Agilent海尔液相色谱仪VWDDADFLD检测器操作维护和期间核查规程.docx
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Agilent海尔液相色谱仪VWDDADFLD检测器操作维护和期间核查规程
Agilent1260液相色谱仪+VWD+DAD+FLD检测器操作、维护和期间核查规程
1目的:
为保证仪器的正常使用及测量结果的真实可靠特制定本规程。
2范围:
本规程适用于Agilent1260液相色谱仪测定食品、保健食品、食品添加剂等样品时的操作、维护和期间核查。
3职责:
仪器使用人按本规程操作仪器和作好使用登记。
仪器责任人负责监督仪器的使用、保管、维护与保养和期间核查。
仪器设备管理员负责仪器的综合管理。
4仪器组成
Agilent1260高效液相色谱仪由真空脱气机、四元泵、自动进样器、柱温箱、VWD、DAD、FLD检测器及OPENLABCDS工作站组成
5操作规程
5.1开机前准备
准备好流动相并安装色谱柱。
将水相放入A/D瓶,有机相放到溶剂瓶B/C,同时配制10%的异丙醇/水溶液以备柱塞清洗用。
5.2开机
5.2.1打开计算机:
打开计算机电源,登陆Windows操作系统。
Agilent1260各模块(脱气机,四元泵,自动进样器,柱温箱,检测器)左下方的电源开关,液相各模块进入自检,右下方的指示灯不同颜色闪烁几下,最后变成橘黄色或无色,启动完成。
点击屏幕左下角“开始”,选择“所有程序(P)”,选择“AgilentTechnologies”选择“OpenLAB”,选择OpenLABControl,或双击桌面
图标,则会进入到下面的界面:
下面步骤如果已经配置过,则不需要操作通过点击菜单左上方的
,可以分别创建位置和仪器,得到如下界面
输入相关信息,注意仪器类型一栏要选择AgilentLCSystem,输入完后点击确定。
出现如下界面
选定刚刚创建的仪器名称,点击“配置仪器”,
选择“配置模块”,注意不要选择“使用经典驱动程序”。
如果仪器中包括DAD、FLD,则需要选择“3D光谱评估”。
点击确定
选择“是”,来配置仪器
系统会根据指定IP地址来找到所配置的模块及其相关信息,点击确定。
再次点击确定,是配置生效
点击“启动”或者“离线启动”来打开在线或离线工作站,也可点击“创建快捷方式”来生成
。
这样就不必每次使用都打开OpenLAB控制面板了。
开启工作站:
工作站打开,点击“方法和运行控制”或者在“视图”中选择“方法和运行控制”。
打开仪器控制视图:
选择“视图→系统视图”,即可显示仪器控制视图,选择“视图→样品视图”,即可显示样品信息视图
模块右上角状态灯颜色说明:
无色,未开电源或者模块准备就绪
黄色,模块未准备就绪
绿色,正在进样分析
红色,模块出错
所有模块红色,仪器有漏液
工作站图形颜色说明:
绿色,模块准备就绪
黄色,模块未准备就绪
蓝色,正在进样分析
红色,出错或者不能联机
灰色,此模块没启用
可将鼠标移至系统或各模块的状态指示栏
系统会自动显示未就绪或出错的原因
配置流动相:
将流动相装入溶剂瓶中。
设置溶剂瓶参数,在溶剂瓶图形
上单击鼠标左键,出现图形如下
点击“溶剂瓶填充量”设置溶剂瓶中流动相实际体积,也可设定低体积关泵
冲洗流动相管路:
反时针旋开泵模块上的溶液排空阀
右键单击泵视图的空白处,选择“方法”,设置“流速”为5ml/min,对于G1211X(四元泵)分别将A,B,C,D四个通道设置“溶剂”为100%(点击
中各个通道后面的方框,即可开启“%”设置框,输入需要设置的数值百分比后,单击右侧的开白框,A相即可自动位置为100%-(%B+%C+%D的百分比),冲洗:
对于G1312X(二元泵),冲洗A、B两个通道;对于G1310X(单元泵),冲洗一个通道即可
空白处都会弹出提示框,选择“控制”即可在新的窗口中选择打开或者关闭各个模块。
