古乐图宝如11质量标准起草说明.docx

古乐图宝如11质量标准起草说明.docx

《古乐图宝如11质量标准起草说明.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《古乐图宝如11质量标准起草说明.docx（15页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

古乐图宝如11质量标准起草说明

古乐图宝如-11质量标准起草说明

【来源】本制剂由包头市蒙中医院提供，为该医院的传统经验方。

【名称】根据处方药味数及主要名称而定（本制剂规范中的名称统一由蒙医专家讨论后确定）。

【处方】白葡萄干180g石膏150g红花66g甘草150g香附138g肉桂66g石榴132g丁香250g木香100g诃子100g玉簪花100g

石榴:

为石榴科植物石榴PuricagranatumL.的干燥成熟果实或种子。

其标准符合《内蒙古蒙药材标准》1986年版第391页石榴项下的有关规定。

白葡萄干：

为葡萄科植物葡萄VitisviniferaL.的干燥成熟果实。

其标准符合《内蒙古蒙药材标准》1986年版第400页白葡萄项下的有关规定。

玉簪花：

为百合科植物玉簪Hostaplantaginea（Lam.）Ascherson的干燥花。

其标准符合《内蒙古蒙药材标准》1986年版第386页玉簪花项下的有关规定。

以上三味药材为非药典和部颁标准收载品种，故需在此说明来源，其它十味药材均为《中国药典》2005年版一部收载品种。

【制法】取处方中的十一味药材，分别挑选，混合粉碎成细粉，过筛（80～100目），混匀，用水泛丸,打光，干燥，即得。

本处方中丁香、肉桂、有油性，白葡萄干有粘性，而石膏、诃子等粉性较大。

混合粉碎可避免粘性或油性药物单独粉碎的困难，故选择混合粉碎。

对三批样品和一批模拟样品的工艺考察，出成率可达94.5％以上。

结果见表1

表1三批样品及模拟样品出粉率

样品批号

投料量（g）

出粉量（g）

出成率（％）

090408

1146

1089

95.0

090512

1146

1089

95.0

090608

1146

1089

95.0

模拟样

400

378

94.5

【性状】本品为水丸剂，处方中香附、丁香、木香、肉桂等呈浅棕色、棕色或深棕色，石膏为类白色，红花显红色，其它药材显黄色或黄棕色，按处方组成比例，主色调为黄色和棕色，混合后偏黄棕色，根据多批样品及模拟样品的实际情况，并考虑不同产地、不同采集季节药材颜色的差异，使成品颜色有所变化。

故正文所述颜色确定为黄棕色至棕色；木香、丁香、香附、诃子有特异的香气，其它药材气微，成品香气较为明显，与多批样品及模拟样品的气味相符，故定为气香；处方中香附、木香、肉桂等芳香型药物具明显的辛辣味，多批样品的实际情况基本如此，故定为味辛、微苦。

