石蜡切片冰冻切片培训教程.docx

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石蜡切片冰冻切片培训教程

石蜡切片与冰冻切片培训教程

石蜡切片和冰冻切片优缺点比较

项目

石蜡切片

冰冻切片

目的及

抗原稳定性

定位准确

定位不准，抗原易弥散，定性快

抗原保真

酶活性

需修复

活性好，易出阳性结果

操作步骤

繁琐，耗时长

简易快捷

保存

室温，可长期保存

-80°C半年左右

切片厚度

2-5um，易得连续切片

5-10um，不易得连续切片

制片效果

片子漂亮，组织形态结构保存好，石蜡自发荧光有干扰

抗原易阳性，冰晶易导致组织结构破坏

适用

一抗指定

感染性标本，骨，钙化组织，脂肪，小组织

临床快速诊断，原位杂交，免疫荧光，某些酶的显示如ATP酶，琥珀酸脱氢酶等

冰冻切片

概述：

冰冻切片是将活组织迅速冰冻、切片、染色，进行病理诊断的方法。

主要应用:

（1）快速病理诊断

（2）显示组织中的脂质（3）在组织化学上显示酶活性（4）神经组织学的镀银和镀金染色法（5）免疫荧光的研究准备材料：

（1）切片机刀片

（2）冰冻包埋剂（3）液氮罐（4）液氮专用冻存管（5）组织镊（6）手术刀或组织剪（7）培养皿（8）生理盐水（9）粘附载玻片

冰冻切片机仪器说明

功能键说明

灯光开关按钮，用于冷冻箱照明。

手动除霜按钮，用于激活和终止手动除霜。

锁定按钮，锁定解锁定控制面板以避免无意修改输入的参数。

要锁定或解锁定，按下约5秒。

用箭头所指的+和-键在钟型标记的面板上可以设置实际时间。

按下或按钮超过1秒，时间值连续增加或减少（自动重复功能）。

功能键说明

UVC

紫外灯开关按钮，用于冷冻箱消毒，开启后30分钟后自动熄灭

用箭头所指的+和-键设置自动除霜循环的起始。

同时，时和分标记之间的LED闪烁。

自动除霜循环每24小时进行一次。

用+和-键设置冷冻箱的温度。

实际温度是标准读数。

要显示需要的数值，触摸+和-键。

用+和-键置需要的数值。

按下或按钮超过1秒，冷冻盒温度值连续增加或减少。

完成设置后5秒将显示实际值。

用于激活Peltier元件冷冻快速冷冻站。

一旦激活，制冷系统的压缩机将在40秒后启动以加强热传导效应。

仪器无Peltier元件显示为“LL”，有Peltier元件显示为“PE”。

功能键说明

粗调后退按钮，用于标本远离刀片的快速移动。

微调后退按钮，用于标本远离刀片的慢速移动。

粗调前进按钮，用于标本靠近刀片的快速移动。

微调前进按钮，用于标本靠近刀片的快速移动。

（注意：

以上粗调和微调按钮均可采用点按步进移动或长按连续移动。

）

冰冻切片操作流程

①取材：

手术过程中取下的新鲜组织，不能太大太厚，厚者冰冻费时，大者难以切完整，大小约为24×24×2mm；②设定冷冻温度：

应视不同的组织选择不同的冷冻箱冷温度,冷冻不足无法切片，冷冻过度切片易碎，如：

a软骨、睾丸、脾脏等高密度组织，冷冻箱温度在-10～15℃；b甲状腺、脑、心脏、肌肉等组织，温度在-15～25℃；c肝、乳腺、膀胱等含脂肪的组织，温度在-25℃以下。

