简化版基因工程.docx
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简化版基因工程
一名词解释(2分/题)
1基因敲入:
使利用同源重组原理将外源基因插入到染色体的特定位点上。
P258
2分子杂交:
是指在分子克隆中的一类核酸和蛋白质分析方法,用于检测混合样品中特定核酸分子或蛋白质分子是否存在,以及其相对分子质量的大小。
P107
3DNA体外重组:
是指依赖序列同源性的DNA体外重组,包括经典的DNA洗牌、交错延伸、随机引发重组等技术。
P173
4RNA干扰:
是指对应于某种mRNA的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA分子使mRNA发生特异性降解,导致其不能表达的转录后基因沉默现象。
P350
5.核酶:
是一类具有催化活性的RNA分子,具有核苷酸水解活性,可特异性剪切RNA分子,相当于RNA酶。
P348
6黏性末端:
识别位点为回文对称结构的序列经限制酶切割后,产生的末端。
P19
7平末端:
在回文对称轴上同时切割DNA的两条链所产生的末端。
P19
8同尾酶:
许多不同的限制酶切割DNA产生的末端是相同的,且是对称的,即它们可产生相同的黏性末端。
P22
9偏爱位点:
某些限制酶对同一底物中的有些位点表现出偏爱性切割,即对不同位置的同一个识别序列表现出不同的切割效率的现象。
P24
10星星活性:
在极端非标准条件下,限制酶能切割与识别序列相似的序列,这个改变的特殊性陈星星活性。
11DNA聚合酶:
在加有模板、底物和引物时,可催化新链DNA的生成的酶。
P29
12PCR技术:
是通过模拟体内DNA复制的方式,在体外选择性地将DNA某个特殊区域扩增出来的技术。
P134
13基因治疗:
是将目的基因放进特定载体中导入靶细胞或组织,通过替换或补偿引起疾病的基因,或者关闭或抑制异常表达的基因来克服疾病的治疗方法。
P351
14嵌套缺失:
从DNA的一端或两端删除多个寡核苷酸,得到一套终末端长短不同的嵌套缺失突变体。
P183
15原生质体介导法:
是以原生质体为受体,借助于特定的化学或物理手段将外源DNA直接导入植物细胞的方法。
P231
16基因定向打靶:
是通过外源基因与靶细胞染色体上的同源序列间的同源重组,将外源基因定点整合到靶细胞特定位置上,而使某一个特定位点上的基因发生定点突变的技术。
P256
17反向PCR:
是一种简单的扩增已知序列周边未知序列的方法。
P143
18热不对称交错PCR:
即TAIL-PCR,是一种利用随机引物进行染色体步查的技术。
P144
19多重PCR:
在一个反应体系中使用一对以上引物的PCR。
P149
20基因芯片:
是生物芯片的一种类型,它是将DNA分子固定于支持物上,并与标记的样品杂交,通过自动化仪器检测杂交信号的强度来判断样品中靶分子的数量,进而得知样品中mRNA的表达量,也可进行基因突变体的检测和基因序列的测定。
P119
21反转录酶:
依赖于RNA德DNA聚合酶,有5′→3′合成DNA活性,但是无3′→5′外切核酸酶活性。
P32
22连接酶:
就是能将两段核酸连接起来的酶。
P34
23黏粒:
是质粒的衍生物,是带有COS序列的质粒。
P71
24穿梭载体:
是指能够在两类不同宿主中复制、增殖和选择的载体。
P94
25错误掺入诱变:
指在体外DNA扩增过程中,使用具有错配倾向的DNA聚合酶以及反应条件,使碱基错误掺入到新合成的基因中。
P169
26cDNA文库:
DNA是指以mRNA为模板,由逆转录酶催化形成的互补DNA(cDNA),其核苷酸序列完全互补于模板mRNA链;再以cDNA为模板,由DNA聚合酶合成第二链,得到互补双链DNA.由于模板mRNA含有该种细胞的各种mRNA分子,因而合成的cDNA产物是各种mRNA拷贝的混合物,然后将双链产物与载体(质粒或噬菌体)DNA重组,并转化到宿主细菌或包装成噬菌体颗粒,得到一系列重组的克隆混合体.每个克隆含单独一种mRNA分子,克隆总和则包含细胞的全部mRNA信息,即cDNA文库.P187
