完整版抗药抗体免疫原性分析方法学验证指导原则中文版.docx
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完整版抗药抗体免疫原性分析方法学验证指导原则中文版
抗药抗体免疫原性解析方法学考据指导原则
大纲:
几乎全部的生物制药产品都会引起必然的抗药抗体(anti-drugantibody,ADA)反应,抗药抗体反应可能会降低药物疗效或以致严重的不良反应。
在人体
内,抗药抗体平时不会引起明显的临床反应。
但是关于某些治疗性蛋白质,抗药抗体反应能引起各种临床的不良反应,包括平易事件及严重不良事件。
临床前研究表示,抗药抗体能对药物裸露、药物毒性作用、药物代谢动力学、药物效应动
力学等造成影响。
因此治疗性蛋白质的免疫原性引起了临床医生、药企及看守机构的注意。
为了评估生物药物分子的免疫原性,以及将实验结果与临床事件联系起来,在临床前研究和临床研究中,很有必要开发可靠的能够有效评估抗药抗体反应的实验方法。
这里方法学考据显得特别重要,并且方法学考据是药物上市申请必不能少的。
现行的看守文件关于免疫解析方法的考据的指导相当有限,特别是缺乏相关免疫原性解析方法的考据的指导。
因此,本文抗衡药抗体免疫解析方法的考据供应科学的建议。
在现有的关于生物解析的规范性文件的基础上加入独到的性能考据。
笔者建议采用实验和统计学的方法进行免疫解析的方法学考据。
这些建议被视为最正确的例子,旨在促进整个医药行业形成一个更加一致的抗体检测方法。
1.简介:
生物制药产品包括氨基酸聚合物、碳水化合物或核酸,一般经过人细胞系、
哺乳动物细胞或细菌进行表达,比老例的小分子药物更大(一般大于1~3KD)。
由于以上特点,生物制药产品引起免疫反应的潜力更大。
生物制药的免疫原性与产品的内在因素(种属特异性表位、外源性、糖基化程度、聚合或变性程度、杂
质和制剂)、外在因素(给药路子、慢性或急性给药、药代动力学及内源性当量)、患者因素(自己免疫性疾病、免疫控制、和取代疗法)相关。
抗药抗体反应可能会以致严重的临床症状,包括过敏、自己免疫和不一样的药代动力学特点(比方,药物中和、生物分布异常和药物除去率增强等均可能会使
药物的的疗效发生改变)。
药物引起的免疫反应是药物安全性和有效性的重要指标,这也是看守机构、生产企业、临床医生和患者共同关注的。
因此,美国食品药品督查管理局以及欧盟、日本、加拿大、澳大利亚等国家的看守机构均要求经过药理学或毒理学相关的方法抗衡药抗体进行评估。
免疫原性与临床症状之间的相关性的研究依赖于临床前研究和临床研究中关于抗药抗体的客观检测和表征。
所免得疫原性生物解析方法在用于检测研究样本从前应进行合适的开发及考据。
已有初版物供应了关于抗药抗体检测和表征的策略、方法开发及优化等方面的指南。
方法学考据是对解析方法的谈论,经过特定的实验室方法表示采用的解析方法适用于相应的检测要求。
详细到抗药抗体的检测方法,考据就是指证明该方法能可靠的(比方一致性和重复性)在复杂的生物基质(血清或血浆)中检测出低量的药物特异性抗体。
方法学考据应该经过起初研究阶段和研究阶段两个阶段进行,起初研究阶段是指在解析样品从前的工作,研究阶段是指样品的解析工作,
起初研究阶段和研究阶段关于表示解析方法的有效性和可控性同样重要。
本文主要介绍抗药抗体免疫解析方法考据的主要性能特点,介绍方法学考据相关的方法和措施。
本指南应该被视为最正的确践模范,考虑到详细本质解析方法时,在保持科学合理性和客观性的情况下,也能够采用取代方法。
若采用取代方法,建议与看守机构进行充分谈论。
以细胞功能为基础的中和抗药抗体生物检测和细胞介导的免疫解析不在本指南的谈论范围内。
2.方法
抗药抗体检测
临床和非临床研究平时是经过对治疗引起的抗药抗体反应的检测和表征来
评估药物的免疫原性。
