cytoflex流式细胞仪操作流程.docx
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CytoFLEX流式细胞仪操作流程
一、开机校正流程
1 开机前检查
1.1 检查鞘液桶,确认:
v鞘液桶内装有足量鞘液,同时不超过指示上限。
如使用灭菌纯水为鞘液时,需加入适当量抑菌防腐剂在鞘液桶内【建议使用原装鞘液】,防止鞘液桶及仪器流路管路长菌。
v防腐剂配方:
Proclin30000.05%w/v;2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮0.05%;2-苯氧乙醇 0.2-0.5%w/v;氟化钠 0.3g/L。
1.2 检查废液桶,确认:
v清空废液桶
v如果需要检测有生物危害性的样本,废液桶内加入 400ml 次氯酸钠原液。
2打开电源
打开位于仪器后面的电源开关,仪器通电。
电源指示灯亮。
可以听到“滴”一声轻响,工作站电源打开,等待工作站启动、系统启动完毕。
3打开软件
3.1 打开电脑,双击桌面CytExpert图标打开仪器,CytExpert软件界面出现。
3.2确保软件界面左下角连接指示灯应为绿色,左侧显示“已连接”,表示连接正常;左侧为连接状态,中间为仪器状态,右侧为状态信息。
注意:
连接指示灯为红色表示联机工作不正常。
确认仪器电源已正常打开,连线正确,保证仪器USB牢固连接到计算机,并重新启动计算机。
4初始化仪器
4.1 在“细胞仪”菜单中选择“开机流程”程序。
4.2 出现开机流程程序窗口,选择初始化。
4.3 等待系统初始化。
按照屏幕上的软件提示,然后选择启动,并按照软件指示完成仪器初始化。
4.4 在初始化结束后,选择关闭以退出启动程序。
现在系统被初始化。
4.4.1 现场配置有效氯浓度的1%~2%的次氯酸钠溶液1~2ml,并将其过滤备用【建议购买的花王白色衣服专用漂白剂(以下简称花王漂白剂),可直接取原液过滤备用】;
4.4.2 新建实验方案,将上样速度调整为高速;
4.4.3 将配置好的次氯酸钠溶液置于样本架,并点击运行5min【可根据实际情况延长/减少时间】后停止上样;
4.4.4 取2~3ml灭菌纯水置于样本架,并点击运行5~10min【可根据实际情况延长/减少时间】后停止上样;
4.5 排除流动室气泡
4.5.1确认仪器处于待机状态。
如果为非待机状态,可以选择“细胞仪”菜单下的“待机”,或是直接点击数据获取控制界面上的“待机”键设置。
4.5.2选择“细胞仪”菜单下的“排气泡”,运行气泡排除程序,等到“滴”声,并指示窗口消失,或是看到状态指示栏提示结束。
注意:
在检测过程中遇到信号不佳,怀疑可能有气泡的时候,也可以运行排除气泡程序;如怀疑管路可能有样品残留时,可采取1%~2%的次氯酸钠溶液和去离子水冲洗管路,参考4.4步骤。
二、仪器QC及验证操作
1 准备质控样本
1.1需要的材料
v12x75mm上样管
vCyto-CalTM+VioletAlignment&Set-upBeads 荧光微球
v0.2μm过滤去离子水
1.2 取0.5mL去离子水加入12×75mm的试管,再加入充分混匀的荧光微球1-2滴,混匀。
2 进入QC实验界面
2.1 打开CytExpert软件,确认已经联机,并且已初始化仪器。
2.2 选择“质控”菜单下的“启动质控”,运行QC程序。
3QC设置
3.1 在 QC 设置界面上在批号下拉菜单中选择正确的质控品批号。
注意:
不同批号对应有不同的靶值信息,选择错误的批号会导致错误的QC结果。
4 获取数据
4.1 点击“初始化”。
4.2 将准备好的质控样本管放入样本管支架。
4.3 点击“开始”上样,并进入QC实验界面。
4.4 软件左侧会显示运行过程,右侧会出现图形。
质控实验将依次进行检测配置、激光功率、延迟、信号强度、信号变异系数、本底背景信号。
4.5 运行过程中,软件将自动寻找质控微球全体,并获取计算数据结果。
等待QC实验过程结束,并回到QC设置界面。
注意:
如果上样速度过低,软件在运行过程中可能会自动停止进样并落下样本管,出现提示信息。
如果出现此情况,请提高样本浓度再进行实验。
5 确认结果
回到QC设置界面,任何时候均可回顾完成的检测结果
5.1 点击左侧QC结果列表,右侧即出现检测报告。
结果栏显示为 的表示通过,显示为的表示失败。
5.2 右侧的报告区域会显示具体的测试结果,分别显示激光的功率、延迟、检测条件和信号结果。
