生物选修一考点.docx
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生物选修一考点
选修1—1:
《酶的应用》
一、酶在洗涤等方面的应用
【选学(了解)】——果胶酶及其应用:
1.果胶酶:
→是指一类酶的总称。
包括:
半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶。
2.果胶酶的来源:
→来自霉菌等微生物。
常采用霉菌等微生物发酵的方法生产果胶酶。
★提取果胶酶的条件:
→低温(0~4℃)、偏酸环境(pH:
3~4)、激活剂(10%NaCL)。
3.果胶酶的作用:
→能分解植物细胞壁及胞间层的果胶。
4.果胶酶的应用:
→常用于提高果汁的出汁率和澄清度。
5.探究果胶酶作用的最适条件(最适温度和pH)和用量的实验要点:
◆遵循单一变量原则和对照实验原则。
◆以果汁出汁量或澄清度作为判断酶活性的指标。
(一)酶在洗涤方面的应用【A】
1.普通洗衣粉的主要成分:
→表面活性剂、软水剂(三聚磷酸钠)、碱剂、漂白剂、香精等。
★表面活性剂:
→是洗衣粉的核心成分,作用:
→降低表面张力。
2.加酶洗衣粉:
→是指加入了蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶的洗衣粉。
(1)酶不能直接加入洗衣粉,所加的是用特殊化学物质包裹成的复合酶制剂。
①★加入洗衣粉的酶制剂不是固定化酶,其包裹材料能溶于水。
②加入洗衣粉中的酶来源:
→基因工程生产的酶。
能耐酸、耐碱、耐较高温度等。
(2)加酶洗衣粉降低了表面活性剂和三聚磷酸钠的用量。
★使用加酶洗衣粉不仅能增强了洗涤效果,还能减少对环境的污染(磷污染)。
(3)在洗涤剂中应用最广泛、效果最明显的酶是:
→碱性蛋白酶和碱性脂肪酶。
3.酶制剂的洗涤原理:
(1)碱性蛋白酶:
→可将血渍、奶渍等中蛋白质分解成可溶性氨基酸和易脱落小分子多肽。
(2)碱性脂肪酶:
→可将油渍、汗渍和口红等中的脂肪水解成脂肪酸和甘油等。
(3)淀粉酶:
→可将面、粥等中的淀粉水解为麦芽糖、葡萄糖等可溶性成分。
(4)纤维素酶:
→本身不能去污垢,但能使纤维结构变得蓬松,利于洗衣粉与纤维深处
污垢接触,增强洗涤效果。
★纤维素酶能去除衣物浮毛,不会分解衣物纤维素。
4.加酶洗衣粉使用注意事项:
(1)不能用于洗涤:
→毛织品和丝织品等蛋白质类衣物
(2)不能用70℃及其以上水温洗涤。
(★适宜水温:
35~50℃;适宜pH:
9~11)。
(3)不宜长期存放(酶会失效)。
◆加酶洗衣粉对人的皮肤有腐蚀性,应注意防护。
(二)探究加酶洗衣粉洗涤效果实验【B】
1.观察指标:
→(各实验都是)污物消失时间(或污物缩小的面积)。
2.各对照实验共有的无关变量:
→水用量、洗衣粉用量、污物量、布的质地大小、洗涤方式、浸泡和洗涤时间等。
3.比较普通洗衣粉与加酶洗衣粉洗涤效果的实验:
★自变量:
→洗衣粉种类。
无关变量:
→除共有的外,还有水温、pH、洗衣粉品牌。
4.探究不同种类加酶洗衣粉洗涤效果的实验:
★自变量:
→加酶洗衣粉种类。
无关变量:
→除共有的外,还有水温、pH等。
5.探究使用加酶洗衣粉的最适宜温度实验:
→各组温度形成自身对照。
(1)自变量:
→温度。
无关变量:
→除共有的外,还有pH等。
