复方贞术调脂胶囊水提液精制方式研究.docx
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复方贞术调脂胶囊水提液精制方式研究
复方贞术调脂胶囊水提液精制方式研究
【摘要】目的优选复方贞术调脂胶囊水提液精制方式。
方式以总酚酸、总多糖、丹酚酸B含量及总固体得率为指标,比较壳聚糖絮凝法、超滤法和水醇法三种精制方式对复方贞术调脂胶囊水提液的精制成效。
结果采纳壳聚糖絮凝法进行精制,水提液中丹酚酸B、总多糖及总酚酸转移率较高,别离为%,%,%,总固体得率为%。
结论壳聚糖絮凝法工艺简单,有效成份转移率较高,可用于复方贞术调脂胶囊水提液的精制。
【关键词】复方贞术调脂胶囊;超滤法;壳聚糖絮凝法;水醇法
Abstract:
ObjectiveTooptimizethepurificationprocedureoftheactivecomponentsofcompoundZhenzhutiaozhiChitosan,wateralcoholmixtureandultrafiltrationwereusedtopurifythecomponentsinthecontentsofsalvianolicacidB,totalsalvianolicacidsandpolysaccharideswereusedastheindexforevaluatingthepurificationefficacy.ResultsTheextractyieldsofsalvianolicacidB,polysaccharidesandtotalsalvianolicacidswere%,%and%,respectively,whenusingchitosantopurifythetotalyieldofthesolidswas%.ConclusionTheprocessofchitosanwassimple,whichcouldbeusedtopurifytheactivecomponentsofcompoundZhenzhutiaozhicapsule.
Keywords:
compoundZhenzhutiaozhicapsule;ultrafiltration;chitosan;wateralcoholmixture
复方贞术调脂胶囊由女贞子、丹参、白术、佛手等中药组成,具有调肝降脂、健脾补肾、祛瘀解毒功效,用于医治高脂血症,疗效显著。
前期研究结果显示,丹参、白术、佛手中水溶性组分具有调剂血脂,抗脂质过氧化,抗动脉粥样硬化等作用[1-3]。
因此,丹参、白术、佛手等药材以水为提取溶剂进行提取。
但在有效成份被提掏出的同时,大量水溶性杂质也被提出。
为去除杂质,富集有效成份,提高制剂的稳固性,本文以丹酚酸B、总酚酸、总多糖含量及总固体得率为指标,优选复方贞术调脂胶囊水提液的精制方式。
1仪器与试药
仪器
DIONEXultimate3000(美国);UV1101型分光光度计(上海天美);RE52AA旋转蒸发器(上海嘉鹏科技);BS423S型电子分析天平(北京赛多利斯);KQ250型医用超声波清洗机(昆山超声仪器,功率250W);壳聚糖(上海华凯科技贸易公司);AB-8型大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂);超滤系统(millipore,SD239/P34409)。
试剂
原儿茶醛对照品(110810200205,供含量测定用),丹酚酸B对照品(111562200706,供含量测定用)均购自中国药品生物制品检定所。
乙腈、甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯。
2方式与结果
样品溶液的制备
原液
按处方量称取丹参、白术、佛手等药材,加入7倍量的水,提取3次,每次1h。
归并提取液,滤布(50μm)滤过,浓缩,定容至3000mL,作为样品溶液Ⅰ。
水提醇沉法