【鉴别】本品为药材粉末制成的水丸剂，采用显微镜鉴别处方中的甘草、木香、红花、丁香和玉簪花。

采用了薄层色谱法鉴别处方中甘草、

红花、木香和丁香。

1、试剂试药

样品：

包头市蒙中医院提供（批号：

090408、090512、090608），模拟样品为自制。

甘草次酸对照品（批号723-200109）：

中国药品生物制品检定所购买。

木香对照药材（批号120921-200607）：

中国药品生物制品检定所购买。

红花对照药材（批号120907-200609）：

中国药品生物制品检定所购买。

丁香酚对照品（批号：

725-8601）：

中国药品生物制品检定所购买。

硅胶G（薄层色谱用）：

青岛海洋化工厂生产。

铺板器（939型薄层铺板器）：

重庆贝可得公司生产。

薄层板：

为包头市药品检验所自制。

试剂：

薄层色谱鉴别所用试剂均为分析纯。

2、显微鉴别

正文中各鉴别特征所代表的药材分别为：

①甘草的晶纤维，见照片1。

②木香的菊糖，见照片2。

③红花的花粉粒，见照片3。

④丁香的花粉粒，见照片4。

⑤玉簪花的花粉粒，见照片5。

3薄层色谱鉴别

（1）红花的鉴别。

文献报道红花主要含黄酮类化合物、脂肪酸、色素、挥发油及多炔等化合物。

参照《中国药典》2005年版一部红花项下薄层鉴别条件，制定出正文所述的鉴别方法，通过阴性对照实验观察，方中其它药材对红花的检出无干扰，此法具专属性。

见照片6、7。

（2）木香的鉴别。

木香所含挥发油、内酯类成分及生物碱均为活性成分，以木香对照药材为对照进行薄层鉴别，效果较为理想。

参照《中国药典》2005年版一部开胸顺气丸项下薄层鉴别条件，并经以下展开剂进行筛选：

①环己烷-丙酮（10：

3）；②苯-乙酸乙酯（19：

1），结果第二个展开剂较为理想、制定出正文所述的鉴别方法，且同法制备的阴性对照无干扰。

见照片8、9、10。

（3）甘草的鉴别。

文献报道甘草主要化学成分含三萜皂苷、黄酮、香豆素,并含有有机酸、生物碱、挥发油、糖类和氨基酸。

参照《中国药典》2005年版一部五毒化福丸项下薄层鉴别条件，制定出正文所述的鉴别方法，通过阴性对照实验观察，方中其它药材对甘草的检出无干扰，此法具专属性。

见照片11、12。

（4）丁香的鉴别。

文献报道丁香主要化学成分挥发油。

参照《中国药典》2005年版一部丁香项下薄层鉴别条件，制定出正文所述的鉴别方法，通过阴性对照实验观察，方中其它药材对丁香的检出无干扰，此法具专属性。

见照片13、14。

【检查】按《中国药典》2005年版一部附录IA丸剂项下规定，对本品三批样品和模拟样品进行了检查，具体方法和数据如下：

（1）水分：

取供试品照水分测定法（《中国药典》2005年版一部附录IXH第一法）测定，三批样品及模拟样品测得结果如表2。

药典规定水丸剂水分含量不得大于9.0%,从表中可见本品水分含量符合要求。

表2水分测定结果

样品批号

水分（%）

090408

5.8

090512

6.3

090608

6.7

模拟样品

7.0

（2）重量差异：

按《中国药典》2005年版一部附录IA丸剂重量差异项下第一法检查，三批样品测得结果如表3，药典规定超出重量差异限度的不得多于2份，并不得有1份超出限度的1倍。

从表中可见本品重量差异符合要求。

表3重量差异结果

标示量：

2g/10丸差异限度：

±8%限度范围：

1.84~2.16g

批号

重量（g）

090408

2.043

1.907

2.002

1.976

2.010

2.024

1.976

1.984

1.945

2.020

090512

2.080

1.948

2.023

2.029

2.017

2.080

1.985

2.031

2.003

2.000

090608

1.963

2.042

2.020

1.980

2.041

1.964

1.953

2.015

2.035

2.006

（3）溶散时限：

按《中国药典》2005年版一部附录IA丸剂溶散时限项下规定检查，三批样品测得结果如表4，药典规定水丸应在1小时内全部溶散。

从表中可见本品溶散时限符合要求。

表4溶散时限结果

批号090408090512090608

崩解时限（分钟）353331

（4）重金属：

对三批样品及模拟样进行了重金属考察，方法与结果如下：

取本品1.0g，按《中国药典》2005年版一部附录IXE第二法检查。

经对3批样品及模拟样品的检查，含重金属未超过百万分之三十，故将重金属检查项列入正文。

试验结果见表5。

表5重金属检查结果

样品批号

重金属含量（ppm）

090408

090512

090608

模拟样

﹥10

﹥10

﹥10

﹥10

≥20

≥20

≥20

≥20

<30

<30

<30

<30

<<40

<<40

<<40

<<40

<<50

<<50

<<50

<<50

（5）砷盐：

对三批样品及模拟样进行了砷盐考察，方法与结果如下：

取本品0.1g，称定重量，加氢氧化钙1g，加少量水，搅匀，烘干，用小火缓缓炽灼至炭化，再在600℃炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸7ml使溶解，再加水21ml，按《中国药典》2005年版一部附录IXF第一法（古蔡氏法）检查砷盐含量。

三批样品和一批模拟样品生成的砷斑颜色浅于或接近于标准砷斑。

表明本品含砷量未超过于百万分之二十，故将砷盐检查项列入正文。

结果见照片15。

附：

第一次取本品1.0g，称定重量，加氢氧化钙1g，加少量水，搅匀，烘干，用小火缓缓炽灼至炭化，再在600℃炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸7ml使溶解，再加水21ml，按《中国药典》2005年版一部附录IXF第一法（古蔡氏法）检查砷盐含量。