也可在仪器视图中选择
“打开”
监视基线:
点击“视图→在线信号”打开“在线图谱”
点击“改变”按钮,选择“可选信号”中需要监视的信号,“添加”到“选定信号中”。
调整“窗口”中“X轴范围”,如需要画“0”点基线,请选择“画零线”。
调整Y轴“Y轴范围”与“偏移量”或者选择“Y轴自动调整”来选择合适的监视图形
平衡色谱柱、进样分析:
关闭溶液排空阀(确认泵流量为1ml/min),监视压力和信号基线等待平稳后,可以进样采集分析
5.3数据采集方法编辑:
5.3.1设置泵(四元泵)
右键点击泵模块视图空白处,选择“方法”或者点击进入泵的参数设置界面
流速---设置泵的流速,在“压力限-上限”>200时,流速设置范围为:
0-5.00ml/min;在“压力限-上限”≤200时。
流速设置范围为:
0-10.00ml/min
停止时间---设置泵停止分析的时间,时间范围为:
0.0-99999.00min或“无限制”
后运行时间---泵在后运行时间保持后运行状态,从而延迟下一个分析的开始。
在溶剂成分改变后(例如,在梯度洗脱后),可以使用“后运行时间”是色谱柱达到平衡,时间范围为0.0-99999.00min或“无限制”
压力限---“上/下限”是最大/小压力限制,达到“上限”或者“下限”值时,泵将自动关闭,从而防止分析系统压力超限
溶剂---溶剂B、C和D的百分比可以设置为0到100%之间的任何值。
“溶剂A”通常输送剩余的量:
100%-(%B+%C+%D)
时间表---通过在“时间”字段中输入时间并在时间表的以下字段中输入适当的值,可以使用时间表对分析过程中参数进行设置。
泵时间表中的值随时间从初始值到时间表中定义的时间所对应的值发生线性变化(例如,流速和压力最大限制);“溶剂B”为非“关闭”状态时,“时间表”的参数“%B”为黑色可以编辑,否则为灰色不可编辑状态。
此处可选择改变的参数包括流动相比例、流速、压力最大限制。
若配有溶剂切换阀,则需设定A、B、C和D的切换流量、比例和时间。
控制
右键点击泵模块视图开白处,选择“控制”进入泵的控制界面
泵-控制泵的“启动”,“关闭”或者“待机”状态
蹦密封垫清洗组件(选配)---控制蹦密封垫清洗蠕动泵的开关以及定期开关的程序
右键点击进样器模块视图的空白处,选择“方法”后进入进样器的参数设置界面
标准进样---简单的进样,在“进样量”字段中制定进样量。
进样量取决于自动进样器的配置设置
洗针进样---可以指定进样包括在抽取样品后,将针移动到针座之前进行针清洗,在“针清洗”字段中制定装有清洗溶剂的位置(瓶)
使用进样器程序---可以使用当前的进样器程序,将显示当前进样器程序中行数。
选择“编辑”可以显示“进样器程序”,以进行编辑
最优化---启用重叠进样,可适当减少运行时间
保存温度---保存自动调温控制的自动进样器的温度设置
柱温箱(G1316A)
右键点击柱温箱模块视图空白处,选择“方法”进入柱温箱的参数设置界面
温度---控制柱温箱温度。
限值:
-5.0到80.0度。
柱温箱只能冷却到比环境温度低10度的温度
停止时间---设置柱温箱停止分析的时间。
一般设置为“与泵一致”即可
时间表---此处可以变化的参数包括左右加热模块的温度
右键点击VWD模块视图的空白处,选择“方法”进入VWD的参数设置界面
波长---设置VWD检测波长
峰宽---设置为色谱图中的预期的最窄峰。
峰检测器将忽略比峰宽设置
窄很多或者宽很多的所有峰
停止时间---设置VWD停止分析时间。
一般设置为“与泵一致”即可
杂项---当VWD与其他检测器一起工作或者设定冲洗色谱柱的梯度方法
时,关闭检测器的灯,分析将停止。
如果希望关闭检测器的灯时也能进
行分析,将“采集所需的等已打开”一栏不选定即可。
时间表---此处可以变化的参数包括自动平衡、改变波长、执行扫描
控制
右键点击VWD模块视图空白处,选择“控制”进入VWD的控制界面
