常用pGEX载体图谱.docx
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常用pGEX载体图谱.docx
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常用pGEX载体图谱
Rosetta系列的表达菌株可以提供T7RNA聚合酶,它能表达PET系列载体上的外源基因。
。
。
pGEX系列载体上的外源基因不需要T7RNA聚合酶,普通的大肠杆菌经IPTG诱导即可表达
Tac启动子是一组由Lac和trp启动子人工构建的杂合启动子,受Lac阻遏蛋白的负调节,它的启动能力比Lac和trp都强。
其中Tac1是由Trp启动子的-35区加上一个合成的46bpDNA片段(包括Pribnow盒)和Lac操纵基因构成,Tac12是由Trp的启动子-35区和Lac启动子的-10区,加上Lac操纵子中的操纵基因部分和SD序列融合而成
蛋白标签:
Amyctagisapolypeptide proteintag derivedfromthe c-myc geneproductthatcanbeaddedtoaproteinusing recombinantDNA technology.Itcanbeusedfor affinitychromatography,thenusedtoseparaterecombinant,overexpressedproteinfromwildtypeproteinexpressedbythehostorganism.Itcanalsobeusedintheisolationofproteincomplexeswithmultiplesubunits.
Amyctagcanbeusedinmanydifferentassaysthatrequirerecognitionbyan antibody.Ifthereisnoantibodyagainstthestudiedprotein,addingamyc-tagallowsonetofollowtheproteinwithanantibodyagainsttheMycepitope.Examplesarecellularlocalizationstudiesbyimmunofluorescenceordetectionby Westernblotting.
Thepeptidesequenceofthemyc-tagis(in1-and3-lettercodes,respectively):
N-EQKLISEEDL-C,N-Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu-C,whereNstandsfor Amino-terminus andCstandsfor Carboxyterminus.Thetagisapproximately1202 Daltons inatomicmassandhas10aminoacids.
Itcanbefusedtothe C-terminus andthe N-terminus ofaprotein.Itisadvisablenottofusethetagdirectlybehindthesignalpeptideofasecretoryprotein,sinceitcaninterferewithtranslocationintothe secretorypathway.
Amonoclonalantibodyagainstthemyc epitope,named9E10,isavailablefromthenon-commercial DevelopmentalStudiesHybridomaBank
pGEX4T1载体基本信息
出品公司:
GE
别名:
pGEX-4T-1,pGEX4T1,pGEX4T1
质粒类型:
大肠杆菌蛋白表达载体
表达水平:
高拷贝
启动子:
Tac
克隆方法:
多克隆位点,限制性切酶
载体大小:
4969bp
5'测序引物及序列:
pGEX5':
GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG
3'测序引物及序列:
pGEX3':
CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG
载体标签:
N-GST
载体抗性:
Ampicillin氨苄
备注:
复制子是pMB1
产品目录号:
27-4580-01
稳定性:
瞬时表达Transient
组成型:
诱导表达
病毒/非病毒:
非病毒
pGEX4T1载体质粒图谱和多克隆位点信息
原核生物DNA复制起始点,是DNA链上独特的具有起始DNA复制功能的碱基序列。
大肠杆菌的复制起点包括OriC和OriH
Thrombin凝血酶
pGEX4T1载体简介
pGEX4T1载体序列
LOCUSpGEX-4T-14969bpDNAcircularSYN
DEFINITIONpGEX-4T-1
ACCESSION
KEYWORDS
SOURCE
ORGANISMothersequences;artificialsequences;vectors.
COMMENT ThisfileiscreatedbyVectorNTI
.biofeng./
COMMENT VNTAUTHORNAME|biofeng.|
FEATURESLocation/Qualifiers
source1..4969
/organism="pGEX-4T-1"
/mol_type="otherDNA"
promoter184..212
/label="tac_promoter"
misc_feature224..246
/label="M13_pUC_rev_primer"
gene258..977
/label="GST(variant)"
/gene="GST(variant)"
CDS258..977
/label="ORFframe3"
misc_featurecomplement(1019..1041)
/label="pGEX_3_primer"
promoter1307..1335
/label="AmpR_promoter"
gene1377..2237
/label="Ampicillin"
/gene="Ampicillin"
CDS1377..2237
/label="ORFframe3"
rep_origin2392..3011
/label="pBR322_origin"
misc_feature3309..4400
/label="lacI"
CDS3441..4400
/label="ORFframe3"
promoter4449..4478
/label="lac_promoter"
misc_feature4492..4514
/label="M13_pUC_rev_primer"
promoter4513..4531
/label="M13_reverse_primer"
CDS4523..81
/label="ORFframe2"
misc_feature4540..4695
/label="lacZ_a"
promotercomplement(4543..4559)
/label="M13_forward20_primer"
misc_featurecomplement(4552..4574)
/label="M13_pUC_fwd_primer"
pGEX4T2载体基本信息
出品公司:
GE
别名:
pGEX-4T-2,pGEX4T2,pGEX4T2
质粒类型:
大肠杆菌蛋白表达载体
表达水平:
高拷贝
启动子:
Tac
克隆方法:
多克隆位点,限制性切酶
载体大小:
4970bp
5'测序引物及序列:
pGEX5':
GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG
3'测序引物及序列:
pGEX3':
CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG
载体标签:
N-GST
载体抗性:
Ampicillin氨苄
备注:
复制子是pMB1
产品目录号:
27-4581-01
稳定性:
瞬时表达Transient
组成型:
诱导表达
病毒/非病毒:
非病毒
pGEX4T2载体质粒图谱和多克隆位点信息
pGEX4T2载体简介
pGEX4T2载体序列
LOCUSpGEX-4T-24970bpDNAcircularSYN
DEFINITIONpGEX-4T-2
ACCESSION
KEYWORDS
SOURCE
ORGANISMothersequences;artificialsequences;vectors.
COMMENT ThisfileiscreatedbyVectorNTI
.biofeng./
COMMENT VNTAUTHORNAME|biofeng.|
FEATURESLocation/Qualifiers
source1..4970
/organism="pGEX-4T-2"
/mol_type="otherDNA"
promoter184..212
/label="tac_promoter"
misc_feature224..246
/label="M13_pUC_rev_primer"
gene258..978
/label="GST(variant)"
/gene="GST(variant)"
CDS258..974
/label="ORFframe3"
misc_featurecomplement(1020..1042)
/label="pGEX_3_primer"
promoter1308..1336
/label="AmpR_promoter"
gene1378..2238
/label="Ampicillin"
/gene="Ampicillin"
CDS1378..2238
/label="ORFframe1"
rep_origin2393..3012
/label="pBR322_origin"
misc_feature3310..4401
/label="lacI"
CDS3442..4401
/label="ORFframe1"
promoter4450..4479
/label="lac_promoter"
misc_feature4493..4515
/label="M13_pUC_rev_primer"
promoter4514..4532
/label="M13_reverse_primer"
CDS4524..81
/label="ORFframe3"
misc_feature4541..4696
/label="lacZ_a"
promotercomplement(4544..4560
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