三批样品生成的砷斑颜色明显深于标准砷斑。

一批模拟样品生成的砷斑颜色浅于标准砷斑。

结果见照片16。

第二次取样品0.4g,0.6g,0.8g另取石膏1.0g，称定重量，同法检查三批样品生成的砷斑颜色明显深于标准砷斑。

石膏生成的砷斑颜色浅于标准砷斑，表明石膏是合格的。

结果见照片17。

第三次取样品0.05g,0.10g,0.15g,0.20g，称定重量，同法检查四批样品中0.10g生成的砷斑颜色明显浅于标准砷斑。

0.20g生成的砷斑颜色深于标准砷斑。

结果见照片18。

【浸出物】本品处方中药材均含醇溶性物质，因此用乙醇作溶剂做浸出物的测定，以便更有效地控制制剂的内在质量。

按照浸出物测定法（《中国药典》2005年版一部附录XA）测定，具体操作如下：

醇溶性浸出物测定热浸法

按照醇溶性浸出物测定法（《中国药典》2005年版一部附录XA）热浸法测定，对三批样品和模拟样品醇溶性浸出物热浸测定结果见表6。

表6醇溶性浸出物热浸测定结果

样品批号

醇溶性浸出物（%）（n=2）

090408

20.1

090512

20.2

090608

20.6

模拟样品

20.4

挥发性醚溶性浸出物测定

按照浸出物测定法（《中国药典》2005年版一部附录XA）挥发性醚溶性浸出物测定法测定，对三批样品和模拟样品挥发性醚溶性浸出物测定结果见表7。

表7挥发性醚溶性浸出物测定结果

样品批号

挥发性醚溶性浸出物（%）

090408

1.07

090512

1.24

090608

1.11

模拟样品

1.30

从上述两结果看，挥发性醚溶性浸出物含量不高，故未收入标准中。

醇溶性浸出物三批样品及模拟样品中浸出物的含量均在20%以上，考虑到不同产地、不同批次药材的质量不同，暂定本品含醇溶性热浸出物不得少于15.0%。

【含量测定】本品为甘草、木香、丁香、红花、诃子等十一味药组成的复方制剂，甘草、木香、红花、诃子为处方中的主药。

红花为处方中的主药，文献报道红花主要含黄酮类化合物、脂肪酸、色素、挥发油及多炔等化合物。

参照《中国药典》2005年版一部“红花”项下的含量测定方法，做了羟基红花黄色素A含量测定，经分析方法验证，表明该方法重现性好，专属性强，方中其它组分对羟基红花黄色素A的测定无干扰，故收入质量标准中。

1仪器与试药

1.1仪器岛津LC—10ATvp泵，SPD-10Avp型检测器,进样器为岛津SIL-10AF，CLASS-VP工作站，sartoriousBP211D型电子天平。

惠普上分6010紫外分光光度仪。

1.2试剂与试药羟基红花黄色素A对照品（批号：

111637—200905，供含量测定用）：

由中国药品生物制品检定所提供；样品由鄂尔多斯市乌审旗蒙医院提供（批号：

090408、090512、090608），模拟样品为自制。

乙腈、甲醇为色谱纯，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。

2方法学考察

2.1色谱条件

2.1.1色谱柱色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，本实验研究采用AgilentTC-C18柱（150mm×4.6mm，5µm）。

2.1.2流动相的选择参照中国药典2005年版一部“红花”含量测定项下羟基红花黄色素A的测定方法，以甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26：

2：

72）为流动相进行流动相条件摸索。

结果供试品色谱中的羟基红花黄色素A具有较好的分离度，理论板数较高，并具较适宜的保留时间，故作为检测流动相。

2.1.3柱温25℃。

2.1.4检测波长的选择精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，用甲醇制成1ml含30µg的溶液，在200～500nm波长范围扫描。

结果羟基红花黄色素A在403.5nm处有最大吸收。

参照中国药典2005年版一部“红花”含量测定项下羟基红花黄色素A的测定方法，选择403nm作为检测波长。

谱图见图1。

2.1.5理论板数的确定从多批检测数据可见，羟基红花黄色素A的理论板数均在2500以上,且有较好的分离效果，考虑到不同的色谱柱具不同的理论板数，故确定理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于2000。