灯---控制检测器灯的开关
接通电源时---选择,则在打开电源的同时也点灯。
为了延长灯的寿命,建议不选此项,以便在冲洗系统或者其他不需要检测器工作的情况下节省灯的消耗
开启时间---可以设定自动开启的时间来提前预热氘灯准备分析
右键点击DAD模块视图的空白处,选择“方法”进入DAD的参数设置界面
信号---样品:
检测到的样品吸光度所对应的波长。
参比波长对应的吸光度将从样品波长对应的吸光度中扣除;带宽:
样品波长的带宽。
带宽决定了检测吸光度的波长范围通常小于20nm,例如,样品波长为254nm,样品带宽为20nm,则从244到264nm的波长范围检测吸光度;参比:
参比吸光度对应的波长。
参比波长可以补偿由于基线吸光度中的变化(例如,由于梯度洗脱中溶剂组成的变化)而引起的波动;带宽:
参比波长的带宽通常设定为小于100nm。
G1315C/D和G4212A/B二极管阵列检测器可以存储8个信号
停止时间---设置DAD停止分析时间。
一般设置为“与泵一致”即可
光谱---存储:
定义了在信号A上提取并保存光谱的点。
“无”,未提取光谱;“顶点+基线”,在风的顶点和基线处提取光谱;“顶点+斜率+基线”,在峰的顶点、基线、上升斜率和下降斜率提取光谱;“峰中的全部”,提取峰内的所有光谱;“每个一条光谱”,选择“全部”,将连续提取光谱,但是只每个一条光谱存储一条光谱,其他光谱将被弃用,这样可以减少必要的数据存储量;“全部”,根据“峰宽”设置连续提取光谱。
每个峰宽采集八条光谱,一条光谱的采集时间略少于峰宽
除以8,即大于或者等于0.01s且小于或等于2.55s
范围---定义光谱存储的波长范围。
从190nm到950nm
步长---定于光谱存储的波长分离度。
从0.10nm到100.00nm
阈值---预期的最小峰高度。
峰检测器忽略低于阈值的所有峰且不保存光谱。
限值:
0.001到1000.00mAU,步长为0.001mAU
狭缝---设置检测器的光学带宽;狭缝越窄,仪器的光学带宽就越小,但其灵敏度也越低。
光学带宽越小,光谱的分离度就越高
温度控制---G1315C/D二极管阵列检测器的光学设备的温度控制。
保持光学设备在一个恒定的温度可以提高不稳定高温环境下的基线稳定性
时间表---DAD中可改变的参数包括自动平衡、更改信号、更改阈值、更
改峰宽、更改光谱采集模式
控制
右键点击VWD模块视图空白处,选择“控制”进入VWD的控制界面
灯---控制检测器灯的开关
接通电源时---选择,则在打开电源的同时也点灯。
为了延长灯的寿命,建议不选此项,以便在冲洗系统或者其他不需要检测器工作的情况下节省灯的消耗
开启时间---可以设定自动开启的时间来提前预热氘灯准备分析
右键点击FLD模块视图的空白处,选择“方法”进入FLD的参数设置界面
按照标准试验要求分别设置:
激发波长、发射波长、停止时间(一般设置与泵一致)、时间表等参数
小注:
如果选择多个激发波长或发射波长,还可以选择采集光谱。
右键点击ELSD模块视图的空白处,选择“方法”进入ELSD参数设定界面
参数设置
温度---ELSD漂移管的温度,可设置的范围为20℃-100℃,但最低要比
室温高5℃
增益---可以输入从1到12,数值每增加1就会使灵敏度增加2倍,Gain
值推荐使用6或7
偏移量---可以输入-999到1000mV,使得基线不同于0mV。
采样时间---可让您选择用于分析的色谱峰的响应时间(以毫秒/赫兹为
单位)
噪声过滤器---其数值是优化信噪比和峰型的,off为未过滤,数值为
0.5至10。
启动分析
两个启动分析选项分别是气体压力和漂移管温度满足方法开始的范围
关灯
运行后关灯和运行后关气,可以是方法运行结束后关闭LED灯和氮气,延长灯的寿命和节省氮气
注意:
我们建议方法运行后保持温度和氮气30分钟,使检测器被吹干后再关机,这样有利于仪器的维护和保养。