同样会以和标明各项结果。
对于没有通过的项目,超出范围的值将以红色字体标明。
在comment 区,会对未通过项目进行说明。
注意:
如果质控未通过,请按以下流程检查
1. 使用的微球是否在效期内,并按照说明书要求保存
2. 配置的样本管是否按要求正确处理并放置
3. 完成一次排气泡流程并再次检测
4. 完成一次清洗流程并再次检测
5. 若经以上处理后,质控仍然未通过,请咨询维修工程师
三、关机流程
1 准备清洗液
1.1需要的材料
v12x75mm上样管
v有效率浓度为1%~2%的次氯酸钠溶液【需过滤】
v清洗液
v0.2μm过滤去离子水
1.2 分别取1%~2%的次氯酸钠溶液、清洗液、去离子水备用。
2 清洗仪器
2.1 打开CytExpert软件,确认已经联机,并且已初始化仪器。
2.2 新建实验方案,将上样速度调整为高速;
2.3 将配置好的次氯酸钠溶液置于样本架,并点击运行5min【可根据实际情况延长/减少时间】后停止上样;
2.4 取2~3ml灭菌纯水置于样本架,并点击运行5~10min【可根据实际情况延长/减少时间】后停止上样
2.5 选择“细胞仪”菜单下的“每日清洗”,运行清洗程序。
2.6 将2mL清洗液放置在上样座,选择运行,默认清洗时间为3分钟。
2.7 等待结束后,将3mL去离子水管放置在上样位置,点击运行,进行第二步清洗。
默认清洗时间5分钟。
2.8 等待结束后,取下样本管。
关闭每日清洗窗口。
3 关机
3.1 退出软件,仪器会自动处于待机状态。
3.2 关闭计算机。
3.3 关闭仪器主电源开关。
四、日 常 保 养 与 维 护
为了保证CytoFLEX 流式细胞仪的正常运转和测定结果的可靠,仪器的日常保养与维护必不可少。
保 养 内 容
推 荐 频 率
1、添加鞘液、清洗液
每天开机前检查液面水平,如需要及时添加
2、清空废液桶
每天开机前检查废液的液面水平,如需要倒空废液桶
3、排气泡
无论何时,更换溶液时或做其他保养时,要执行该程序
4、鞘液桶
每月
5、清洗液瓶
每月
6、深度清洗
每周
清洗液的选择
∙漂白剂——NaClO溶液:
流式细胞仪的常规清洗用液。
漂白剂须经0.22μm滤膜或滤纸过滤后,稀释至有效氯浓度1%-2%,现用现配。
∙Contrad70 洗液:
深度清洗专用洗液。
每次以Contrad70 洗液:
蒸馏水=1:
1的比例配置30ml左右工作液,一般1个月更换一次(如果使用频率高,更换工作液频率可提高)
∙蒸馏水:
为了防止管路内残留有清洗液,形成结晶或造成管路接口的腐蚀,在使用清洗液清洗完毕后,一定要用蒸馏水,再次冲洗管路。
蒸馏水必须以0.22μm滤膜过滤后备用。
仪器日常维护
•每日实验结束后,请于关机前执行每日清洗程序,清洁样本针及进样管路,防止样本针及进样管路堵塞或有染料残留;同时用75%的酒精擦拭样品台表面以及半自动上样器底座
•在使用了一些荧光染(如PI、EB、AO、TO等)后,需要立即使用Beckman Coulter 的Cleanz液跑5min,然后换成蒸馏水跑5min;
•当观察到细胞碎片明显增加或背景噪音明显增加时,说明样本针及进样管路中有大量碎片或蛋白残留,应及时进行清洗程序。
清洗过程如下:
1、现场配置有效氯浓度的1%~2%的次氯酸钠溶液1~2ml,并将其过滤备用【建议购买的花王漂白剂,可直接取原液过滤备用】;
2、新建实验方案,将上样速度调整为高速;
3、将配置好的次氯酸钠溶液置于样本架,并点击运行至少5min后停止上样;
4、取2~3ml灭菌纯水置于样本架,并点击运行5~10min【可根据实际情况延长/减少时间】后停止上样;
定期维护
需要定期进行仪器检查和清洁,
•鞘液滤器的更换:
定期更换鞘液过滤器,以保证能有效过滤鞘液内的杂质,保障液路正常稳定。
厂家建议更换鞘液过滤器的周期为6个月【可根据实际情况进行更换】。
•蠕动泵管的更换:
厂家建议的更换周期为6个月【可根据实际情况进行更换,如果使用频率非常高,可以提前自备蠕动泵管】。
样本的处理
样本上样前,必须经过过滤去除聚集物,防止样本上样针的堵塞,可采用300目的细胞筛过滤细胞样本.
上样针的维护
由于1.5ml的EP管材质不均一,所以上样前先将EP管盖子剪掉,然后将EP管放在上样底座正中央,不可歪斜放置EP管,以免造成上样针的损伤.
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