2.2提取溶剂及提取效率的考察

2.2.1提取溶剂的选择参照《中国药典》2005年版一部“红花”项下的羟基红花黄色素A含量测定方法，选用25%甲醇作为提取溶剂。

2.2.2提取效率的考察以25%甲醇作为提取溶剂进行超声提取（功率350W,频率40kHz），为保证被测成分提取完全，实验中考察了超声提取30分钟、40分钟和50分钟不同超声提取时间对提取效率的影响，结果见表8。

谱图见图2.1-2.6。

表8提取效率的考察表

样品号取样量（g）超声时间（分钟）峰面积含量（mg/g）

14.4969305549125404890.179

24.505340100616510191360.331

34.3988509308309231450.310

附:

对照品浓度为0.030753mg/ml,对照品平均峰面积1044514.25。

从表中数据可见，超声处理30分钟羟基红花黄色素A含量较低，40分钟和50分钟羟基红花黄色素A的含量基本一致，故超声提取时间定为40分钟。

2.2.3提取溶剂加入量考察在提取过程中，对溶剂加入量进行考察，结果见表9。

谱图见图3.1-3.6。

表9提取完全试验的考察表

样品号取样量（g）加入溶剂量峰面积含量（mg/g）

14.501025ml208969720392920.338

24.503150ml105012110135820.337

34.306575ml5873405987670.304

附:

对照品浓度为0.030753mg/ml,对照品平均峰面积1044514.25。

从表中数据可见，用25ml、50ml和75ml溶剂的样品羟基红花黄色素A含量基本一致，提取完全，故确定提取溶剂加入量为50ml。

2.3专属性

阴性对照试验：

按正文【含量测定】项下的方法制备供试品溶液和对照品溶液。

另取按处方比例并以相同工艺制备的缺红花的阴性对照供试品，按供试品溶液制备法制得阴性对照溶液。

在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、阴性对照溶液、供试品溶液各10ul，分别注入液相色谱仪，测得结果为：

阴性对照色谱图中在与羟基红花黄色素A对照品以及供试品色谱图相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明其他组分对羟基红花黄色素A的测定无干扰。

谱图见图4.1-4.3。

2.4线性关系考察：

精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，，加25%甲醇制成每1ml含0.6mg的溶液（实际为0.6858mg/ml），作为对照品溶液；精密量取上述标准对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4ml，分别置10ml量瓶中，加25%甲醇至刻度，摇匀。

精密吸取10μl注入色谱仪测定，以峰面积对浓度进行回归分析，结果羟基红花黄色素A在0.1372—0.9600µg范围内呈良好的线性关系，回归方程为：

Y=14930+32464Xr=1。

标准曲线数据见表10，谱图见图5.1-5.15。

表10羟基红花黄色素A的标准曲线

浓度C（µg/ml）13.7227.4341.4554.8668.5882.3096.01

平均峰面积A46697290548413427171791021224128626936673130660

2.5稳定性试验

溶液稳定性试验取同一份供试品溶液，分别在0h、4h、8h、12h进行测定，结果见表11。

谱图见图6.1-6.8。

表11不同时间测定样品中羟基红花黄色素A的峰面积积分值

放置时间（小时）04812RSD（%）

峰面积积分值1052878.510715281068915.510819031.1

从表中数据可见，羟基红花黄色素A在12小时内的峰面积积分值基本稳定不变。

2.6精密度

重复性试验取同一批号样品（批号：

090408）6份，按标准【含量测定】项下的方法操作，测定每份样品含量。

按外标法计算含量。

结果见表12。

谱图见图7.1-7.16。

表12羟基红花黄色素A含量重现性试验结果

样品号取样量（g）峰面积值含量（mg/g）平均含量（mg/g）RSD（%）

14.4985100411810587300.338

24.31029960679438800.331

34.7134110675711172960.3470.3401.58

44.5144103271010586660.341

54.5771106530010571070.341

64.5598106001510663430.343

附:

对照品浓度为0.030753mg/ml,对照品平均峰面积1044514.25.