27体外诱变:
对克隆化的DNA进行诱变处理,改变其核苷酸序列,从而获得突变基因,用于基因工程等研究.P168
28基因下调:
有称RNA干扰,通过干扰RNA分子的作用达到转录后基因沉默的效应。
P258
29、动物基因工程:
是指利用DNA重组技术对动物所进行的工程操作。
P250
30、报告基因:
是指其编码产物能够被快速测定、常用于判断外源基因是否成功地导入受体细胞,是否启动表达的一类特殊用途的基因。
P240
31载体:
将外源DNA或基因携带入宿主细胞的工具。
P40
32.病毒感染法:
是一种将外源基因引入细胞内的高效基因转移法。
P254
33.间隔区:
位于基因Ⅱ和基因Ⅳ之间的最大的非编码区,简称IR区。
P60
34.复制型DNA:
在宿主细胞内,感染性的单链噬菌体DNA在宿主酶的作用下转变成环状双链DNA,用于DNA的复制,因此这种双链DNA称为复制型DNA。
P61
35.噬菌粒:
是带有丝状噬菌体大间隔区的质粒载体,是集质粒和丝状噬菌体的有利特征与一身的载体,具有ColEl复制起点及抗生素抗性选择标记,以及丝状体噬菌体的间隔区。
P67
36.反转录PCR:
是以反转录的cDNA作模版所进行的PCR反应,可用于测定基因表达的强度,还可用于鉴定已转录序列是否发生突变,呈现mRNA多态性,克隆mRNA的5’和3’末端序列,以及从非常少量的mRNA样品构建大容量的cDNA文库。
P146
37、质粒:
质粒是染色体外的遗传因子,能进行自我复制。
P39
38、整合载体:
将某个基因插入到染色体中去的工作,承担这部分工作的载体可称为整合载体。
P95
39、杂交:
在一定的条件下,分子间氢键的断裂与恢复是DNA/DNA、DNA/RNA分子间选择性结合的根本动力,这一过程称之为杂交。
P127
40调节子:
是指被一个调控因子控制的一组基因的总和。
P130
41、cDNA文库的构建:
将来自真核生物的mRNA体外反转录成cDNA,与载体连接并转化大肠杆菌的过程,称为cDNA文库的构建。
P192
42、基因工程:
即重组DNA技术,是根据人们的意愿对不同生物的遗传基因进行切割,拼接和重新组合,在转入生物体内产生出人们所期望的产物,或创造出具有新的遗传特征的生物类实践。
P223
43、微生物肥料:
利用微生物的生命活动及代谢产物的作用,改善作物养分供应,为农作物提供营养元素,生长物质,调控生长增强抗逆性,达到提高产量,改善品质,减少化肥使用,提高土壤肥力的一类生物制品就是生物肥料。
P301
44酵母人工染色体(YAC):
是模拟酵母菌染色体的复制而构建的载体,当装载外源DNA片段后在酵母中可以像酵母菌的染色体一样复制,从而达到克隆大片段DNA的目的。
(P70)
45穿梭质粒载体:
指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记,因而可在两种不同宿主细胞中存活和复制的质粒载体。
P94
46单核苷酸多态性(SNP):
在不同物种、不同等位基因之间,在基因组水平上单个或少数几个核苷酸的差异(如发生转换、颠倒、插入、缺失等变异)就形成了单核苷酸多态性。
P212
47基因定点诱变:
使已克隆基因或DNA片段中的任何一个特定碱基发生取代、插入或缺失突变的过程。
(P176)
48、克隆载体(cloningvector):
用于在受体细胞中进行目的基因扩增的载体。
一般具有较低的分子量、较高的拷贝数和松弛型复制子。
主要由细菌质粒或与其它质粒、噬菌体及真核生物病毒的DNA重组构建。
常用载体pUC18pUC19.
