最新HPLC法测定北苍术中苍术素的含量1.docx
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最新HPLC法测定北苍术中苍术素的含量1
HPLC法测定北苍术中苍术素的含量1
HPLC法测定北苍术中苍术素的含量
摘要:
苍术具有燥湿健脾,祛风湿的功效。
主治湿阻中焦,风寒湿痹,脚膝肿痛,痿软无力,雀目夜盲。
采用高效液相色谱法测定了北苍术挥发油中苍术素含量。
该实验采用岛津LC-8A高岛效色谱仪,以甲醇-水溶液为流动相进行梯度洗脱,其中甲醇的流速为0.8mL/min,水的流速为0.2mL/min。
实验结果如下:
北苍术挥发油中苍术素的含量为6.28%。
该方法操作简单,结果准确,重现性好,无需再作处理,无环境污染,可用于北苍术挥发油中苍术素含量的测定,具有很高的实用价值。
关键词:
高效液相色谱法含量测定北苍术苍术素挥发油
致谢8
致谢8
引言:
中药苍术为菊科植物茅苍术Atractylodeslan-cea(Thunb.)DC.或北苍术Atractylodeschinen-sis(DC.)Koidz.的干燥根茎,始载于《神农本草经》,具有燥湿健脾、祛风湿、明目之功效,临床仍用于湿滞中焦证、风湿痹证及外感风寒挟湿之表证,为中医常用药材之一。
与苍术燥湿健脾功效相关的药理作用为调整胃肠运动功能,抗溃疡(苍术有较强的抗溃疡作用。
实验发现,北苍术对幽门结扎型溃疡、幽门结扎-阿司匹林溃疡、应激性溃疡有较强的抑制作用,能显著抑制溃疡、动物的胃液量、总酸度、总消化能力及胃黏膜损害。
研究认为,苍术抗溃疡作用机理主要有两个方面:
①抑制胃酸分泌:
北苍术挥发油中的苍术醇能抑制甾体激素的释放,减轻甾体激素对胃酸分泌的刺激。
②增强胃黏膜保护作用:
北苍术可使胃黏膜组织血流量增加,从苍术中提取的氨基己糖具有促进胃黏膜修复作用。
),保肝,抑菌等作用。
而降血糖,抗缺氧,中枢抑制,抗肿瘤,促进骨骼钙化及对心血管系统的影响等作用,则是其药理作用的现代研究进展。
苍术的主要化学成分如下:
苍术根茎含挥发油,挥发油中主含苍术素(atractylodin)、β-桉油醇(β-eudesmol)、茅术醇(hinesol)、羟基苍术酮(hydroxy-atractylon)等。
其余主含β-桉叶醇和苍术呋喃烃,还含β-芹子烯,左旋的α甜没药萜醇(α-bisabolol),茅术醇,榄香醇,苍术酮,芹子二烯酮等。
又含聚乙炔化合物:
苍术呋喃烃醇(atractyoldinol),乙酰基苍术呋喃烃醇(acetylα-tractylodinol)。
苍术素的结构式:
苍术素的性状为brownpowder,分子式为C13H10O,分子量为182.2179。
其药理作用为保肝,抗缺氧,降血糖,抗炎抗肿瘤,抗菌抗病毒,抗心律失常,对消化道的作用及对神经系统的作用等。
《中国药典》至今仅有其对照药材(苍术素)的鉴别,尚无其含量测定标准。
苍术的主要有效成分为聚乙炔类成分,即主要为苍术素。
本文以苍术素为指标,采用高效液相色谱法(HPLC)建立了北苍术中挥发油的有效成分苍术素的含量测定方法,为苍术的质量标准研究提供了依据与方法。
1.实验内容
1.1仪器及试剂
仪器:
DW-2型调温电热器(规格5000ml,功率1000w),回流冷凝管(直型),挥发油提取器,5000ml圆底烧瓶,变压器,15ml容量瓶,胶头滴管,2ml移液管,试剂瓶,超声波清洗器,一次性针管,微孔滤膜,电子天平,ShimadzuLC-8A制备型高效液相色谱仪。
试剂:
北苍术,甲醇(CH3OH),乙酸乙酯(Et0Ach),水,苍术素对照品。
1.2色谱条件的选择
色谱条件的选择:
选择了甲醇-水常见的流动相系统,结果表明在这个系统中色谱峰的峰形较好,基线平稳,故选择甲醇-水系统为流动相。
当采用体积分数为50%的甲醇-水溶液等度洗脱时,苍术素出峰太慢,时间太长;当采用体积分数为80%的甲醇-水溶液等度洗脱时,苍术素出峰时间为10min左右,时间较合理,此时色谱峰的峰形较好,基线平稳,因此最终优化的色谱条件如下:
进样体积:
20μL;流动相:
水(A)-甲醇(B)溶液,其中泵A(水)的流速为0.2ml/min、泵B(甲醇)的流速为0.8ml/min。