2.7准确度

加样回收试验取供试品（含量0.340mg/g）9份，各约2.2g，精密称定，分别置9个具塞锥形瓶中，分成三组每组三份,每组分别精密加入浓度为0.1538mg/ml（配制为:

16.75mg×0.918/100ml）的羟基红花黄色素A对照品溶液各4、5、6ml（约相当于供试品含有量的80%、100%、120%）及相应25%甲醇溶液各46、45、44ml，按标准【含量测定】项下的方法操作，测定每份含量，计算回收率，结果见表13。

谱图见图8.1-8.22。

表13羟基红花黄色素A加样回收试验结果

序号样品量供试品含量对照品加测得总量回收率平均回收率RSD

（g）（mg）入量（mg）（mg）（%）（%）（%）

12.20010.74800.61521.36299.8

22.17990.74120.61521.34998.8

32.31590.78740.61521.40299.9

42.32650.79100.7691.560100.0

52.28480.77680.7691.54299.599.60.49

62.18300.74220.7691.50298.8

72.30900.78510.92281.70699.8

82.21190.75200.92281.67399.8

92.22730.75730.92281.681100.1

附:

对照品浓度为0.030753mg/ml,对照品平均峰面积1045819.25.

2．8耐用性试验

换不同厂家、不同型号的色谱柱，取重复性试验中的1号、2号供试品及对照品溶液，分别进样，测定含量，结果见表14。

谱图见图9.1-9.8。

表14不同色谱柱的耐用试验

样品号

柱型号

取样量（g）

峰面积

含量（mg/g）

相对偏差（%）

1

AgilentC18

4.4985

10041181058730

0.338

6.8

AlltechC18

4.5369

11187661178059

0.387

2

AgilentC18

4.3102

996067943880

0.331

7.7

AlltechC18

4.5421

11577121136490

0.386

附:

对照品浓度为=0.030753mg/ml,用AgilentC18柱测定对照品平均峰面积1044514.25.用AlltechC18测定对照品平均峰面积1005236.用AlltechC18柱子测定用供试品不是重复性试验中的1号、2号供试品,为重新提取样品.

3样品含量测定

按标准【含量测定】项下的方法操作测定含量，三批样品和一批模拟样品的测定结果见表15。

谱图见图10.1-10.18。

表15样品中羟基红花黄色素A含量测定结果

批号样品号取样量（g）峰面积值含量平均含量RSD（%）

（mg/g）（mg/g）

090408数据见精密度试验项下数据0.3401.58

09051214.4051101826310281720.342

24.5193107075710656010.3480.3440.93

34.5117104256710593360.343

09060814.5099105789310493650.344

24.5320109012710603530.3490.3431.76

34.4619103127810132980.337

模拟样14.5048122138312529960.404

24.5050124701112254900.4040.4040

34.5142123383512423930.404

附:

对照品浓度为0.030753mg/ml,对照品平均峰面积1044514.25.

从表中三批样品和一批模拟样品测定的数据可见，羟基红花黄色素A的含量在0.34mg/g以上，同时用《中国药典》2005年版一部项下红花含量测定方法，对配制模拟样品用红花药材进行了含量测定，测得羟基红花黄色素A含量为10.9635mg/g,测定结果见表16。

谱图见图11.1-11.4。

表16红花药材中羟基红花黄色素A含量测定结果

取样量（g）

测得峰面积值

含量（mg/g）

平均含量（mg/g）

0.4081

30795643063749

11.080

10.9635

0.4038

29992612951338

10.847

附:

对照品浓度为0.030753mg/ml,对照品平均峰面积1044514.25.

按理论值折算，模拟样品应含羟基红花黄色素A0.505mg/g，转移率=0.404/0.505×100%=80%。

《中国药典》2005年版一部红花项下规定：

含羟基红花黄色素A（C27H30O15）不得少于1.0%（相当于10mg/g）。

含量低限=66/1432×10×80%=0.369mg/g。

考虑到药材质量差异，下浮10％，暂定本品每1g含红花以羟基红花黄色素A（C27H30O15）计,不

得少于0.30mg。

4其它:

参照中国药典2005版一部中甘草项下的含量测定方法，对处方中甘草药材作甘草酸（取样3g）和甘草苷（取样1.1g）的含量测定，按相同方法做阴性对照,结果专属性不强,重现性不好,故未收入标准中。

谱图见图12.1-12.6。

附：

测定供试品用对照品浓度:

16.75mg×0.918/100ml×5ml/25ml=0.030753mg/ml,

计算公式：

供试品峰面积积分值×对照品浓度×50

供试品含量（mg/g）=──────────────────

对照品峰面积积分值×取样量

－（供试品含量×取样量）

供试品峰面积积分值×对照品浓度×50

对照品峰面积积分值

加样回收率％＝────────────────────────×100%

对照品加入量

供试