流式细胞仪分析技术及应用word资料12页.docx

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流式细胞仪分析技术及应用

单靠“死”记还不行,还得“活”用,姑且称之为“先死后活”吧。

让学生把一周看到或听到的新鲜事记下来,摒弃那些假话套话空话,写出自己的真情实感,篇幅可长可短,并要求运用积累的成语、名言警句等,定期检查点评,选择优秀篇目在班里朗读或展出。

这样,即巩固了所学的材料,又锻炼了学生的写作能力,同时还培养了学生的观察能力、思维能力等等,达到“一石多鸟”的效果。

一、选择题

（一）A1型题（标准型）

1．流式细胞仪是由下述哪项基本结构组成

A．流体系统

B．光学系统

C．计算机系统

D．流体系统、光学系统和信号

处理系统

E．流体系统、光学与信号转换测试系统和信号处理与放大的计算机系统

2．流式细胞仪流动池鞘液孔径通常为

A．50μm

B．50～100μm

C．50～200μm

D．50～300μm

E．300μm

3．关于液流系统的鞘液，下述哪项是正确的

A．鞘液是辅助样本作正常检测的基质液

B．鞘液是用来与样本作对比的

C．鞘液是包裹在样本流周围

D．使样本保持处于喷嘴中心位

置，保证检测精确性

E．防止样本流细胞靠近喷孔而形成堵塞

4．流式细胞仪光学系统的组成为

A．激光系统

B．激光光源与分光镜

C．激光光源、分光镜与光束成形器

D．激光光源、分光镜、光束成形器和透镜组

E．激光光源、分光镜、光束成形器、透镜组和光电倍增管

5．下述哪项关于激光光源的叙述是正确的

A．采用气冷式氩离子激光器

B．激光波长488nm，15mW

C．激光束波长466nm，10mW

D．不散焦

E．容易聚焦成有高斯能量分布

的光斑

6．光束成形器的作用是将激光器发射的激光束聚焦成

A．高15μm、宽57μm的椭圆形光斑

B．高10μm、宽57μm的椭圆形光斑

C．高15μm、宽50μm的椭圆形光斑

D．高10μm、宽50μm的椭圆形光斑

E．高20μm、宽60μm的椭圆形光斑

7．反射较长波长的光而通过较短波长的光的是

A．气冷氩离子激光器

B．分色反光镜

C．光束成形器

D．透镜组

E．光电信增管

8．检测荧光和反射光，并将光学信号转换成电脉冲信号的是

A．气冷氩离子激光器

B．分色反光镜

C．光束成形器

D．光电倍增管

E．透镜组

9．流式细胞仪组成部件中对实验分析数据存储、显示与分析的是

A．液流系统

B．光学系统

C．光电倍增管

D．软件

E．数据处理系统

10．一台好的流式细胞仪每秒钟可测量

A．25000个细胞

B．20000个细胞

C．15000个细胞

D．10000个细胞

E．5000个细胞

11．一台好的流式细胞仪每秒钟可测定荧光染料粒子

A．5000个

B．4000个

C．3000个

D．2000个

E．1000个

12．前向散射光（ＦＳ）信号的强弱与下述哪项成正比

A．体积大小

B．细胞性状

C．颗粒多少

D．位移速度

E．荧光强弱

13．前向散射光是用于检测细胞或其他粒子的

A．内部属性

B．表面属性

C．着染属性

D．粒子属性

E．以上都不是　

14．侧向检测器与发射激光束的方向

A．平行

B．在激光前方

C．在激光上方

D．垂直

E．在激光下方

15．侧向散射光（ＳＳ）用于检测细胞的

A．表面属性

B．内部结构属性

C．着染属性

D．物理属性

E．化学属性

16．荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受

A．荧光激发后产生

B．紫外光激发产生

C．红外光激发产生

D．发光物质激发产生

E．激光激发产生

17．流式细胞仪检测原理中最重要的一点是

A．检测荧光的特定发射波长

B．检测激发光的波长

C．检测荧光的颜色

D．检测前向散射光

E．检测侧向散射光

18．对数放大器中输入信号放大10倍，输出信号放大

A．1倍

B．2倍

C．3倍

D．10倍

E．100倍