(2)应在最适温度左右等梯度设置多组温度进行对照实验。
★温度梯度越小越准确。
6.探究使用加酶洗衣粉的最适宜pH实验:
→各组pH形成自身对照。
(1)自变量:
→pH。
无关变量:
→除共有的外,还有水温等。
(2)应在最适pH左右等梯度设置多组pH进行对照实验。
★pH梯度越小越准确。
二、制备和应用固相酶:
(一)固定化酶和固定化细胞技术及其应用【A】:
1.固定化酶:
→是指用物理学或化学方法将酶与固相载体结合在一起形成的仍具有
酶活性的酶复合物。
★固定化酶可以反复使用,原因是酶与水溶液反应物和产物可以分离。
2.制备固定化酶的主要方法:
→包括:
吸附法、交联法、包埋法等。
(1)吸附法:
→利用离子键、物理吸附等
方法将酶分子吸附在固相载体的表面。
(2)交联法:
→利用(双)多功能试剂进行
酶与载体之间交联,形成三维网状结构。
(3)包埋法:
→将酶或细胞包埋在不溶于水的多孔载体中。
◆常用固相载体:
→海藻酸钠、纤维素、琼脂糖、明胶、聚丙烯酰胺、多孔玻璃等。
3.★制备固定化酶(细胞)的要求和方法选择:
(1)选择的固定化方法及材料不能影响酶活性;要避免高温、强酸、强碱等。
(2)制备固定化酶时:
→常用吸附法和化学结合法,不用包埋法。
★酶分子小,容易从包埋材料中漏出。
(3)制备固定化细胞时:
→常用包埋法。
不用吸附法和化学结合法。
★细胞个大,难以吸附或结合,不易从包埋材料中漏出。
4.直接使用酶、固定化酶和固定化细胞的比较:
主要优点
主要缺点
直接使用酶
催化效率高,耗能低、低污染。
不能反复使用,影响产品质量。
固定化酶
①能与产物分离,能反复使用。
②★易与反应物接触。
不能催化系列反应。
固定化细胞
①能与产物分离,能反复使用。
②★能催化系列反应。
③★酶活性高而稳定、
④★操作容易,成本更低
◆酶不易与反应物接触,反应
效率降低。
◆只能用于生产胞外酶和分泌到细胞外的产物。
5.固定化酶的应用实例:
(1)固定化葡萄糖异构酶:
→用于生产高果糖浆。
见右图:
(2)固定化青霉素酰化酶:
→用于生产各种新型青霉素。
(3)尿糖试纸:
→测试尿糖。
(含量:
浅蓝→浅绿→棕色→浅棕色)。
①尿糖试纸上含固定化葡萄糖酶和过氧化氢酶及无色化合物。
②尿糖试纸不能反复使用,因为用过的试纸上有颜色。
(4)固定化硝酸还原酶、亚硝酸还原酶、一氧化氮还原酶:
→进行废水处理。
(二)固定化酵母细胞的制备与应用(实验)【B】
1.制备固定化细胞常用凝胶包埋法。
①★制备固定化酵母细胞常用海藻酸钠凝胶包埋法。
②★凝胶是多孔载体,调节凝胶溶液的浓度,可以改变凝胶的孔径大小。
2.制备固定化酵母细胞的方法步骤:
→关键步骤:
配制海藻酸钠溶液。
(1)活化酵母细胞:
→目的:
→使酵母菌从休眠状态恢复到正常生活状态。
①操作:
→将1克干酵母和10ml蒸馏水放在50ml烧杯中混合并搅拌均匀,放置1小时。
②注意事项:
→容器要大一些,以防活化液溢出;混合后要进行搅拌。
(2)配制0.05mol/L的CaCL2溶液:
①操作:
→将0.83克无水CaCL2和150mL蒸馏水,放在200ml烧杯中使其充分溶解。
②★CaCL2溶液的作用:
→(起凝胶聚沉作用)促使凝胶珠的形成。
(3)配制海藻酸钠溶液(最关键):
①操作:
→将0.7g海藻酸钠和10ml蒸馏水加入50ml小烧杯中,小火间断加热至
完全溶化,加蒸馏水定容至10ml。
②注意事项:
→★应采用小火间断加热,以防焦糊;海藻酸钠浓度不宜过高过低。
③★海藻酸钠溶液浓度过高时:
→难以形成凝胶珠或凝胶珠形态异常。
④★海藻酸钠浓度过低时:
→凝胶珠中包埋的细胞数量少,凝胶珠色浅呈白色。
(4)海藻酸钠溶液与酵母细胞混合:
★应将海藻酸钠溶液冷却至室温后,再加入已活化的酵母细胞;并充分搅拌均匀。
(5)固定化酵母细胞:
①操作:
→用注射器吸取混合液,以恒定的速度缓慢地滴加到CaCL2溶液中,并不
断搅拌(磁力搅拌器搅拌),将凝胶珠在CaCL2溶液中浸泡30分钟。
②注意事项:
→注射器距液面距离不能太近、凝胶珠浸泡时间不能过短。
③★注射器距液面距离过近时:
→凝胶珠会出现拖尾现象。
④★凝胶珠浸泡时间过短时:
→凝胶珠不能形成稳定结构,容易裂开。
(6)冲洗:
→取出凝胶珠后,要用蒸馏水冲洗2~3次。
★冲洗的目的:
→洗去凝胶珠表面的氯化钙溶液和杂菌。
(7)发酵实验:
→将10%的葡萄糖溶液150ml加入200ml的锥形瓶中,加入固定化酵母
细胞在25℃下发酵24h。
观察气泡产生(CO2)和闻酒味,并用重铬酸钾检测酒精。
3.实验结果分析:
——酵母细胞凝胶珠质量检测。
(1)合格凝胶珠的标准:
①乳白色,圆形或椭圆形。
②摔打容易弹起。
③挤压不易破裂、无液体流出。
(2)凝胶珠异常的原因:
①色浅呈白色:
→海藻酸钠溶液浓度偏低,此种凝胶珠中包埋的酵母细胞数量少。
②不呈圆形或椭圆形:
→海藻酸钠溶液浓度偏高。
★此种凝胶珠为制作失败,不能使用;需要重新制作。
③拖尾现象:
→混合液浓度低,或注射器距氯化钙溶液液面距离太近。
④凝胶珠漂浮:
→混合溶液中含气泡。
⑤★凝胶珠容易裂开:
→凝胶珠在氯化钙溶液中浸泡时间过短。
选修1—2:
《生物技术在食品加工中的应用》
一、发酵食品加工的基本方法【A】
(一)传统发酵中所利用的微生物的比较:
酵母菌
醋酸菌
毛霉
乳酸菌
生物类型
真核生物
原核生物
真核生物
原核生物
代谢类型
异养兼性厌氧型
异养需氧型
异养需氧型
异养厌氧型
适宜生长温度
18℃~25℃
30℃~35℃
15℃~18℃
室温
主要用途
酿酒、发面
酿醋
制作腐乳
制酸奶、泡菜
(二)各类发酵食品的制作原理及方法:
1.制作果酒原理:
→以果汁为原料,利用酵母菌在无氧条件下(酒精发酵)产生酒精。
(1)自然发酵:
→利用附着在葡萄皮上的野生型酵母菌进行酒精发酵。
(2)工业生产上:
→用人工培养的纯种酵母菌进行酒精发酵。
(3)红葡萄酒是用带皮葡萄酿制而成,白葡萄酒是用去皮葡萄酿制而成。
(4)果胶酶可用于酒的陈酿化;蛋白酶可使酒体清澈透明。
2.制作果醋原理:
→以果汁或果酒为原料,利用醋酸菌在有氧条件下产生醋酸。
3.制作腐乳的原理:
→利用毛霉等微生物分泌的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶将豆腐中的
蛋白质、脂肪和淀粉分解为多种氨基酸、有机酸等;使腐乳鲜香可口,易消化吸收。
(1)在腐乳制作中,多种微生物参与了豆腐的发酵,但起主要作用的是毛霉。
①毛霉是丝状真菌,其代谢类型属于异养需氧型;适宜生长温度:
15℃~18℃。
②毛霉孢子分布广泛,空气中含有大量毛霉孢子。
(2)家庭和实验制作腐乳时,将豆腐坯暴露在空气中接种毛霉孢子。
(3)工业生产腐乳时,在严格无菌条件下接种优良毛霉菌种孢子。
★腐乳品质好。