③包埋冷冻：

取出组织标本盘，放平摆好组织，周边滴上包埋剂（一般为OCT），速放于冷冻台上，冰冻。

小组织应先取一标本盘，滴上包埋剂让其先冷冻，再放上组织，滴上包埋剂冷冻。

④修平组织：

将冷冻好的组织块，夹紧于切片机标本头上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。

⑤调节防卷板与切片：

制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。

调好切片厚度，切片时，切出的切片能在第一时间顺利地通过刀与防卷板间的通道，平整地躺在持刀器的铁板上。

这时便可掀起防卷板，取一粘附载玻片，将其附贴上即可。

冰冻切片冷冻温度选择表

组织

10-15

15-25

25-50

肾上腺

骨髓

脑

膀胱

乳腺-脂肪

乳腺-较少脂肪

软骨

宫颈

脂肪

心脏和血管

小肠

肾脏

喉

唇

肝脏

肺

淋巴

肌肉

鼻

胰腺

前列腺

卵巢

直肠

皮肤带有脂肪

皮肤不带有脂肪

脾脏或血性组织

睾丸

甲状腺

舌

刮宫物

冰冻切片常见问题、原因、解决方法

常见问题

原因

解决方法

切片拖尾现象

- 标本不够冷

- 刀片或防卷板不够冷

- 设置较低的温度

- 等到刀片或防卷板达到冷冻箱温度

切片褶皱

-刀片刃缘损坏

-防卷板边缘损坏

-使用刀片的不同部位

或更换新刀片

-更换防卷板

切片卷曲在防卷板上

防卷板未能伸出刀片刃缘足够远

重新正确调节防卷板

切片撕裂

-标本温度过低

- 刀片的钝部、污垢、灰尘、霜冻或者生锈

- 防卷板顶缘损坏

- 组织中有硬颗粒

- 刀背的污垢

- 升高标本温度

-使用刀片的不同部位

或更换新刀片

-更换防卷板

-更换组织

-清洁污垢

切片没有适当铺平

-静电/气流

-标本不够冷

-大面积标本

-防倾板位置错误

-防倾板未与刃缘校直

-错误的间隙角

-刃缘变钝或损坏

-刀片和/或防倾板上有污垢

-去除原因

-选择较低的温度

-平行修整标本，增加切片厚度

-重新放置防倾板

-正确校准防倾板

-选择正确的角度

-使用刀片的不同部位或更换刀片

-用干布或刷子清洗

标本盘不能拆卸

-下面的湿气造成标本与冷冻架或标本头冻在一起

-过多的冰冻包埋剂溢出造成标本盘与冷冻架冻在一起

-接触点滴加高浓度酒精或加热

-滴加包埋剂时不要过多，不要溢到标本盘最外圈

时钟面板上的出错信息显示如下：

EO：

XX（如数字20~27）

-切片机故障

-通知管理员来处理

石蜡切片

概述：

石蜡切片法是以石蜡作包埋剂，用旋转切片机将材料切成薄片，经一系列处理制成永久制片的方法。

准备材料：

（1）切片机刀片（3）液氮罐（4）液氮专用冻存管（5）组织镊（6）手术刀或组织剪（7）培养皿（8）生理盐水（9）载玻片（10）乙醇（11）二甲苯（12）福尔马林（13）蜡（14）包埋盒（注意：

若自己进行石蜡包埋还需准备10-14号材料）

石蜡切片制片流程

组织取材→福尔马林溶液固定过夜→70％酒精2－4小时→85％酒精2－4小时→95％酒精（Ⅰ）2－3小时→95％酒精（Ⅱ）1－2小时→100％酒精（Ⅰ）1－2小时→100％酒精（Ⅱ）0.5－1小时→100％酒精：

二甲苯（1：

1）0.5－1小时→二甲苯（Ⅰ）20—30分钟→二甲苯（Ⅱ）10—20分钟→浸蜡（Ⅰ）40分钟→浸蜡（Ⅱ）40分钟→组织包埋→蜡块整修，切片→选片、粘片及展片→贴好的切片置于烤片机烤干30分钟~120分钟

（注意：

组织大小：

约1.5*1.5*0.5厘米福尔马林溶液配制：

40%甲醛100ml,磷酸二氢钠4克，无水磷酸氢二钠6.5克，蒸馏水900ml）

石蜡切片机操作规程

1.打开切片机后背开关，将蜡块固定于切片机头上的标本夹内，使用修片模式，设置好修片厚度，调整蜡块到稍离开刀口能够切到的位置上，注意蜡块组织切面与切片刀口要垂直平行。

2.匀速摇动手轮并点按微调按钮调整蜡块切面恰好与刀口接触，接触后摇动手轮进行修片。

3.修片时若发现蜡块切面与切片刀口不够垂直平行可以通过标本夹旁边的控制杆与标本切面角度调节旋钮来调整蜡块切面。

调整后稍微调整蜡块离开刀口一点再重复第2步重新修片。

4.修片修到可以切出完整的最大组织切面时切换回切片模式，设置好切片厚度进行切片，注意前一两个切片的厚度还没更换好应舍弃。

5.切出蜡带后，右手用镊子夹住蜡带粘住刀口的一端轻轻拉起，尽可能将蜡带拉直展开，左手用毛笔拖住蜡带中间，转移轻铺于选片盒中。

6.在选片盒中用镊子将蜡带分成你需要的段数，并将一些破损的切片夹开去除，用已标记好的载玻片捞片。

7.将已粘片的载玻片置于预热好水温（42℃~45℃）的展片机内进行展片，一般几秒即可使切片展平，然后将载玻片置于预热好（65℃~70℃）的烤片机上烤干，烤片时间为30分钟~120分钟。

8.使用完切片机后，锁好手轮，取下蜡块，卸下刀片，关闭切片机，用毛笔清理切片机，稍微往上提并拉出切片废料U型盘进行清理。

石蜡切片机仪器说明

石蜡切片常见问题及原因

1、切片上卷且不能形成连续蜡带。

原因：

a、切片刀不够锋利b、切片刀与蜡块角度不当c、石蜡硬度过大，黏度不够d、蜡块四周留蜡边太少

2、切片上出现裂纹。

原因：

a、切片刀上有小缺口或刀不平整b、组织中可能含有较硬的物质，如包埋纸、线头、钢丝等c、组织过硬变脆（如凝血块、胶冻样物质、甲状腺、腺瘤等）d、石蜡中含杂质较多e、包埋时石蜡冻结太慢

3、切片粘附在刀上或蜡块上且不易取下。

原因：

切片时有静电作用，产生静电吸引，在冬季或气候干燥时最常出现这种情况。

4、切片易碎或组织脱出与石蜡分离。

原因：

a、组织固定不佳、脱水透明不够b、浸蜡时间过长、温度过高c、组织脱出是由于脱水透明时间不够，或组织中含有酒精，石蜡不易渗入组织中，故导致石蜡与组织分离d、石蜡、二甲苯使用时间过久

5、切片皱缩。

原因：

a、刀片过钝

b、标本过热

c、切片速度太快

6、仪器没有显示。

原因

a、电缆连接不正确

b、保险丝故障

c、控制面板的电缆连接不正确

d、电压选择开关设置不正确

石蜡切片机与冰冻切片机的安全事项

1．刀片很锋利，安装与拆卸刀片时需小心注意，可使用镊子操作以免割伤。

2．操作切片机手轮时离开手轮就要锁住手轮以免接触切片机内部时割伤。

3．清理切片机时需先把刀片拆卸出来再进行清理。