19．对数放大器中输入信号放大10倍，输出信号由

A．1转变为2

B．2转变为3

C．3转变为4

D．1转变为3

E．1转变为4

20．线性放大器用于测量的信号

A．强度变化范围较广

B．放大倍数较大

C．放大倍数较小

D．强度变化范围较少

E．以上都不是

21．对数放大器用于测量信号是

A．强度变化大但信号简单

B．强度变化小但信号复杂

C．强度变化大且信号复杂

D．强度变化小且信号简单

E．以上都不是

22．流式细胞仪中最常用于单抗标记的荧光染料是

A．FITC、RB200、TRITC

B．FITC、PE、PC

C．FITC、RB200、PE

D．FITC、TRITC、PE

E．FITC、PE、ECD或PECY5

23．消除重叠信号通常采用

A．荧光补偿

B．滤光片

C．调整荧光染料

D．线性转换

E．对数转换

24．分选细胞时液流柱形成液流的速率约每秒钟

A．50000个

B．40000个

C．30000个

D．20000个

E．10000个

25．均匀连串的液滴中大量液滴是

A．含有细胞

B．含有淋巴细胞

C．含被荧光染色的淋巴细胞

D．不含细胞的空白液滴

E．以上都不是

26．待分选细胞形成液滴时会被

A．染色

B．充电

C．酶标记

D．抗体捕捉

E．以上都不是

27．带电荷的液滴在落入电极偏转板的高压静电场后会

A．聚集

B．散开

C．继续下落

D．停止下落

E．向左或右偏转

28．一般要求分选速度至少达到

A．20000个/秒

B．10000个/秒

C．7000个/秒

D．5000个/秒

E．3000个/秒

29．分选速度与细胞悬液中分选细胞的下述哪项直接相关

A．细胞含量

B．细胞性质

C．细胞大小

D．有否胞膜

E．单核或多核

30．骨髓来源细胞的分选宜选择高速是因为

A．细胞太多

B．细胞太大

C．细胞膜坚固

D．细胞核坚固

E．在总细胞群体中所占比例不高

31．分选纯度除与仪器的精密度相关外，还与

A．被分选细胞的性质相关

B．其他细胞的性质相关

C．被分选细胞的数量相关

D．其他细胞的数量相关

E．分选细胞与其他细胞有无相互重叠相关

32．要想取得分选高收获率，就应

A．提高被分选细胞的纯度

B．降低被分选细胞的纯度

C．提高被分选细胞的浓度

D．降低被分选细胞的浓度

E．降低其他细胞的浓度

33．现在设置收获率均在

A．100%

B．99%以上

C．98%以上

D．95%以上

E．90%以上

34．分选得率是指

A．分选收获率

B．通过测量点的分选细胞的比率

C．从悬液中分辨出的目的细胞的总量

D．通过测量点的细胞与实际收获的分选细胞的比率

E．从悬液中分辨出的目的细胞总量，再经分选后获得的实际比率

35．分选得率与

　　A．分选速度相关

　　B．分选目的细胞总量相关

　　C．不选细胞总量相关

　　D．分选细胞的生物学性质

　　E．不选细胞的生物学性质

36．面积脉冲信号是指

A．电压脉冲曲线内外区域的大小

B．电压脉冲曲线外区域的大小

C．电压脉冲曲线内区域的大小

D．电压脉冲的高度

E．以上都不是

37．流式细胞仪的数据参数中荧光信号反映的是

A．颗粒中被染上荧光部分数量的多少

B．颗粒的大小

C．细胞内部结构复杂程度

D．细胞表面的光滑程度

E．以上都不是

38．单参数直方图反映的是

A．不同荧光强度的颗粒数量

B．同样荧光强度的颗粒数量

C．不同荧光强度的颗粒性质

D．同样荧光强度的颗粒性质

E．以上都不是

39．单参数直方图中

A．纵坐标表示被测细胞的数量，横坐标分为1024脉冲信号通道

B．纵坐标表示被测细胞的性质，横坐标分为1024测量参数

C．纵坐标表示被测细胞的数量，横坐标分为1124测量参数

D．纵坐标表示被测细胞的性质，横坐标分为1024脉冲信号通道

E．纵坐标表示被测细胞的数量，横坐标分为1024细胞

40．双参数直方图包括

A．点图

B．点图、二维等高图

C．点图、二维等高图、三维等高图

D．点图、二维等高图、假三维等高图

E．点图、二维、三维和假三维等高图

