病防治法》《突发公共卫生事件应急条例》《实验室生物安全手册》原则
以“安全第一、预防为主”为应急处置原则。
适用范围
埃博拉病毒的实验室污染事件工作人员发生埃博拉病毒实验室暴露埃博拉病毒被泄露出实验室
于停电、火灾等不可预测因素所引起的实验室其他污染事件启动条件
当实验室发生意外事故的紧急情况下,可启动该预案。
2应急组织体系及职责应急指挥机构
在本单位实验室生物安全委员会或相应的部门及本单位各行政职能部门统一领导下,负责组织、协调实验室重大突发事件的应急处理工作,制定本部门的应对意外事故处理的
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- 关 键 词:
- 埃博拉 出血热 实验室 检测 方案