①工业上生产腐乳步骤:
→①接种孢子。
→②培养和晾花。
→③压坯与装坛
②“晾花”的目的:
→增强酶的作用,散失霉味。
(4)醉方(添加黄酒制成)、红方(添加红曲制成)、青方(不加调料制成)。
4.酸奶和泡菜制作原理:
→利用乳酸菌在无氧条件下发酵产生乳酸。
(1)泡菜中亚硝酸盐含量变化规律:
→先增加再下降至原含量水平。
(2)泡菜制作要求:
→①压实和严格密封。
②加盐量不宜过多过少,控制在5%。
(3)食用时间:
→腌制10~11天以后。
★是否能食用,需要检测亚硝酸盐含量。
①比色法检测:
→将样品液显色情况与亚硝酸钠标准显色液比较估测出其含量。
②不同浓度的显色液呈不同程度的玫瑰红色。
二、果酒和果醋的制作【B】
(一)果酒制作:
→果酒中酒精含量应控制在10%~20%。
1.果酒制作方法步骤(及注意事项):
(1)对发酵瓶、纱布、榨汁机等进行清洗和消毒:
★发酵瓶要用温水反复清洗后,再用75%酒精擦拭消毒,晾干。
(2)取葡萄500克,先冲洗干净,再去除枝梗和腐烂籽粒,再次冲洗。
①冲洗目的:
→去除葡萄表面污物杂物。
★不能先去枝梗再冲洗。
②不能反复冲洗,否则会冲洗掉附着在葡萄表面的野生型酵母菌。
(3)用榨汁机榨取葡萄汁,之后将葡萄汁装入发酵瓶中,并盖好瓶盖:
【注意】→果汁不能装满(装入量不超过发酵瓶总体积的2/3)。
★目的是:
①让酵母菌有氧呼吸大量繁殖,保证发酵时有较大起始数量。
②防止发酵时发酵液溢出。
(4)将发酵瓶放置在18℃~25℃条件下发酵10~12天:
(5)每天定期排气1~2次(排CO2),以防瓶爆裂。
①为了防止发酵瓶爆裂,最好选用塑料瓶。
②排气时要防止杂菌污染,常拧松瓶盖排气,不能打开瓶盖。
③★右图发酵装置中排气管设计成长而弯曲状,既能排气,又能防止杂菌污染。
(6)取样检测酒精(10天后):
→用酸化重铬酸钾检测;也可闻酒味、镜检酵母菌。
【检测方法】→①取两支试管编号1、2,分别装入2mL酒精、2mL发酵液。
②向两试管中分别滴加3滴3mol/L的硫酸溶液,并振荡混匀。
③再向两试管中各加入饱和重铬酸钾溶液3滴,振荡后观察溶液颜色变化。
2.★制作果酒和果醋中防止杂菌污染的措施:
(1)对用具清洗并用酒精消毒。
(2)葡萄先清洗后除枝梗。
(3)排气管设计为长而弯曲状。
(4)无菌操作。
(二)果醋制作:
1.利用葡萄汁等果汁制作果醋:
(1)要向果汁中接种醋酸菌,并置于30℃~35℃条件下进行有氧发酵。
(2)发酵时需要不断通入无菌空气,同时也需要定期排气(排CO2)。
(3)反应式:
C6H12O6+2O22CH3COOH+2CO2+2H2O+能量
2.利用果酒制作果醋的方法步骤:
(1)将醋酸菌(醋曲或醋酸菌膜)接种到制作好的果酒中,并通入无菌空气。
(2)将发酵装置放在30℃~35℃环境中,不断通入无菌空气进行有氧发酵7~8天。
(3)检测果醋是否制作成功,并对发酵液(果醋)进行过滤、灭菌:
【检测方法】→①pH测定、②观察醋酸菌膜形成、③闻酸味、品尝、镜检等。
【提醒】→①变酸的果酒表面白色菌膜是由醋酸菌形成的。
②泡菜坛内表面白色菌膜是由酵母菌形成的。
(4)果酒制果醋反应式:
C2H5OH+O2CH3COOH+H2O+能量
(三)★果酒制作与果醋制作的比较:
果酒制作
果醋制作
发酵菌种
酵母菌
醋酸菌
最适发酵温度
18℃~25℃
30℃~35℃
对氧气需求
前期需氧,后期不需氧