41．等高线图由类似地图上的下述哪种线组成

A．实线

B．虚线

C．连线

D．双线

E．等高线

42．假三维等高图中的一维不是参数，而是

A．细胞

B．细胞数

C．线性

D．对数

E．峰值

43．Regiou设置是根据下述哪项信号强弱划定分析区域

A．同一张单参数和三参数直方图

B．同一张双参数和三参数直方图

C．同一张单参数和双参数直方图

D．同一张单参数和多参数直方图

E．同一张双参数和多参数直方图

44．gate设置是指在某一张选定参数的直方图上根据该图的细胞群分布选定待分析的特定细胞群，并要求该样其他参数组合的直方图只体现

A．该群细胞的分布情况

B．ＲBC的分布情况

C．ＷBC分布情况

D．Pt分布情况

E．CD4+细胞分布情况

45．进行流式细胞分析第一步是制备

A．两个细胞的重叠

B．多个细胞的粘连

C．细胞碎片

D．单细胞悬液

E．细胞荧光染色

46．制备单细胞悬液时，测定前通常要把哪项从血液中分离出来

A．单核细胞或淋巴细胞

B．单核细胞或血小板

C．淋巴细胞或血小板

D．Ｔ淋巴细胞或B淋巴细胞

E．红细胞或血小板

47．从新鲜实体组织制备单细胞悬液的目的是

A．分离细胞

B．不损伤细胞

C．既分离细胞又不损伤细胞

D．破坏组织间的胶原纤维

E．分解组织间的蛋白质

48．新鲜实体组织单细胞悬液制备的常用方法有

A．机械法

B．酶处理法

C．化学试剂处理法

D．表面活性剂处理法

E．以上都不是

（二）A2型题（否定型）

1．流式细胞仪分析技术不包括

A．激光技术

B．计算机技术

C．电子显微镜技术

D．流体喷射技术

E．分子生物学技术

2．不是带通滤片允许通过的光波长是

A．525nmBP

B．575nmBP

C．620nmBP

D．625nmBP

E．675nmBP

3．与散射光的强弱无关的是

A．细胞的大小

B．细胞的形状

C．细胞的标记

D．细胞的光学同性

E．胞内颗粒折射

4．荧光染料在488nm激发光下发出荧光颜色错误的是

A．绿色

B．橙色

C．白色

D．橙红色

E．红色

5．对培养细胞的分选不宜选择高速，是因为

A．细胞太多

B．细胞太大

C．细胞膜脆弱

D．细胞核脆弱

E．胞浆所占比例大

6．不是流式细胞仪数据显示的方式是

A．单参数直方图

B．双参数直方图

C．三参数直方图

D．假三维等高图

E．前向散射光示意图

（三）B1型题（配伍题）

　问题1～3

A．量子产额和消光系数

B．吸收

C．波长差

D．标记染色

E．荧光信号

1．荧光染料应有较高的：

2．发射光波长与激发光波间有较大的：

3．荧光染料对488nm激发光波长有强的：

　问题4～6

A．深蓝

B．橙红色

C．橙色

D．红色

E．深红色

4．FITC的荧光颜色是：

5．PE（RD1）的荧光颜色是：

6．ＰeCy7的荧光颜色是：

　问题7～9

A．CD3+、CD4+、CD8-

B．CD3+、CD4+、CD8+

C．CD19、CD20、CD21、CD22

D．CD16、CD56、CD11a/CD18

E．CD3-、CD16+、CD56+

7．临床确定为ＮＫ细胞的是：

8．成熟B细胞主要表达的是：

9．Ｔh细胞表达的是：

　问题10～12

A．ＴdＴ

B．ＰＩ

C．ＭDＲ

D．CD4+/CD8+倒置

E．ＨＬA－B27

10．用流式细胞仪检测的胞质内抗原之一是：

11．用于肿瘤耐药基因分析时，可检测到的是：

12．AIDS患者免疫诊断指标之一是：

我国古代的读书人,从上学之日起,就日诵不辍,一般在几年内就能识记几千个汉字,熟记几百篇文章,写出的诗文也是字斟句酌,琅琅上口,成为满腹经纶的文人。

为什么在现代化教学的今天,我们念了十几年书的高中毕业生甚至大学生,竟提起作文就头疼,写不出像样的文章呢?

吕叔湘先生早在1978年就尖锐地提出:

“中小学语文教学效果差,中学语文毕业生语文水平低,……十几年上课总时数是9160课时,语文是2749课时,恰好是30%,十年的时间,二千七百多课时,用来学本国语文,却是大多数不过关,岂非咄咄怪事!