停止时间
可以单独设置ELSD的运行时间或是与泵一致
后运行时间
使下一个分析延迟开始,例如使梯度洗脱后柱子有足够的时间来平衡
自动归零
杂项---每次分析前自动归零
增益更改后自动归零
可用---当增益改变时,不做自动归零
自动归零---每次gain改变时都要做自动归零
添加---当增益改变时,基线保持不变
时间表
在方法中创建一个时间表,在不同时间中执行不同的温度、增益、偏移量
和噪声滤波器
5.4数据分析方法编辑
从“视图”菜单中,点击“数据分析”进入数据分析画面。
从“文件”菜单中选择“调用信号”选项,选中您的数据文件名,点击确定,数据被调出
5.4.1谱图优化
从“图形”菜单中选择“信号选项”,如下图所示:
从“范围”中选择“满量程”或“自动量程”及合适的显示时间或选择“自定义量程”手动输入X、Y坐标范围进行调整,点击“确定”。
反复进行,直到图的显示比例合适为止。
选中化合物的名称前的空白框
选择“图形->新建标注”或者点击
即可在工作站窗口右边打开图形编辑菜单
,可以在色图谱中任意位置添加文字、图形等内容
选择“图形->信号选项”中选择“化合物名称”即可将命名的化合物名称添加到当前的色谱图中
积分事件参数详细介绍,请参看“了解您的工作站”的用户手册
自动积分方法,从“积分”菜单中选择“积分事件”选项,选择合适的“斜率灵敏度”,“峰宽”,“最小峰面积”,“最小峰高”。
从“积分”菜单中选择“积分”选项,则数据被积分。
如积分结果不理想,则修改相应的积分参数,直到满意为止。
点击左边
图标,将积分参数存入方法,点击
为不保存退出。
点击
进行积分,点击
则由工作站自动查找适合当前谱图的积分参数积分。
最后,选择“方法->保存方法/方法另存为”或者按下
保存数据分析方法
手动积分方法,选择“积分->积分事件”或点击
,选择“手动积分事件”
,如需更改,更改自动积分方法后,按
保存并关闭“积分事件”。
按
删除指定峰,选择
(手动积分:
绘制峰基线并积分;手动积分:
绘制负峰的基线并积分;手动积分:
切线撇去一个峰并积分;手动积分:
手动分裂已积分的峰)对峰进行手动积分。
手动积分完成后可以点击
撤销上一步操作或者点击
撤销所有操作,修改完成后,按
保存(手动积分:
将当前显示的图谱事件保存到相应数据文件中)。
选择“积分->更新方法中的手动积分事件”,保存手动积分方法;选择“积分->应用方法中的手动积分事件”,将手动积分方法应用到当前谱图中;选择“积分->删除方法中的手动积分事件”,将从当前方法中删除手动积分事件。
最后,选择“方法->保存方法/方法另存为”或者按下
保存数据分析方法
为“标准样品”建立校正曲线(工作曲线/标准曲线)
注意:
在色谱图正确积分后才可进行校正
设置校正设置:
从“文件”菜单中选择“调用信号”选项,选中您的标样数据文件名,点击确定,数据被调出。
选择“校正->校正设置”或者点击
->
设置校正参数
参考峰/其他峰---分钟栏留空,修改“%”以改变确认保留时间范围内
的峰都被认为是参考/其他峰
含量单位---填写样品含量单位
选择缺省校正曲线方法,“确定”退出。
建立校正表:
选择“校正->新建校正表”或者点击
。
出现“新建校正表”菜单,“确定”即可。
出现“校正表”表格,在图谱中选择需要校正的色谱峰,后在表格中“化合物”中填写化合物名称,“含量”中填写色谱峰对应物质含量。
右侧“校正曲线”即可实时更新校正曲线图,并标注RSD和相关系数。
“确定”保存退出。
最后,选择“方法->保存方法/方法另存为”或者按下
保存数据分析方法
添加校正级别:
调用新的标样数据文件后,选择“校正->添加级别”或者点击
,如上述方法添加新的校正级别
添加校正峰:
调用新的标样数据文件选择需要添加的峰后,选择“校正->添加峰”或者点击
,在“添加峰”的菜单中填写需要添加到校正表中那个级别,含量即可将峰添加到校正表中,保存方法即可通过“添加峰”可以将不同色谱图中需要校正的峰添加到同一个校正表中,保存在同一个方法文件里
