常用10种培养基的配置和质控标准.docx

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常用10种培养基的配置和质控标准

小结：

常用10种培养基的配置和质控标准

（1）基础肉汤

成分和配制方法：

蛋白胨

10g

NaCl

5g

牛肉膏

5g

酵母膏

3g

DW

1L

pH

7.4～7.6

15磅30min高压灭菌，倾注无菌试管备用。

每次新配制时做质控

阳性质控：

ATCC25923金黄色葡萄球菌接种基础肉汤中，35℃温箱24h肉汤混浊。

无菌试验：

<100管抽检5%,>100管随机抽取10管未接种的基础肉汤35℃温箱24h培养，无细菌生长。

平行试验：

质控时，要求新旧批号的培养基同时做

用途：

供培养对营养要求不高的细菌增菌用；作其他选择培养基的基础液。

储存

干粉：

室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基：

2-8℃保存一个月

（2）普通营养琼脂

成分和配制方法：

基础肉汤

100ml

琼脂

2g

15磅30min高压灭菌，倾注平板备用。

注：

可购买国内生产的瓶装营养琼脂粉，按上面的说明配制。

质量控制：

质控频度每次新配制时做质控

质控方法

阳性质控：

ATCC25923金黄色葡萄球菌或ATCC25922大肠埃希菌接种营养琼脂上，35℃温箱24h细菌生长良好。

无菌试验：

<100块抽检5%,>100块随机抽取10管未接种的营养琼脂35℃温箱24h培养，无细菌生长。

平行试验：

质控时，要求新旧批号的培养基同时做

用途：

供培养对营养要求不高的细菌。

作无糖基础培养基。

加血成血平板。

加血加热75℃以上，再加上生长添加剂就成巧克力平板。

储存

干粉：

室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基：

2-8℃保存半个月

（3）葡萄糖肉汤

成分和配制方法：

蛋白胨

10g

朊胨

10g

NaCl

5g

牛肉膏

5g

酵母粉

3g

葡萄糖

4g

枸橼酸钠

3g

硫酸镁

3g

DW

1L

pH

7.2～7.4

0.4%酚红

5ml

15磅30min高压灭菌，备用

质量控制：

质控频度每次新配制时做质控

质控方法

阳性质控：

ATCC25923金黄色葡萄球菌接种葡萄糖肉汤中，35℃温箱24h肉汤混浊。

无菌试验：

<100管抽检5%,>100管随机抽取10管未接种的葡萄糖肉汤35℃温箱24h培养，无细菌生长。

平行试验：

质控时，要求新旧批号的培养基同时做

用途：

供培养对营养要求不高的细菌增菌用。

6储存

干粉：

室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基：

2-8℃保存一个月

（4）血液琼脂平板

成分和配制方法：

（法国生物梅里埃成品培养基）

4g琼脂基础+100mL蒸馏水

高压灭菌（15磅、121℃）20min

冷却至50℃加入5%-10%无菌羊（兔）血

倾注于无菌平皿内（φ9mm）每一个平皿分装13~15ml。

质量控制：

质控频度每次新配制时做质控

质控方法

阳性质控：

ATCC6303肺炎链球菌（或质控菌株）和ATCC25923金黄色葡萄球菌接种于血液琼脂，35℃温箱24h细菌生长良好。

ATCC6303肺炎链球菌为α溶血。

ATCC25923金黄色葡萄球菌为β溶血。

无菌试验：

<100块抽检5%,>100块随机抽取10块未接种的血液琼脂35℃温箱24h培养，无细菌生长。

平行试验：

质控时，要求新旧批号的培养基同时做

用途：

供分离培养营养要求较高的细菌。

储存

干粉：

室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基：

2-8℃保存半个月

注意事项:

制备血平板时，温度必须适宜，琼脂应冷至50℃左右，如温度过高，可使血液变色不易观察溶血，温度过低，琼脂凝固与血液不易混合。

使用的血液以羊血，兔血为好，不宜使用人血，因人血中有抗体、补体不利细菌生长。

羊血对链球菌、葡萄球菌的溶血比较满意，但可抑制脑膜炎奈瑟氏菌与嗜血杆菌的生长。

（5）血液琼脂平板（国产）

普通营养琼脂粉

3.8克+100ml蒸馏水

10%葡萄糖

0.6ml

血液

6～10ml

冷却至50℃加入5%-10%无菌羊（兔）血

倾注于无菌平皿内（φ9mm）每一个平皿分装13~15ml。

质控方法

阳性质控：

ATCC6303肺炎链球菌（或质控菌株）和ATCC25923金黄色葡萄球菌接种于血液琼脂，35℃温箱24h细菌生长良好。

ATCC6303肺炎链球菌为α溶血。

ATCC25923金黄色葡萄球菌为β溶血。

无菌试验：

<100块抽检5%,>100块随机抽取10块未接种的血液琼脂35℃温箱24h培养，无细菌生长。

平行试验：

质控时，要求新旧批号的培养基同时做

用途：

供分离培养营养要求较高的细菌。

储存

干粉：

室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基：

2-8℃保存半个月

注意事项:

制备血平板时，温度必须适宜，琼脂应冷至50℃左右，如温度过高，可使血液变色不易观察溶血，温度过低，琼脂凝固与血液不易混合。

使用的血液以羊血，兔血为好，不宜使用人血，因人血中有抗体、补体不利细菌生长。

羊血对链球菌、葡萄球菌的溶血比较满意，但可抑制脑膜炎奈瑟氏菌与嗜血杆菌的生长。

（6）巧克力平板

成分和配制方法：

基础肉汤

100ml

琼脂粉

1.5g

无菌脱纤维兔血

10ml

方法：

高压灭菌后，冷至80—85℃加入兔血，混匀置85℃水浴10—15min，使血液由鲜红色变为巧克力色。

取出，当冷至50℃时倾注平板，经无菌试验后，保存冰箱中备用。

质控方法

阳性质控：

ATCC10211流感嗜血杆菌或ATCC49619淋病奈瑟菌，35℃，5%CO2温箱24-48h,细菌生长良好。

无菌试验：

<100块抽检5%,>100块随机抽取10块未接种的巧克力平板35℃5%CO2温箱24-48h培养，无细菌生长。

平行试验：

质控时，要求新旧批号的培养基同时做

用途：

分离培养脑膜炎奈瑟氏菌，嗜血杆菌。

淋病奈瑟氏菌的分离培养。

储存

干粉：

室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基：

2-8℃保存半个月

（7）双糖培养基

基础液

胰蛋白胨

10g

NaCl

5g

牛肉膏

5g

DW

1L

pH

7.4

0.4%酚红液

6ml

制备：

（1）基础液

500ml

葡萄糖

1g

琼脂

2.5g

（2）基础液

500ml

乳糖

5g

琼脂

7.5g

制法：

10磅20min高压灭菌高，先将葡萄糖倒入无菌试管内1/3处凝固后，再将乳糖加入2/3处，置成斜面。

质量控制：

质控频度每次新配制时做质控

质控方法

阳性质控：

将福氏痢疾杆菌（卫生部临床检验中心质控菌株）接种于双糖培养基中，生长良好，上层为红色/下层为无色。

阴性质控：

将ATCC27853接种于双糖培养基中，35℃温箱24-48h培养生长良好，上层下层均为红色。

无菌试验：

<100管抽检5%,>100管随机抽取10管未接种的双糖培养基35℃温箱24-48h培养，无细菌生长。

平行试验：

质控时，要求新旧批号的培养基同时做。

用途：

用于分离培养肠道致病菌。

储存

干粉：

室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基：

2-8℃保存半个月

（8）MH培养基

成分和配制方法：

可使用国产（北京奥博星生物技术有限公司）或法国生物梅里埃成品培养基配制：

3.8gM-H琼脂基础+100mL蒸馏水

高压灭菌（15磅、121℃）20min

冷却至50℃倾倒平皿，厚度4mm

质量控制：

质控频度每次新配制时做质控

质控方法

阳性质控：

ATCC25923、ATCC25922接种于MH培养基上，35℃温箱24-48h培养，细菌生长良好。

无菌试验：

<100块抽检5%,>100块随机抽取10块未接种的MH培养基35℃温箱24-48h培养，无细菌生长。

平行试验：

质控时，要求新旧批号的培养基同时做。

用途：

用于非苛养菌的KB法药敏试验用。

储存

干粉：

室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基：

2-8℃保存半个月

（9）沙保弱培养基

成分：

蛋白胨10克，琼脂20克，麦芽糖40克，水1000毫升。

方法：

于1000ml水中加入上述成分，加热煮沸，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，趁热调PH到7.6，定量分装于烧瓶内（每瓶100ml），高压灭菌103.43Pa15min，倾注于无菌平皿内（φ9mm）每一个平皿分装13—15ml。

待凝固后，于37℃培养18—24h，如无细菌生长，置冰箱中备用。

质控频度每次新配制时做质控

质控方法

阳性质控：

ATCC90028接种于沙保罗平板上，35℃温箱24-48h培养生长良好。

无菌试验：

<100块抽检5%,>100块随机抽取10块未接种的沙保罗培养基35℃温箱24-48h培养，无细菌生长。

平行试验：

质控时，要求新旧批号的培养基同时做。

用途：

真菌的分离培养用。

储存

干粉：

室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基：

2-8℃保存半个月

（10）念珠菌显色培养基

成分:

由琼脂、蛋白胨、色素、氯霉素等组成

配制方法：

准确称取科玛嘉念珠菌显色琼脂粉47.7克，加蒸馏水1000毫升，并在玻璃容器壁上标记液面刻度，边搅拌边加热到完全溶解，不要用蒸锅消毒，冷却到45℃后，用氨水矫正PH至6.3，摇匀，将其倾注入一次性无菌培养皿中制成平板，使平板深度为3mm左右。

质控频度每次新配制时做质控

质控方法

阳性质控：

ATCC90028接种于念珠菌显色培养基上，35℃温箱24-48h培养生长良好，菌落为翠绿色。

无菌试验：

<100块抽检5%,>100块随机抽取10块未接种的沙保罗培养基35℃温箱24-48h培养，无细菌生长。

平行试验：

质控时，要求新旧批号的培养基同时做。

用途：

念珠菌的常规鉴定用。

储存

干粉：

室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基：

2-8℃保存半个月

基础质控标准1

项目

标准

外观

液体培养基

清晰透明，无沉淀杂质，淡黄色

固体培养基

表面光滑，无干裂，无细菌生长

灭菌

一般培养基

15磅20～30分钟灭菌

糖类培养基

8～10磅15～20分钟灭菌

蛋白类培养基

流动蒸汽或血清凝固器80～95℃间接灭菌

pH值

用处电位计法或标准比色法测定，禁止用试纸法测定。

室温标准范围pH±0.2内

培养基的量度

固体培养基

一般培养基厚度为：

3mm，药敏培养基为：

5mm。

液体培养基

试管：

20～30ml，培养瓶为：

60～80ml

斜面

琼脂斜面

高度不超过试管的2/3，不干裂

双糖斜面

底层与斜面各占1/3，两者之间有1cm直立区

无菌实验

高压后培养基

不同环境按10%比例随机抽样无菌实验

分装培养基

不同环境按20%比例抽样；少量100%作无菌实验

分离培养基质控

培养基

质控菌株

预期结果

血液琼脂

乙型溶血性链球菌

乙型溶血，发育良好

绿色链球菌

甲性溶血，发育良好

巧克力琼脂

流行性感冒杆菌

发育良好

脑膜炎奈瑟氏务

生长良好

普通琼脂

大肠埃希氏杆菌

发育良好

表皮葡萄球菌

发育良好

高盐卵黄琼脂

金黄色葡萄球菌

卵磷脂沉淀，发育良好

大肠杆菌

不生长

沙氏琼脂

白色念珠菌

生长发育良好

大肠杆菌

不生长

麦康凯琼脂

大肠杆菌

分解乳糖，菌落红色

福氏痢疾杆菌

不分解乳糖，菌落无色透明

SS琼脂

福氏痢疾杆菌

不分解乳糖，菌落无色透明

鼠伤寒沙门菌

不分解乳糖，菌落无色中心黑色

中国蓝琼脂

大肠杆菌

分解乳糖，菌落蓝色

福氏痢疾杆菌

不分解乳糖，菌落淡红半透明

细菌生化实验质控

生化实验

阳性菌株

阴性菌株

糖发酵

大肠杆菌

绿脓杆菌

糖氧化

绿脓杆菌

大肠杆菌

V-P反应

产气肠杆菌

大肠杆菌

靛基质实验

大肠杆菌

产气肠杆菌

甲基红实验

大肠杆菌

产气肠杆菌

枸橼酸盐

弗氏枸橼酸杆菌

大肠杆菌

尿素酶实验

普通变形杆菌

大肠杆菌

硫化氢产生

普通变形杆菌

宋内氏痢疾杆菌

硝酸盐还原

大肠杆菌

硝酸盐阴性杆菌

氧化酶实验

绿脓杆菌

大肠杆菌

触酶实验

金黄色葡萄球菌

肺炎链球菌

七叶苷水解

肠球菌

溶血性链球菌

苯丙氨酸脱氨实验

普通变形杆菌

大肠杆菌

丙二酸盐利用

肺炎克雷伯氏菌

大肠杆菌

赖氨酸脱羧酶实验

鼠伤寒沙门氏菌

普通变形杆菌

鸟氨酸脱羧酶实验

鼠伤寒沙门氏菌

普通变形杆菌

精氨酸水解酶实验

鼠伤寒沙门氏菌

普通变形杆菌

凝固酶实验

金黄色葡萄球菌

表皮葡萄球菌

ONPG

大肠杆菌

奇异变形杆菌

血清厚膜孢子实验

白色念珠菌

类星形念珠菌

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