”寻根究底,其主要原因就是腹中无物。

特别是写议论文,初中水平以上的学生都知道议论文的“三要素”是论点、论据、论证,也通晓议论文的基本结构:

提出问题――分析问题――解决问题,但真正动起笔来就犯难了。

知道“是这样”,就是讲不出“为什么”。

根本原因还是无“米”下“锅”。

于是便翻开作文集锦之类的书大段抄起来,抄人家的名言警句,抄人家的事例,不参考作文书就很难写出像样的文章。

所以,词汇贫乏、内容空洞、千篇一律便成了中学生作文的通病。

要解决这个问题,不能单在布局谋篇等写作技方面下功夫,必须认识到“死记硬背”的重要性,让学生积累足够的“米”。

二、填空题

1．血液中各类细胞的密度不同，其中____________与Ｆicoll分层液密度1.077相当，离心后位于分层液与血浆层的界面中。

2．FITC是免疫荧光技术中最常用的染料，但其发射荧光的强度受影响较大。

3．两种荧光发射信号重叠时，其检测准确性差，通常采用的方法来消除重叠信号。

4．细胞仪根据细胞流经光照射区时＿＿＿＿＿＿的强弱来分析和分选细胞。

5．式细胞术是对的理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。

要练说，先练胆。

说话胆小是幼儿语言发展的障碍。

不少幼儿当众说话时显得胆怯：

有的结巴重复，面红耳赤；有的声音极低，自讲自听；有的低头不语，扯衣服，扭身子。

总之，说话时外部表现不自然。

我抓住练胆这个关键，面向全体，偏向差生。

一是和幼儿建立和谐的语言交流关系。

每当和幼儿讲话时，我总是笑脸相迎，声音亲切，动作亲昵，消除幼儿畏惧心理，让他能主动的、无拘无束地和我交谈。

二是注重培养幼儿敢于当众说话的习惯。

或在课堂教学中，改变过去老师讲学生听的传统的教学模式，取消了先举手后发言的约束，多采取自由讨论和谈话的形式，给每个幼儿较多的当众说话的机会，培养幼儿爱说话敢说话的兴趣，对一些说话有困难的幼儿，我总是认真地耐心地听，热情地帮助和鼓励他把话说完、说好，增强其说话的勇气和把话说好的信心。

三是要提明确的说话要求，在说话训练中不断提高，我要求每个幼儿在说话时要仪态大方，口齿清楚，声音响亮，学会用眼神。

对说得好的幼儿，即使是某一方面，我都抓住教育，提出表扬，并要其他幼儿模仿。

长期坚持，不断训练，幼儿说话胆量也在不断提高。

三、判断题

1．流式细胞仪的工作原理借鉴了荧光显微镜技术。

2．镜组的作用是将激光和荧光变成平行光。

3．荧光染料浓度较稀时，荧光强度与溶液成反比。

四、名词解释

1．细胞自发荧光

2．分选得率

3．前向散射光

五、简答题

1．简述流式细胞仪的工作原理。

2．鞘液的主要作用是什么？

3．流式细胞仪荧光测量的基本原理是什么？

4．简述细胞分选的原理？

5．何谓同型对照？

六、论述题

1．用流式细胞仪进行细胞分选的技术要求有哪些？

2．制备合格的单细胞悬液时应注意些什么？

3．请介绍流式细胞仪在血液病检测中的应用。

标准答案

一、选择题

（一）A1型题（标准型）

1.E2.D3.B4.E5.C6.A7.B8.D9.E10C11.E12.A13.B14.D15.B16.E17.A18.D19.A20.D21.C22.E23.A24.C25.D26.B27.E28.D29.A30.E31.E32.B33.D34.E35.A36.C37.A38.B39.A40.D41.E42.B43.C44.A45.D46.B47.C48.E

（二）A2型题（否定型）

1.C2.E3.C4.C5.C6.D

（三）B1型题（配伍题）

1.A2.C3.B4.A5.C6.E7.E8.C9.A10.A11.C12.D

二、填空题

1．单核－淋巴细胞

2．pＨ

3．荧光补偿

4．电压信号

5．单个细胞

三、判断题

1.√

2.√

3.×

四、名词解释

1．细胞自发荧光：

大部分哺乳动物细胞内的吡啶或黄素类核苷酸都存在自发荧光，用紫外光或蓝光激发可蓝色或绿色荧光。

2．分选得率：

指从一群体细胞悬液中分辨出目的细胞总量，再经分选后获得目的细胞的实际得率。

3．前向散射光：

激光束照射细胞时，光以相对较小的角度0.5~10°向前方散射的讯号。

五、简答题

1．流式细胞仪的工作原理：

借鉴了荧光显微镜技术，将激发光改为激光，使具有更好的单色性；利用荧光染料与单克隆抗体技术，提高特异性与灵敏度；将固定的标本台改为流动的单细胞悬液，并用计算机进行信号的数据处理分析，能同时从一个细胞上获得多种参数资料。