一直需要氧
pH
4.0~5.8
5.4~6.3
发酵时间
10~12天
7~8天
方法与流程
挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵(果酒)→醋酸发酵(果醋)
三、腐乳的制作【A】
1.腐乳制作的基本流程:
→见下图:
(1)让豆腐上长出毛霉:
①将豆腐切成小块(4cm×4cm×1.5cm),用沸水消毒后微微晾干,制成腐乳坯。
在晾干过程中空气中毛霉孢子落到腐乳坯上,完成接种过程。
★所用豆腐含水量应控制在70%左右,含水过多腐乳不成形。
②将腐乳坯竖立放在清洁容器内彼此间隔1cm,将温度控制在15~18℃,并保持
一定湿度让毛霉生长;当菌丝变成淡黄色,有大量灰褐色孢子形成时停止发酵。
★若某些豆腐上长出青霉,应剔除这种豆腐或重新制作。
(2)加盐腌制:
→将长满毛霉的豆腐块用食盐水清洗后整齐地摆放在瓶中,用食盐腌制10天。
①★加盐方法:
→逐层加盐,加盐量逐层递增,接近瓶口的表面盐要铺厚一些。
②盐量:
腐乳坯量=5:
1。
★加盐过多会影响继续发酵,过少豆腐会腐败变质。
【加盐目的】→①析出豆腐中水分,使豆腐变硬,防止过早酥烂。
②抑制微生物生长,防止豆腐腐败变质。
③调节口味。
(3)配制卤汤:
→用食盐、水和料酒及各种香辛料等进行配制。
①卤汤中酒含量控制在12%左右。
◆酒的作用:
→抑制微生物的生长,并使腐乳具有独特酒香味。
★酒用量过多会抑制蛋白酶活性和影响腐乳风味;酒用量过少豆腐会腐败。
②香辛料的作用:
→调味、防腐杀菌。
(4)加卤汤装瓶,密封腌制:
→将配制好的卤汤加入瓶中,将瓶口通过酒精灯火焰,再用胶带密封瓶口,密封腌制6个月。
★装瓶时要迅速,瓶口要通过酒精灯的火焰,再密封。
2.腐乳品质鉴定及有关提醒:
(1)评价腐乳品质:
→应从形状、色、香、味、质地等方面进行评价。
(2)影响腐乳品质的因素:
→盐、酒、香辛料和发酵温度。
◆前期发酵温度为:
15℃~18℃;后期发酵温度(腌制时)为常温或30℃。
★在腌制过程中,毛霉等微生物(酶的作用)仍可继续发酵一段时间。
(3)腐乳外表的皮是附着在豆腐上的毛霉菌丝形成的,可使腐乳成形。
(4)用于腌制的玻璃瓶洗刷干净后要用沸水消毒,装瓶、密封等环节要无菌操作。
选修1—3:
《微生物的利用》
一、微生物的分离和培养【A】
(一)微生物与培养基:
1.微生物:
→是指除动物界和植物界以外的所有生物,包括病毒、原核生物、真菌和原生生物等
2.培养基:
→是指为人工培养微生物而制备的,适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物
的营养基质。
3.培养基的营养成分:
→一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等,有的还含生长因子。
(1)碳源:
→如:
无机碳(含碳无机物)、有机碳(糖类、脂质、蛋白质等)。
①无机碳:
→能为自养微生物提供碳素营养。
★无机碳是自养微生物的碳源。
②有机碳:
→能为异养微生物提供碳素营养和能源。
(2)氮源:
→如:
无机氮(含氮无机物)、有机氮(蛋白胨、尿素、氨基酸等)。
①为微生物提供氮素营养。
②★氮气(N2)是固氮微生物的氮源,
(3)水和无机盐:
→分别为微生物提供水、无机盐营养。
(4)生长因子:
→如:
维生素、必需氨基酸、碱基等,满足异养微生物合成酶和核酸。
【提醒】→①含C、H、O、N的有机化合物既是碳源,又是氮源和能源。
②蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、麦芽汁等既含碳源又含氮源、生长因子等营养。
4.培养基的种类及其用途:
(1)按物理状态可将培养基分为:
液体培养基、半固体培养基和固体培养基。
①液体培养基:
→未加凝固剂(琼脂)。
◆主要用于工业生产。
②半固体培养基:
→加入琼脂0.2~0.5%。
用于观察微生物的运动、分类和鉴定。
③固体培养基:
→加入琼脂1.5~2%。
★用于微生物的分离、纯化、计数和鉴定。
★琼脂是最常用凝固剂,熔点:
96℃,凝固点:
40℃,微生物一般不能利用琼脂。
(2)按化学成分可将培养基分为:
合成培养基和天然培养基。
①合成培养基:
→化学成分明确。
★用于微生物的分类和鉴定。
②天然培养基:
→化学成分不明确。
◆用于工业生产。
(3)按用途(或功能)可将培养基分为:
基础培养基、选择培养基和鉴别培养基。
制备方法
主要用途
实例
基础培养基
含微生物生长所需要的基本物质
选择培养基
添加或缺少某种
化学物质
从众多微生物中
分离出
所需微生物
◆加入青霉素分离酵母菌、霉菌等。
★加高浓度食盐分离金黄色葡萄球菌
★无氮培养基分离固氮菌。
★不含有机碳培养基分离自养微生物
鉴别培养基
加入某种指示剂或化学药品
鉴别不同种类
的微生物
伊红—美蓝培养基可使大肠杆菌的菌落
呈深紫色,可以鉴别大肠杆菌。
5.培养不同微生物所需要的温度、pH和时间:
细菌
放线菌
霉菌
培养温度
30~37℃
30~37℃
25~28℃
培养基pH
6.5~7.5
7.5~8.5
5.0~6.0
培养天数
1~2d
5~7d
3~4d
(二)微生物培养中的无菌操作技术:
1.无菌操作:
→是指在培养微生物的操作中,所有防止杂菌污染的方法。
★获得纯净培养物的关键:
→防止外来杂菌入侵(污染)。
2.消毒与灭菌的区别:
条件
效果与目的
常用方法
消毒
较温和的物理
或理化方法
杀死物体上大部分有害微生物
部分灭菌,不包括杀灭芽孢和孢子。
煮沸消毒法、巴氏消毒法、
紫外线或化学药剂消毒法等
灭菌
强烈的
理化因素
杀死物体内外所有微生物,
包括芽孢和孢子
灼烧灭菌、干热灭菌、
高压蒸汽灭菌。
3.常用消毒方法:
(1)煮沸消毒法:
→100℃煮沸5~6min。
◆常用于罐装食品、日常食品的消毒。
(2)巴氏消毒法:
→70~75℃下煮30min或80℃下煮15min。
◆用于牛奶、果汁消毒。
(3)化学药剂消毒法:
→①70~75%酒精、碘酒、新洁尔灭等可用于皮肤、伤口等处消毒。
②氯气用于水源消毒。
(4)紫外线消毒:
→30W紫外线灯照射30min。
★用于对接种室的空气进行消毒。
4.常用灭菌方法及其应用:
主要方法(及器械)
★适用范围
灼烧灭菌
用酒精灯火焰(外焰)灼烧
接种环、接种针、试管口、三角瓶口。
干热灭菌
置于干热灭菌箱中,
160~170℃加热1~2h。
①培养皿、试管等玻璃器皿,
②不适合其他方法灭菌的金属用具等
高压蒸气灭菌
(湿热灭菌)
置于高压灭菌锅中
100kPa、121℃、15~30min
培养基、无菌水及多种器材、物品。
5.无菌技术具体做法:
(1)对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洗和消毒。
(2)将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。
(3)为避免周围微生物污染,实验操作应在酒精灯火焰附近(旁)进行。
(4)实验操作时应避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。
6.(高压灭菌锅)高压蒸汽灭菌的操作方法:
(1)加水:
→装水量要没入电热管,
以防干烧爆裂,加水后
放入灭菌桶。
(2)装锅:
→将所要灭菌的材料装入锅内。
(不要装得太满),
(3)密封:
→盖上锅盖,两两对称地拧紧螺栓。
(4)加热排气:
→打开排气阀,接通电源加热;
约2分钟后有气体排出,排气约
5分钟后关闭排气阀。
【注意】→★一定要将冷空气排尽,否则达不到灭菌效果。
(5)保温保压:
→当压力上升至100kPa(0.1MPa)或温度达121℃时,维持20~30
分钟;然后关掉电源。
(6)出锅:
→待压力表指针回到零,温度下降至60℃以下,打开排气阀,开盖取出
锅内物品。
★一定要等到压力表指针回到零时,才能排气开盖。
否则压力过大会导致培养基
等内容物冲出,造成污染。
★灭菌完成后要将锅内余水倒出,保持内壁内胆干燥。
(三)培养基的配制、灭菌和倒平板。
1.培养基的配制原则:
→①目标要明确。
②营养要协调。
③pH要适宜。
2.细菌培养基的配制:
——牛肉膏蛋白胨培养基的配制过程:
1000mL牛肉膏蛋白胨固体培养基配方
成分
牛肉膏
蛋白胨
NaCl
琼脂
含量
5.0g
10.0g
5.0g
20.0g
将上述物质溶解后,添加蒸馏水定容至1000mL
(1)计算和称量:
→根据表中配方计算培养基各成分用量,并逐一称取。
【注意】→①牛肉膏和蛋白胨容易吸潮,称取时动作要迅速。
②牛肉膏粘稠度较大称取时要细心。
(2)溶化:
→将称取的各成分与水混合后进行加热溶化。
①★应将称量好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯;待溶化干净后取出。
②★在加热溶化过程中要用玻璃棒不断搅拌,以防止糊底而导致烧杯破裂。
(3)调节pH:
→用pH试纸测pH,通过滴加3%HCI或NaOH将pH调到7.0~7.5。
(4)分装:
→将培养基分装到试管或三角烧瓶中,分装好后用棉塞塞紧管口或瓶口。
①培养基分装量:
→试管:
为其高度的1/5。
三角烧瓶:
不超过瓶容积的1/2。
②分装时培养基不能污染试管口或瓶口。
★对试管或三角烧瓶要标记和编号。
(5)包扎:
→①试管:
3~5支扎成一捆,外包一层牛皮纸(防污染),用线扎好。
②三角烧瓶:
用牛皮纸包扎好,以防水蒸汽污染。
(6)灭菌:
→将包扎好的试管或三角烧瓶放入高压灭菌锅内进行高压蒸汽灭菌。
★培养皿用旧报纸包裹,放入干热灭菌箱内,160~170℃下灭菌1~2h后备用。
(7)倒平板:
→待培养基冷却到50℃左右(刚刚不烫手)在酒精灯火焰附近倒平板。
①将灭菌过的培养皿放在酒精灯火焰旁的桌面上,右手拿装有培养基的锥形瓶,
左手拨出棉塞。
②右手拿锥形瓶,使瓶口迅速通过火焰2-3次,以防瓶口附近微生物污染培养基。
③用左手的拇指和食
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