目前可经过多种方法可用于抗药抗体的检测,包括酶联免
疫法(ELISA)、放射免疫检定法(RIA)、放射免疫积淀法(RIPA)、表面等离
子体共振(SPR)、电化学发光法(ECL)。
每一种检测方法均有其优点和限制性,
在近来的文章中已进行过谈论[8,14]。
无论是采用何种方法,在方法开发和优化
后均应进行正式的方法学考据,以保证该方法合适相应的检测要求。
因此能够预
测,本指南的考据建议适用于大多数的抗药抗体免疫检测。
研究人员应依照检测
系统的特点确立合适的方法学考据方案。
临床研究中抗药抗体的检测和表征平时包括四种不一样种类的方法。
抗药抗体
检测试验平时包括精选试验和特异性确证试验,表征试验平时包括抗体滴定和中和抗体检测[10]。
应用到详细研究样本时,抗药抗体解析试验需要两个重点决策
参数,分别为精选试验的精选临界点(screeningcutpoint)和特异性确证试验的特异性临界点(specificitycutpoint)。
精选临界点有助于抗药抗体检
测结果的分类,高于精选临界点为活性样品(活性样品平时为潜藏阳性样品),低于临界点为无活性样品。
活性样品经过特异性确证试验(如竞争性药物控制信号通路)检测是阳性(特异性活性)仍是阴性(非特异性活性)。
特异性临界点
为控制信号通路所需的样品量,也就是详细药物的抗药抗体,需要经过试验确立。
抗药抗体的检测方法平时是非定量试验(有时是半定量试验),由于没有可用的标准化的物种特异性的抗药抗体作为校正标准品[15]。
阳性比较一般都是内部开发的(比方单克隆抗体或高免血清的多克隆抗体),不能能将受试者检测到的全部抗药抗体作为阳性比较。
若是准备使用质量单位标示抗药抗体水平,那应该证明标准品和试验样品的平行性,以确立样品的浓度的正确性[8,10]。
若未证明样品与标准品间的平行性,则正确性是可疑的。
滴定法是另一种评估抗体水平的方法,该方法不同样品稀释间简单缺乏平行性。
但是,值得注意的是已有研究表示,滴定法适用于抗体水平的评估。
几十年来,临床上感染、自己免疫疾病的诊断和治疗以及预防接种等都采用这一方法[16~22]。
滴定法比较抗药抗体反应
更加简略且所需的考据工作更少,由于其不需要再对不一样产品的抗药抗体与
标准品间的平行性进行详细描述与证明。
其他质量单位法每当标准品品改变时均
需要进行重新考据。
综上所述,两种方法都无法供应正确的定量数据。
因此,赞
助商建议采用相对浓度(质量单位)或滴度表示抗药抗体水平。
某些看守机构会
更倾向于使用滴度单位。
滴度是还能够产生阳性结果的最大稀释倍数的倒数。
在方法的开发和优化阶段,应先确立方法并进行记录,比方选择所需的试剂、最正确浓度、预期样品所需的最大稀释倍数等。
这些需要研究人员在起初研究阶段进行简单或重复确证。
本文假定以手下性在考据从前已被确证:
免疫解析方案及方法设计,解析基质的种类,最大稀释倍数(MRD)、试剂的最正确浓度、酶标板的平均性评估(如地址的影响、漂移等)。
看守机构可能会要求供应相关的数据
支持。
在方法的开发和优化阶段,经过对照较品的检测,对方法的变异性有一个初步的认识。
统计学的应用
降低考据过程中的主观作用是本文的重点之一。
为了保证明验的客观性必定依赖于统计手段。
由于大多数研究者无法获得统计学家的服务,本文供应了简单且足够严格和有效的统计学方法。
所涉及的统计计算都能够采用商业统计软件进行计算,计算过程不需要经验丰富的统计学家。
但是,若是有统计学家协助进行考据明验设计和数据办理的话,统计学的应用可能会比本文供应的更加严格和有效。
3.预研究考据
临床和非临床研究中在开始样品生物解析前的考据试验称为预研究考据,它主要从数学和可定量方面描述解析方法的性能特点[8]。
预考据(prevalidation)
是指研究工作启动前的筹备工作,两者不能够混淆。