2．鞘液的主要作用：

鞘液是辅助样本流进行正常检测的基质液，其主要作用是包裹在样本流的周围，使其保持处于喷嘴中心位置以保证检测精确性，同时防止样本流中细胞靠近孔壁而堵塞喷嘴。

3．流式细胞仪荧光测量的基本原理：

荧光测量时，荧光信号由被测细胞上标记的特异性荧光染料受激光激发后产生，每种荧光染料都有特定的激发波长，激发后产生特定波长荧光与颜色，通过波长选择通透性滤光片，将不同波长荧光信号区分开，送到不同的光电倍增管，经过一系列信号转换、放大、数字处理，可在计算机上显示出来。

4．细胞分选的原理：

当细胞悬液形成液流柱流经流动室，流动室上方的压电晶体产生机械振动带动流动室以相同频率进行振动，使液流柱断裂成一连串均匀的液滴，其形成速率约每秒３万个，其中仅少数液滴含有细胞，大量为不含细胞的空白液滴。

当实验设计中设定了被分选细胞的特性参数时，此类细胞在形成液滴时会充电，带有正或负电荷，未设分选参数的细胞及空白液滴不带电荷。

带电液滴在落入电极偏转极的高压静电场，依所带电荷是正或负而发生向右或左道偏转，落入指定收集器中完成分选。

5．同型对照为免疫荧光标记中的阴性对照。

由于荧光标记单抗的组来源不同，应选用相同来源的未标记单抗作为同型对照来调整及设置电流电压，在此基础上进行样本检测可使荧光标记单抗的信号保持特异性，如不用同型对照，结果的可靠性将受到影响。

六、论述题

１．用流式细胞仪进行细胞分选的技术要求有：

①分选速度，一般要求分选速度达5000个/秒左右，以保证被分选细胞的生物活性不受影响。

分选速度与仪器性能有关，与细胞悬液中被分选细胞含量呈正相关。

分选速度应按细胞的特性决定，如培养细胞因其膜脆弱，不宜选择高速；而骨髓来源的细胞因所占比例不变，宜选高速。

②分选纯度，与仪器精密度及被选细胞与其他细胞有无重叠特性相关，也与实验设计的选择密切相关。

③分选收获率，即通过测量点的分选细胞与实际收获的分选细胞的比例，同样与不选细胞有否重叠相关。

收获率与纯度有对应关系：

要求纯度高，收获率相对低；要求收获率高，则纯度相对降低。

实际工作中，应在不影响纯度的情况下，获得最高收获率。

④分选得率，是指从一群体细胞悬液中分辨出目的细胞的总量，再经分选后获得目的细胞的实际得率。

得率与分选速度相关，分选速度过高，会有部分目的细胞漏检，得率下降；分选速度降低，得率增加。

2．制备合格单细胞悬液时应注意：

①采用适当的制备方式，应保证检材的新鲜，分离单核淋巴细胞洗涤离心去除细胞碎片，洗涤时避免高速离心而致细胞膜结构损伤。

②有些患者在标本的分离过程中，会出现红细胞粘附现象，此时使用溶血剂处理红细胞比地势低渗液更有利淋巴细胞膜不受破坏。

③实体组织标本制备单细胞悬液，最好采用机械法，因化学法与酶法都易造成细胞碎片增加、细胞膜结构或抗原的损伤，而机械法中控制机械用力强度是关键。

④温度与PH，在处理洗涤细胞时，溶液温度应在25℃~37℃之间，PH在7.0~7.2之间,以维持细胞与体内的生理条件相似,不致发生细胞形态与结构的改变.

3．流式细胞仪在血液病检测中的应用：

对淋巴细胞表面抗原进行连续检测可明确淋巴细胞分化过程中各阶段表面抗原的表达，并检出异常表型的淋巴细胞，它们往往是恶性肿瘤细胞，如恶性淋巴瘤的典型特征是单一表型的单克隆淋巴细胞群。

利用单克隆抗体也可对白血病细胞进行免疫分型，并对异向性治疗和预后判断提供帮助，FCM可同时测定细胞膜抗原、胞质抗原和DNA含量,有助于血液系统恶性疾病的检测、治疗和预后分析。

白血病的准确分类是选择化疗方案和判断预后的主要依据，FCM结合单抗的应用可提高白血病分类诊断符合率，并分期；可对慢性粒细胞性白血病急性发作时的主要病变细胞进行分析，对白血病复发的主要根源－微小残留病变的检出有高特异性和敏感性，故在缓解期患者检测微小残留病变以避免复发。