。
49、重组率:
重组率=含有外源DNA的重组分子数/载体分子总数在常规实验条件下,重组率一般为25-75%,重组率是衡量连接反应效率的重要指标,较高的重组率可以大大简化DNA重组的后续操作。
50、基因文库(genelibraryorgenebank):
从特定生物个体中分离的全部基因,这些基因以克隆的形式存在(人工构建)。
根据构建方法的不同,基因文库分为:
基因组文库(含有全部基因)和cDNA文库(含有全部蛋白质编码的结构基因)
51、原位合成:
是指利用光导合成的方法在载体表面上逐个合成寡核苷酸,合成后点样可能将十几至几十个碱基的寡核苷酸或几百个碱基的cDNA片段固定到载体上制成寡核苷酸芯片或cDNA微阵列。
52、交错延伸(staggerextensionprocess,StEP):
在PCR反应中把常规的退火和延伸合并为一步,缩短其反应时间,从而只能合成出非常短的新生链,经变性的新生链再作为引物与体系内同时存在的不同模板退火而继续延伸。
此过程反复进行,直到产生完整的基因长度。
53、离子交换层析:
以离子交换剂为固定相,以特定的含离子溶液为流动相,利用离子交换剂对待分离的各种离子结合力的差异,而将混合物中不同离子进行分离的层析技术。
54、反义核酸药物:
反义核酸是一些人工合成的单链反义分子,可以通过碱基互补原则与被感染细胞内部的某个靶标mRNA或DNA结合,抑制或封闭该基因的转录和表达,或切割mRNA使其丧失功能。
受体细胞,是否启动表达的一类特殊用途的基因。
P240
二选择题(1分/题)
1、下列设计的探针中,最佳的是(D)
AACATTAAATTATTBGGGCA
CACCTTGATAAGGTDCGGACTTGACCATC
2、第一个作为重组DNA载体的质粒是(C )
A、pBR322B、C01E1C、pSClOlD、pUCl8
3.基因工程的单元操作顺序是(B)
A增,转,检,切,接B切,接,转,增,检
C接,转,增,检,切D切,接,增,转,检
4分子杂交的化学原理是形成(D)
A共价键B离子键C疏水键D氢键
5下列对限制性内切酶描述正确的是(B)
A限制性内切酶可识别任一的DNA序列
B使用限制性内切酶时,有时可出现星活性
C限制性内切酶可识别碱基数不超过5个
D限制性内切酶切割碱基序列产生都是黏性末端
6根据酶切活性对盐浓度的要求,限制性核酸内切酶可分成(B)
A2大类B3大类C4大类D5大类
7T4-DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起,其底物的关键基团是(D)
A2'-OH和5'–PB2'-OH和3'-P
C3'-OH和2'–PD5'-OH和3'-P
8下列有关连接反应的叙述,错误的是(A)
A连接反应的最佳温度为37℃
B连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10%
C连接反应缓冲体系的ATP浓度不能高于1mM
D连接酶通常应过量2-5倍
9原生质体转化方法不大适用于(A)
A大肠杆菌B枯草杆菌C酵母菌D链霉菌
10研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是(C )
A、A.Kornberg
B、W.Gilert
C、P.Berg
D、B.McClintock
11一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是(A )
A、EcoR I
B、Eco B
C、Eco C
D、EcoR II
12基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指(B)
A.I类限制酶B.II类限制酶C.III类限制酶D.核酸内切酶
E.RNAase
13下列关于同裂酶的叙述错误的是(B)
A.是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。
B.它们的识别序列完全相同。
C.它们的切割方式可以相同,也可以不同。
14下列关于限制酶的叙述错误的是(B)
A.I类限制酶反应需要Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸。
B.II类限制酶反应需要Mg2+、ATP。
C.III类限制酶反应需要Mg2+、ATP,S-腺苷蛋氨酸能促进反应,但不是绝对需要。
15lacZ标记基因,那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中加入(D)
A半乳糖B异丙基巯基-β-半乳糖苷(IPTG)
C蔗糖D5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-半乳糖苷(X-gal)
16列与RFLP相关的一条是(D)
A.不同限制酶在单个染色体DNA上的限制性图谱。
B.两种物种个体间的限制性图谱。
C.同一个体等位基因的限制性图谱。
D.同一物种不同个体的限制性图谱
17多数限制酶消化DNA的最佳温度是(A)
A.37℃B.30℃C.25℃D.16℃E.33℃
18各组专业术语中,含义最为接近的是(C)
A终止子与终止密码子B基因表达与基因转译
CDNA退火与DNA复性D重组子与转化子