另一方面,在研究考据是指监控整个方法使用过程的性能特点,以保证方法的有效性和数据的可靠性。
经过完满的方法开发和优化后,解析方法应具备考据的条件,如优化试验数据表示检测方法拥有潜藏的可靠性和适用于相应的检测要求。
方法的可靠性依赖于解析设备和计算机系统的正常运转以及试验人员的熟练程度。
本质上,
解析方法是包括多个因素的整系通通而不能是是试剂而已。
考据方法应包括系统适用性,这属于在研究考据范围。
建议开始预研究考据从前拟定相应的考据明验方案或考据明验标准操作程序(SOP),考据明验方案应说明该方法的预期目的、解析方法的详细说明、待
考据的性能特点以及精美度、庄重性、牢固性和耐用性的预期查收标准。
其他建议在考据明验方案中加入合适的实验细节和数据办理步骤,这样能够为考据人员供应一个明确的指导以保证更好的办理数据。
抗药抗体检测应建立相应的查收标准,有助于保证在研阶段的试验的有效性。
为此,应经过对考据过程中获得的数据进行统计谈论后建立用于质控的系统适用
性标准(可接受范围)。
其他,在研考据阶段中间精美度试验,比较品和样品检
测也应有相应的查收标准。
当在研考据阶段的解析数据不吻合查收标准时,应拒绝该数据。
在预研考据阶段不应建立查收标准,由于这可能会使某些考据数据被除去,以致不能够正确估计解析误差。
除了可明原因(如技术误差)、有意或没心
偏离实验方案所得解析数据应被剔除外,预研阶段的全部解析数据都应计算在内。
目前,美国食品药品督查管理局(FDA)、国际协调会议(ICH)和美国药典的指导性文件阐述了定量检测的解析考据应研究的一般性能特点[23~25]。
由于抗药抗体免疫解析属于半定量检测,因此有些要求其实不不适用。
关于抗药抗体免疫解析方法学考据,对付以下9项参数进行测定:
1.精选临界点
2.确证临界点
3.矫捷度*
4.系统适用性控制(QCs)查收标准
5.耐药性*
6.精美度
7.鲁棒性
8.牢固性*
9.耐用性(有条件时)
若是解析方法的开发和优化过程已充分说明并获得合适记录,在预研考据阶段不需要对以上标有*的参数进行重复考据,尽管考据报告中应供应相关的数据。
若是最后的方法有所变动的话,预研考据阶段应重新测定。
抗药抗体检测方法开发阶段的预期用途和产品上市后的用途可能会不一样。
比方,在开发早期只有一个解析人员进行试验,开发工作完成后和上市后可能会有多个解析人员进行试验。
整个产品生命周期的考据要求应随着检测方法应用的改变而改变。
尔后,在药物申请期间仍是对付以上列出的参数进行考据。
传统解析方法的稀释线性测试不适用于抗药抗体检测。
当使用滴度标示抗药抗体反应时,需要使用阳性比较,也许最好使用累积抗药抗体阳性样品,在合理稀释范围内不出现异常非线性。
平时,在方法开发阶段都会包括最大稀释浓度
(MRD)的选择,考据阶段不需要进行重复测定。
若是出现前带效应,建议选择一个不受前带效应影响的MRD,也许采用多种稀释样品。
稀释线性信息有助于设计系统适应性质量控制。
3.1精选临界点
精选临界点定义为精选试验的响应水平,响应值高于该临界点的样品为活性样品(也许称为潜藏阳性),响应值低于该临界点的样品为阴性样品。
一个有效的精选临界点需要在预研究考据阶段对一些列样品测定值进行系统性的统计分
析确立,所使用的样品要求来自代表药物使用目标集体或受试者。
当免疫解析的方法存在错误风险时,精选试验情愿出现假阳性也要防备假阴
性[8,10]。
若是精选试验中不能够鉴别出活性样品,应思疑该方法检测低阳性样品的能力。
约5%的精选试验的阳性结果为假阳性,从而保证能够检测出低阳性样
品[8]。
在实践中,假阳性结果总比没有阳性结果好(如假阳性率可能不等于5%)。
精选临界点的种类
能够应用于在研考据阶段的精选临界点共有
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