医院检验中心DiaMedIDMicroTypingSystem达亚美微量定型系统操作规程.docx
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医院检验中心DiaMedIDMicroTypingSystem达亚美微量定型系统操作规程
医院检验中心DiaMed-IDMicroTypingSystem达亚美微量定型系统操作规程
1、简介:
1)1984年YvesLapierre发明了凝胶测试法。
1988年瑞士达亚美将专利产品推向市场。
2)原理:
基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。
当抗原抗体反应,抗人球试验时,血细胞发生凝聚。
离心时凝聚块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层,呈阳性反应。
未凝聚血细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部,呈阴性反应。
3)达亚美凝胶测试产品用途
i.ABO/D血型反定型交叉配血
ii.抗体筛查Rh分型
iii.抗体鉴定稀有血型
iv.抗体滴定
4)瑞士达亚美公司已获GMP,ISO9001认证。
2、特点:
1)结果清楚明确。
凝聚在上层为阳性,沉积在下层为阴性,血型配血结果清晰明了,结果易判定。
2)结果稳定,可保存,可拍照,可存入计算机。
可复检。
3)操作简明。
凝胶卡中已有抗血清,加入样本细胞即可定型。
a)避免因忘加抗血清引起的错误。
4)一卡六管,减少标记,减少错误发生环节。
利于正定反定对比。
5)简化了操作程序,减少接触玻璃用品,提高了操作安全性。
6)达亚美凝胶测试抗人球配血可检出不完全抗体,避免了ABO以外血型抗体引起的输血溶血。
同时达亚美卡不存在抗人球被中和问题,避免了费时费力的洗涤过程和假阴性。
7)达亚美的抗体筛查可检出临床意义抗体,避免了盲目的配血,提高了安全输血水平。
8)样本用量少。
有利于新生儿及少血液量样本的检测。
9)结果重现性好。
血型配血操作可实现标准化。
10)血型配血可自动化。
11)达亚美产品齐全。
用途广泛。
3、注意事项:
(1)血型鉴定
1)每日实验前,先取出小瓶2号稀释液及标准细胞,放置一段时间至室温,以防冷凝集。
2)必须标记卡。
3)DiaMed卡封口已损坏时,管中干涸,或有气泡时,卡不可使用。
4)用2号稀释液保证反应结果可靠,细胞浓度要在5%左右,不可太浓太稀。
5)纤维蛋白可吸附部分红细胞,呈假阳性。
应将血样离心。
6)反定管先加样,以便标准细胞与血清血浆反应。
7)正反定型对照,确定结果及A亚型。
正定型结果若为弱阳性,应怀疑为ABO亚型,可重做完全测试。
正反结果不符时,请设计实验分析。
8)质控(Ctl)为阳性时,请先用生理盐水洗细胞,再做血型。
9)严格按标准程序操作可检出弱抗原,血型亚型。
10)某些药物、疾病可导致弱阳性及正反定型不符。
11)细菌及异常血清蛋白可影响结果。
(2)注意事项:
(交叉配血)
1)每日实验前,先取出小瓶2号稀释液及标准细胞,放置一段时间至室温,以防冷凝集。
2)必须标记卡。
3)DiaMed卡封口已损坏时,管中干涸,或有气泡时,卡不可使用。
4)必须用2号稀释液保证反应结果可靠,细胞浓度要在0.8%左右,不可太浓太稀。
5)纤维蛋白可吸附部分红细胞,呈假阳性。
应将血样离心。
6)液体应加至卡反应室中。
7)严格按标准程序操作可检出弱抗原抗体反应,弱凝集。
8)某些药物、疾病可导致血液不配合。
9)细菌及异常血清蛋白可影响结果。
4、异常情况分析
1)假阳性发生原因分析:
①干卡;②过期卡;③密封不严;④胶中气泡⑤直接抗球蛋白实验DAT阳性;⑥凝聚性细胞;⑦酶引起自身凝聚⑧抗血清交叉污染,加样器问题⑨细胞悬液不正常;⑩Rouleaux多细胞排列(先细胞重做)Wharton’sJelly
2)疑难结果:
①离心机问题;②凝胶在反应腔内。
3)假阴性:
①没加血浆血清;②量相差太大;③抗体失活,病人抗体极低或无抗体病;④弱/无凝集素;⑤弱/无抗原;⑥细胞污染、失效。
4)双细胞样本:
①输血后样本;②BMT骨髓移植后样本;③大量胎儿母亲出血症;④亚型A3、Am等;⑤Chimerism嵌合体;⑥样本污染;⑦纤维蛋白;⑧弱化抗原(白血病、新生儿、高龄老人)
1:
⑤⑦⑩温生理盐水洗涤后,用卡重做。
2:
①请与销售人员联系,检查离心机。
②离心可使凝胶复位。
卡应正立放置。
3:
③新鲜样本可避免此现象。
④⑤参阅病历分析。
可能因病理、治疗及年龄原因发生无抗体弱抗体,及弱/无抗原,亚型也可引起弱反应结果。
5)多发性骨髓瘤,慢性髓白血病,淋巴瘤可发生正反定型不符,可在5分钟37℃反应后反定型
5、ABO正反定型和抗-D
1)准备样本。
A1,B细胞室温平衡。
标记达亚美DiaMedID卡。
2)50ulA1,B细胞(0.8%)加入A1,B管中。
50ul血清或血浆加入A1,B管中。
3)样本压积红细胞25ul或50ml全血悬浮于0.5ml2号稀释液(Dil2)溶液中,得到5%样本红细胞。
4)10ul5%样本红细胞加入A,B,D,Ctl管中。
5)离心10分钟。
6)读结果。
7)记录。
6、交叉配血
1)准备样本。
标记达亚美DiaMedID卡。
2)10ul样本压积红细胞悬浮于1ml2号稀释液(Dil2)溶液中,得到0.8%样本红细胞。
3)1号管中(主侧)加入50ul0.8%献血者细胞。
25ul受血者血浆、血清。
4)2号管中(次侧)加入50ul0.8%受血者细胞。
25ul献血者血浆、血清。
5)37℃15分钟。
6)离心10分钟。
7)读结果。
8)记录。
7、抗体筛查
1)准备样本。
抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞室温平衡。
2)标记达亚美DiaMedID卡。
姓名,病历号。
Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。
3)抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞各50ul(0.8%)
4)25ul待检样本血浆或血清。
5)37℃15分钟。
6)离心10分钟。
7)读结果。
8)记录。
8、BO血型基础
血型
抗原
与抗血清反应
与A1,B细胞反应
抗-A
抗-B
抗-A,抗-B
A1
B
A
A
反应
--
反应
--
反应
B
B
--
反应
反应
反应
--
AB
AB
反应
反应
反应
--
--
O
H
--
--
--
反应
反应
抗-A
抗-A1
抗-H
A
++++
++++
-
A2
+++
--
++/+++
O
--
--
++++
1)Rh血型
2)主要抗原:
C,c,E,e,D。
Cde=R1cde=rCDE=R2CcDdee=R1r与抗-D阳性反应的红细胞为Rh+
3)不完全抗体筛查
4)ABO系统抗体以外其他血型抗体可通过抗体筛查来检查。
用O型细胞可检查血浆、血清样本有无其他血型抗体。
5)交叉配血
6)用交叉配血方法可考察细胞与血清血浆的相容性。
不完全抗体可引起输血反应,而传统配血方法不能检出不完全抗体.传统抗人球配血可检出不完全抗体,但操作复杂.
下列情况建议做抗体筛查
1)需大量输血病人
2)反复输血病人
3)血色素很低,红细胞压积比例低,严重贫血病人。
4)有溶血症状病人。
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