19下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中,错误的是(C)
A大肠杆菌-繁殖迅速B枯草杆菌-分泌机制健全
C链霉菌-遗传稳定D酵母菌-表达产物具有真核性
20下列常用载体的装载量排列顺序,正确的是(A)
ACosmid>λ-DNA>PlasmidBλ-DNA>Cosmid>Plasmid
CPlasmid>λ-DNA>CosmidDCosmid>Plasmid>λ-DNA
21FLP形成的原因是(A)
A.由于遗传变异造成同源染色体中碱基的随机变化。
B.使用不同的限制性内切酶进行切割。
C.杂交时使用不同的探针。
D.每种染色体存在两条。
22生质体转化方法不适用于(A)
A大肠杆菌B枯草杆菌C酵母菌D链霉菌
23II类限制酶反应中必须的阳离子是(C)
A.Na+B.Ca2+C.Mg2+D.Zn2+
23列有关回文序列的一般特征不正确的是(A)
A.可增强基因表达B有对称轴
C是自我互补的序列D是II类限制酶的识别序列
24制酶的星星活性是指在非正常条件下,限制酶(A)
A.识别和切割序列发生变化。
B.切割活性大大提高。
C.识别和切割序列与原来完全不同。
D.可以任意切割DNA。
E.只能部分切割DNA。
25下列关于限制酶反应的说法错误的是(D)
A.限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后,可能会阻碍限制酶的酶解活性。
B.许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。
C.有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。
D.限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液,是由于磷酸根会抑制限制酶反应。
26限制性内切酶可特异性识别(B)
A.双链DNA的特定碱基对B.双链DNA的特定碱基序列
C.单链RNA的特定碱基序列D.单链DNA的特定碱基序列
27某一重组DNA(6.2kb)的载体部分有两个SmaI酶切位点。
用SmaI酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子,其长度总和与已知数据吻合,该重组分子插入片段上的SmaI酶切位点共有(D)
A4个B3个C2个D至少2个
28DNA法获得目的基因的优点是(A)
A成功率高B不含内含子C操作简便D表达产物可以分泌
29下列有关基因的叙述,错误的是(A)
A蛋白质是基因表达的唯一产物
B基因是DNA链上具有编码功能的片段
C基因也可以是RNA
D基因突变不一定导致其表达产物改变结构
30物工程的上游技术是(A)
A基因工程及分离工程B基因工程及发酵工程
C基因工程及酶工程D基因工程及细胞工程
31下列关于限制酶命名的表示方法,正确的是(B)
A.Sau.3AIB.HindIIIC.pstID.EcorI
32进行DNA部分酶切时,控制下列哪种条件最合适(D)
A.反应时间B.反应体积C.PHD.限制酶量
33下列酶在反应中不需要ATP的是(D)
A.EcoKB.T4DNA连接酶C.BamHID.EcoB
34下列哪种方法可用于mRNA的纯化(C)
A透析袋电洗脱法BGlassMilk结合法
C酚—异硫氰酸胍抽提法DQiagen纯化法
35如果一个限制酶识别长度为6bp,则其在DNA上识别6bp的切割概率为(D)
A.1/44B.1/66C.1/64D.1/46
36关于II类限制酶说法正确的是(B)
A.具内切核酸酶和甲基化酶活性
B.仅有内切核酸酶活性
C.只识别非甲基化的DNA序列
D.II类限制酶反应需要Mg2+,ATP
37以下哪个不是生物芯片按载体分类的情况(C)P120
A玻璃芯片B硅芯片C蛋白质芯片D陶瓷芯片
38按芯片使用功能和用途来分,不包括以下哪项(D)P121
A测序芯片B表达芯片C基因差异表达芯片D玻璃芯片
39以下哪一项不属于常用的基因芯片制作法(D)P123
A接触点样法B喷墨法C光刻DNA合成法D直接合成法
40关于制作生物芯片的载体材料要求说法正确的是(D)P125
A载体表明必须具有可以进行化学反应的活性机团;
B载体应当是惰性的和有足够的稳定性;
C应使单位载体上结合的生物分子达到最佳容量;
D以上说法都正确
41在设计克隆方法的时候,主要考虑产物如何能与克隆载体高效连接,以下那种方法是考虑这一因素的体现(D)P138
A在PCR产物两端添加限制性内切酶位点
BA/T克隆法
C平末端DNA片段的克隆
D以上都是
42(A)基因工程操作的三大基本元件是:
(I供体II受体III载体IV抗体V配体)
AI+II+III
BI+III+IV
CII+III+IV
DII+IV+V
EIII+IV+V
43(A)下列对逆转录酶描述正确的是:
A依赖于RNA的DNA聚合酶或称为RNA指导的DNA聚合酶
B依赖于cDNA的DNA聚合酶或称为cDNA指导的DNA聚合酶
C依赖于DNA的DNA聚合酶或称为DNA指导的DNA聚合酶
D依赖于RNA的RNA聚合酶或称为rNA指导的RNA聚合酶
44(C)下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?