周密量取样品溶液Ⅰ100mL,浓缩至50mL(每毫升药液含g生药),加入乙醇使含醇量达50%,静置,冷藏24h,滤过,滤液减压回收乙醇,加水定容至250mL,作为样品溶液Ⅱ。
壳聚糖絮凝法
周密量取样品溶液Ⅰ100mL,加水稀释至250mL,加入30mL壳聚糖醋酸溶液(称取壳聚糖1g,加入2%的醋酸溶液100mL,搅拌,静置24h,备用),搅匀,静置24h,离心,取上清液,加水定容至250mL,作为样品溶液Ⅲ。
超滤法
周密量取样品溶液Ⅰ100mL,加水稀释至药液浓度g/mL,在120kPa压力下,采纳截留分子量为50k的超滤膜滤过,滤液浓缩并定容至250mL,作为样品溶液Ⅳ。
总多糖含量测定
葡萄糖标准曲线的绘制
周密称取干燥至恒重的无水葡萄糖6g,加水溶解并定容于50mL量瓶中,制成每1mL含mg的溶液,作为对照品溶液。
别离周密吸取、、、、、mL至50mL量瓶中,加水至刻度,摇匀,周密吸取上述各浓度溶液2mL,别离加入2%苯酚溶液1mL,摇匀,迅速加入浓硫酸5mL,摇匀,静置5min,至滚水浴中加热15min,掏出,快速用冷水冷却至室温。
以水为空白,一样显色操作制备空白对照,于紫外可见分光光度计490nm波优势测其吸光度。
以葡萄糖毫克数为横坐标,以吸光度为纵坐标,得回归方程Y=+,r=。
葡萄糖在~mg范围内与吸光度呈良好线性关系。
供试品溶液制备
别离周密量取样品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各100mL,加乙醇使含醇量达85%,静置,滤过,滤渣别离用无水乙醇、丙酮洗涤,干燥,加水溶解并定容至25mL,别离作为供试品溶液一、二、3、4。
稳固性考察
周密量取供试品溶液Ⅰ100μL,置25mL刻度试管中,按“项下方式操作,测定吸光度,然后每隔30min测定1次(n=6),150min内吸光度大体不变,说明供试品在150min内大体稳固。
含量测定
周密量取供试品溶液一、二、3、4各100μL,置25mL试管中,按“项下方式操作,测定吸光度,计算总多糖含量及转移率(见表1)。
总酚酸含量测定
供试品溶液制备[4]
周密量取样品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各100mL,调整药液浓度为g生药/mL,离心,取上清液50mL置已处置好的XDA5型大孔吸附树脂柱(内径cm,长度10cm,10mL树脂湿法装柱)中,用2倍柱体积的水冲洗至流出液近无色,弃去水液,再用70%乙醇洗脱,搜集乙醇洗脱液,水浴蒸至近干,加水定容至20mL,别离作为供试品溶液五、六、7、8。
测定波长选择
别离周密吸取原儿茶醛对照品及供试品溶液mL于20mL量瓶中,加入%亚硝酸钠溶液mL,混匀,放置12min,再加入10%硝酸铝溶液mL,混匀,放置12min后,加入1mol/mL氢氧化钠溶液mL,加水稀释至刻度,摇匀,10min后,用紫外可见分光光度计于300~900nm波长范围扫描,随行试剂为空白。
结果对照品和供试品在490nm波优势有一较大吸收峰,与文献报导的一致[5]。
原儿茶醛标准曲线的绘制
周密称取原儿茶醛对照品mg于25mL量瓶中,加水溶解,定容至刻度,摇匀,即得。
别离吸取原儿茶醛对照品溶液、一、、、2mL于20mL量瓶中,别离加入%亚硝酸钠溶液5mL,摇匀,放置12min后,加入10%硝酸铝溶液mL,摇匀,放置12mim后,加入1mol/L氢氧化钠溶液mL,加水稀释至刻度,摇匀,10mim后,用紫外可见分光光度计于490nm波优势测定吸光度,以原儿茶醛毫克数对吸光度绘制标准曲线,得回归方程为:
y=-,r=。
原儿茶醛在~mg范围内与吸光度呈良好线性关系。
稳固性实验
周密量取供试品溶液5于20mL量瓶中,按“项下方式操作,每距离10min测定1次,测定结果说明,显色后60min内供试品大体稳固。
含量测定
周密量取供试品溶液五、六、7、8各100μL,置25mL刻度试管中,按“项下方式操作,测定吸光度,计算总酚酸含量及转移率(见表1)。