打印带校正表的报告:
选择“报告->设定报告”,在“定量设置”中的计算模式一栏选定“外标法”,“报告设置”为“完整报告”后,打印报告即可在“视图->信号选项”中选择“化合物名称”即可将命名的化合物名称添加到打印的色谱图中
5.5打印报告:
选择“报告->设定报告”选项,进入如下画面。
点击“定量结果”框中“定量”右侧的黑三角,选中“外标法”,其它选项不变。
选择“类型”,点击“确定”
从“报告”菜单中选择“打印”或者点击
,则报告结果将打印到屏幕上。
如想输出到打印机上,则在上图中左下角“目标”处,将打印机选上。
若要生成其他格式的报告,则选定“文件”,然后选择相应的格式即可。
在方法菜单中,选择“运行时选项表”,确认“数据分析选项”也被选中点击“确定”。
点击“保存”按钮,存储修改的方法。
此方法包含校准表,建立完毕
光谱:
G1315C/D;G4212A/B(二极管阵列检测器DAD)、G1321A(荧光检测器FLD)
查看光谱:
从“文件”菜单中选择“调用信号”选项,选中您的数据文件名,点击确定,数据被调出。
选择“光谱->”“选择光谱”:
通过游标定位到信号中的任何位置,显示一个光谱;“选择峰顶点光谱”(
):
选择峰顶点强度最高的光谱;
选择平均光谱”(
):
得到峰中许多光谱的平均光谱;“选择峰光谱”:
选择并显示峰光谱的峰组中所有光谱或者点击
。
选择“光谱->选择参比光谱1/2”或点击
:
可以补偿流动相和基质化合物光谱吸收所带来的影响。
可以选择两个参比光谱,在每个选定光谱的这些时间段内内插参考光谱
查看等吸收图:
选择“光谱->等吸收线图”可以查看当前色谱图的2D吸收等高谱图
查看3D图:
选择“光谱->3D图”可以查看当前色谱图的3D吸收全扫描图
峰纯度检查:
选择“光谱->选择峰纯度”或点击后,在选择待考察峰,显示峰纯度图形报告
如果峰的纯度值大于设定的纯度阈值,则色谱图中会用绿色框标记此峰,否则为红色框
查看峰的峰纯度信息:
在色谱图中选中要查看峰纯度的峰,点击
按钮,弹出峰的峰纯度信息。
在“峰光谱”中可以查看“差异”、“比较”、“参比”等光谱图
查看选定峰的光谱图:
点击
按钮,可以查看选定峰的等吸收线图或者3D图
如何设定“光谱选项”或
,请参考“了解您的工作站”用户手册
如何使用谱库搜索:
建立谱库选择“光谱->谱库->新建谱库”,保存谱库在任意文件夹(默认为:
c:
\chem32\speclibs)。
填写“谱库表头”信息
,后选择“光谱->保存谱库/谱库另存为”或者
添加条目选择需要添加的色谱峰,出现此峰光谱图,
选择“光谱->添加条目”或者
,编辑相应物质名称等信息内容。
选择“编辑波表”,打开“波表编辑器”,选择“自动”。
如需要添加或者替换、删除请选择相应按钮编辑,“确定”保存退出。
点击“添加”将此条目添加到库中,“确定”保存退出
管理条目选择“光谱->谱库->管理条目”或者
。
选择需要编辑的物质信息条目进行编辑
打开谱库选择“光谱->谱库->打开谱库”或者
打开需要的谱库编辑检索模板选择“光谱->谱库->编辑检索模板”或者
。
在“窗口”与“右窗口”设置认定峰保留时间范围,“阈值”设置一下的峰将被忽略,“确定”保存退出
库检索打开需要检索的色谱图数据,打开谱库。
选择色谱图中需要检索的峰,选择“光谱->谱库->检索光谱”或者
,将出现“光谱偏差”图和“谱库检索结果”报告。
匹配度范围从0到1000
5.6建立全新完整方法
新建完整方法:
选择“方法->新建方法”后,点击“方法->编辑完整方法”编辑新方法
选择“方法信息”、“仪器/采集”、“数据分析”,“数据分析”也可以在“数据采集后”后再加入方法中
写入方法注释,而后按照数据采集方法编辑与数据分析方法编辑中所述内容,根据具体的仪器配置完成所有模块参数的设置。