A质粒B黏粒C酵母人工染色体(YAC)Dλ噬菌体
45(C)关于cDNA的最正确的提法是:
A同mRNA互补的单链DNAB同mRNA互补的双链DNA
C以mRNA为模板合成的双链DNAD以上都正确
46(B)同一种质粒DNA,以三种不同的形式存在,电泳时,它们的迁移速率是:
AOCDNA>SCDNP>LDNABSCDNA>LDNA>OCDNA
CLDNA>OCDNA>SCDNADSCDNA>OCDNA>LDNA
47.下列哪项不属于酶切反应的条件(P24)(C)\
A缓冲液B温度C引物D时间
48关于S1核酸酶下列说法错误的是(P35)(C)
A可降解单链DNA
B可降解单链RNA
C可降解双链DNA
D可用于分析DNA:
RNA杂交体的结构
49.下列不属于M13噬菌体生物学特征的是(P60)(A)
AM13噬菌体基因组可编码复制蛋白、形态蛋白和功能蛋白
BM13噬菌体的基因组为单链DNA
CM13噬菌体颗粒是丝状的
D基因组DNA为正链
50一段DNA序列大小约为40kb,可用下列哪种载体装载(P70)(D)
APAC
BBAC
CYAC
D黏粒
51下列哪项不是目前已知的基因芯片的制作方法(P123)(B)
A接触点样法
B物理合成法
C喷墨法
D原位合成法
52多数II类限制酶反应最适PH是(C)
A.PH:
2-4B.PH:
4-6C.PH:
6-8D.PH:
8-10
53以下关于扩增操作目的不正确的是(D)
A)增殖转化细胞,使得有足够数量的转化细胞用于筛选程序
B)扩增和表达载体分子上的标记基因,便于筛选
C)表达外源基因,便于筛选和鉴定
D)区分转化子与非转化子
54双链平头的cDNA通常不使用下列那种方法克隆入载体中(C)
A)平头末端直接与载体连接
B)平头两端分别接同聚物尾
C)平头一端接同聚物尾
D)人工接头引入酶切口
54下列关于加装基因文库的质量标准叙述正确的是(B)
A)重组克隆的总数越大越好(不宜过大,以减轻筛选工作的压力)
B)载体的装载量最好大于基因的长度(避免基因被分隔克隆)
C)克隆与克隆之间没必要存在足够长度的重叠区域(必须存在足够长度的重叠区域,以利克隆排序)
D)克隆片段易于从载体分子上部分卸下(完整卸下)
55YAC载体的最大装载量是(A)
A)400kbB)300kbC)25kbD)45kb
56下列那种生物芯片是按点样方式分类的(C)
A)硅芯片B)基因芯片C)微矩阵芯片D)表达谱芯片
57以下不属于PCR反应体系循环参数的是(A)
A)模板B)变性C)退火D)循环次数
三是非判断题(1分/题,共5分)
1.质粒提取后,在琼脂糖电泳出现一条带时说明质粒提取纯度高,当为三条带时为纯度不高.(×)
2基因是指携带从一代到下一代信息的遗传的物质单位和功能单位。
(√)
3PCR技术是通过酶促反应体外大量扩增一段目的基因的技术。
它需要加模板、TaqDNA聚合酶、单核苷酸三种类型的物质。
(X)
4.DNA连接酶是一种能催化二条DNA链之间形成磷酸二酯键的酶,因此该酶既可修复基因序列中的缺口,也可修复裂口.(×)
5.入噬菌体的插入型载体只有一个单一限制酶切点,替换型载体有2个成对的限制性酶切点.(√)
6.原核细胞和真核细胞转录的mRNA均具有与rRNA结合的SD序列,以利于进行有效的转录.(×)
7.cDNA文库是包含有细胞中所有mRNA,因此该文库能包含细胞所有的遗传信息。
(X)
8、S1酶具有补平DNA链粘性末端的特性。
(X)
9、细胞分化的实质是组织特异性基因在时间上与空间上的差异表达。
(√)
10碱性磷酸酶是用于脱去DNA(RNA)5’末端的磷酸根,使5’-P成为5’-OH,该过程称核酸分子的脱磷酸作用。
(√)
11连接反应的最佳温度为37℃ ( X )
12分子诊断是指利用PCR技术与分子杂交标记相结合的技术,它能快速准确地检测出病原性物质。
(√)
13甲基化酶能使DNA序列发生甲基化,早基化DNA的更为稳定,被甲基化的酶切点,不易被酶切割。
(√)
14DNA复制总是从3′→5′方向进行的。
(X)
15.COS位点,COS质粒都含有用于载
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