丹酚酸B含量测定
色谱条件与系统适用性
色谱柱:
KromasilC18(5μm,250mm×mm);流动相:
甲醇乙腈%甲酸(24∶10∶66);流速:
1mL/min;检测波长:
286nm;进样量:
20μL。
标准曲线绘制
周密称取丹酚酸B对照品mg,加75%甲醇溶解制成每1mL含8mg的溶液,作为对照品溶液。
周密吸取对照品溶液五、10、20、30、40、60μL注入液相色谱仪,测定丹酚酸B色谱峰面积,以丹酚酸B微克数为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线。
丹酚酸B的回归方程为y=,r=。
在~μg范围内峰面积积分值与丹酚酸B微克数呈良好的线性关系。
含量测定
别离吸取对照品溶液、样品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ,用微孔滤膜(μm)滤过,取续滤液各20μL注入液相色谱仪中,测定峰面积,计算样品中丹酚酸B含量及转移率(见表1)。
总固体得率的测定
别离周密量取样品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各50mL,置干燥至恒重的蒸发皿中,水浴蒸干后,置烘箱内105℃干燥5h,于干燥器内冷却至室温,称定,待恒重时,周密称重,计算总固体得率及转移率(见表1)。
表1不同精制方式比较结果(略)
表1结果显示,水提液采纳水醇法处置,总多糖、总酚酸损失较多,转移率仅别离约为33%和70%;超滤法、壳聚糖絮凝法处置,总多糖、总酚酸转移率较高;三种方式处置后,丹酚酸B转移率均较高。
由于壳聚糖絮凝法具原料用量少、价廉且操作简单等特点,故综合考虑,确信复方贞术调脂胶囊水提取液采纳壳聚糖絮凝法精制。
3讨论
由于复方药物成份复杂,样品颜色较深,易对显色反映产生阻碍,致使含量测定不准确,故在总酚酸含量测定前通过大孔吸附树脂对样品溶液进行纯化,富集有效部位,排除干扰,使结果更准确、靠得住。
总酚酸含量测定通常采纳紫外可见分光光度法,实验中发觉,若是以三氯化铁铁氰化钾为显色剂,干扰因素较多,稳固性较差;以亚硝酸钠—硝酸铝显色,灵敏度较高,稳固性好,故采纳亚硝酸钠—硝酸铝作为显色剂。
采纳壳聚糖絮凝法对复方贞术调脂胶囊水提液精制处置,既保留了酚酸类、多糖等有效成份,又去除杂质,与醇沉法相较,具有有效成份转移率高、工艺简单、本钱低等优势;与超滤法相较,那么克服了膜污染严峻,利用寿命低,本钱高等不足。
壳聚糖作为天然澄清剂,利用电荷和大分子的架桥作用,在最大限度保留有效成份的同时,去除溶液中的不溶性颗粒、鞣质、蛋白质和树脂等杂质,且加入量少,本钱低,平安无毒,在中药提取液的纯化领域具有较好的应用前景。
【参考文献】
[1]唐春萍,郭姣.调脂灵对高脂血症大鼠脂代谢酶及载脂蛋白的阻碍[J].广东药学院学报,2007,23
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175-177.
[2]唐春萍,郭姣,杨超燕,等.调脂灵对高脂血症大鼠脂质过氧化、血液流变学的阻碍[J].中药材,2007,30(7):
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[3]唐春萍,郭姣.调脂灵对高脂血症大鼠降脂作用实验研究[J].中国实验方剂学,2007,13(5):
24-27.
[4]房信胜,谭晓梅.大孔吸附树脂纯化丹参总酚酸的定性定量分析[J].中国中药杂志,2005,17(30):
1331-1333.
[5]刘峰群,曹红,靳守东,等.比色法测定消癌平注射液中总酚酸的含量[J].华西药学杂志,2003,18(3):
220-222.
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- 复方 贞术调脂 胶囊 水提液 精制 方式 研究