保存方法:
选择“方法->保存方法/方法另存为”
保存即时改变的方法:
通过在线改变数据采集或者在线/离线改变数据分析参数而变更方法,可以通过选择“方法->保存方法/方法另存为”或者
保存新的参数到现在的方法中或者另存为新方法
调用方法:
通过选择“方法->调用方法”或者
调用已有的方法。
方法一经调用便立即生效
5.6.1进样:
单针进样:
选择“运行控制->样品信息”。
查看单针,点击
路径---选择数据文件存储路径
选择手动或者前缀/计数器---命名数据文件名
样品位置---设置样品位置,直接填写数字即可,不需要写“样品瓶”
运行方法---保存样品信息并运行方法
确定---保存样品信息,后“运行控制->运行方法”
选择“序列->序列参数”
如单针进样方法设置数据路径
在调用新方法后等待---序列进样时更改某个样品方法后平衡色谱柱时间
后序列命令/宏---在运行序列后运行命令:
LAMPALLOFF—关闭检测器灯;PUMPALLOFF—关闭泵;STANDBY—系统待机;SHUTDOWN.MAC—关闭系统
选择“序列->序列表”
样品瓶---填写样品瓶位置,G1313A(标准型自动进样器),G1329A/B(自动控温自动进样器),G1367B/C/D(高性能自动进样器)
样品名称---填写样品名称
方法名称---点击,出现下拉框,选择方法
进样次数/瓶---填写每个样品瓶进样次数
样品类型---选择样品类型:
样品,标准样品、控制样品(一般选样品)
校正级别---在选择标准样品后,填写此瓶标准样品的校正级别
进样量---如空缺则为自动进样器设置进样量
确定---保存样品信息,后“运行控制->运行序列”
保存序列模板:
选择“序列->保存序列模板/序列模板另存”或者
调用序列模板:
选择“序列->调用序列模板“或者
5.7关机
冲洗系统:
没有盐缓冲溶液的流动相,(反相系统)用85%~90%有机相+15%~10%水相冲洗系统和反相色谱柱或者适宜的流动相冲洗系统和反相色谱柱
有盐缓冲溶液的流动相,(反相系统)用85%~90%水相水相水相水相+15%~10%有机相冲洗系统和反相色谱柱(反相系统),除去反相色谱柱与系统中的盐溶液。
然后用85%~90%有机相+15%~10%水相水相水相水相冲洗系统和反相色谱柱。
5.7.2封存色谱柱:
(反相系统)用90%~95%有机相+10%~5%水相封存反相色谱柱,两端封死。
(如长时间存放可将柱子完全侵泡有机相内,以防用纯有机相封存反相色谱柱,如果长期保存有机相会挥发)。
“关闭”按钮关闭所有模块,退出化学工作站,关闭电脑
5.7.4关闭模块:
关闭所有模块电源开关
6注意事项
6.1开机时,打开排气阀,100%水相,泵流量5ml/min,若此时显示压力>10bar,表明过滤芯有堵塞,应更换排气阀内过滤白头。
6.2流动相(色谱级)使用前必须过滤,并且必须进行脱气处理,可用超声波振荡10-15min,不要使用多日存放的蒸馏水(易长菌),防止由于污染对分析结果的影响,堵塞色谱柱和仪器管路。
6.3实验过程中,如使用缓冲盐时,要加在线seal-wash选项,应配制90%水+10%异丙醇,以2-3滴/min的速度虹吸排出,且保证溶剂不能干涸,防止泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杆上,随着蓝宝石活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现象。
6.4如仪器长期处在闲
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- 关 键 词:
- Agilent 海尔 色谱仪 VWDDADFLD 检测器 操作 维护 期间 核查 规程
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