1.3高效液相色谱法(HPLC)的原理
高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
1.4北苍术中挥发油的提取
称取500.8g北苍术,将其放入5000ml圆底烧瓶内,并加水至圆底烧瓶1/2处,然后将其放置于DW-2型调温电热器内,在圆底烧瓶口装上挥发油提取器,接着在提取器口上套上回流冷凝管,接上水,打开电源,开始加热。
加热两个小时左右开始沸腾,等待提取器中挥发油的出现,并提取1ml左右的挥发油。
1.5标准曲线的绘制
首先称取苍术素纯品5.0mg,放入1号15ml容量瓶中,接着取10ml乙酸乙酯放入1号瓶内,然后用超声波加速溶解10min,取出待冷却后,加甲醇至刻度线,摇匀。
接着用移液管从1号容量瓶中移取12.5ml的溶液置于2号容量瓶
中,再向2号中加甲醇至刻度线,依次类推,完成3号、4号、5号、6号容量瓶溶液的配制,则六瓶溶液浓度依次递减。
然后按浓度由小到大的顺序依次进样,即分别精密吸取0.0000172mol/L,0.0000343mol/L,0.0000687mol/L,0.000137mol/L,0.000275mol/L,0.000549mol/L各20μL,每个浓度进样两次,测两次峰面积,最后平均同一浓度下的两次峰面积,结果见表一。
接着以平均后的峰面积为纵坐标,苍术素的浓度为横坐标,绘制标准曲线,见图
(1),得方程方程y=6397683284.6435x+78880.1304,相关系数R2=0.9942,R=0.9971。
1.6苍术素的含量测定
将溶于甲醇的挥发油(挥发油为0.0497g)转移至15ml的容量瓶中,加甲醇至刻度线,可再加2ml乙酸乙酯助溶。
摇匀,然后用移液管从中取出1ml,移至小试剂瓶中,再加1ml甲醇稀释,摇匀,用微型滤膜过滤。
接着取20μL该溶液,注入高效液相色谱仪中,在10min处开始出峰,见图
(2)。
重复操作一次,最后平均两个峰面积。
将该峰面积代入标准曲线方程,最后计算挥发油中苍术素的含量,即北苍术挥发油中苍术素的含量为6.28%。
2.结果
2.1标准曲线
表2-1
序号
坐标
1
2
3
4
5
6
浓度(mol/L)
0.000549
0.000275
0.000137
0.0000687
0.0000343
0.0000172
平均峰面积
(mAU)
3607625.7
1722134.8
1113581.15
579613.1
245391.7
122109.5
图
(1)苍术素标准曲线
2.2高效液相色谱图
图
(2)苍术素样品溶液高效液相色谱图
图(3)苍术素标准品溶液高效液相色谱图
2.3苍术素的含量
北苍术挥发油中苍术素的平均峰面积为2111301.2,将该数据代入方程y=6397683284.6435x+78880.1304,得其中苍术素浓度为3.177
10-4mol/L,再经进一步计算,最终得北苍术挥发油中苍术素的含量为6.28%。
2.讨论
采用本文建立的苍术素含量的测定方法,即运用高效液相色谱法(HPLC),此方法简单、可靠、易于操作、重现性好、无需再作处理、无环境污染,对于北苍术挥发油中苍术素含量的测定,具有很高的实用价值。
实验结果:
北苍术挥发油中苍术素的含量为6.28%。
高效液相色谱以经典的液相色谱为基础,是以高压下的液体为流动相的色谱过程。
通常所说的柱层析、薄层层析或纸层析就是经典的液相色谱。
所用的固定相为大于100um的吸附剂(硅胶、氧化铝等)。
这种传统的液相色谱所用的固定相粒度大,传质扩散慢,因而柱效低,分离能力差,只能进行简单混合物的分离。
而高效液相所用的固定相粒度小(5um-10um)、传质快、柱效高。
当然我们在操作高效液相色谱仪时,失误也是有的,例如进样是对的,却不出峰、或者出峰有偏差。
但经过讨论和总结,明白了要确保高效液相色谱仪出峰,就要在注射样品溶液后快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态,以保证进样量的准确。
苍术素在消化道系统、抗炎、利胆及黄嘌呤氧化酶(XO)阻碍等方面均显示良好的活性,其活性与苍术药材本身的功效接近;另外,该类成分主要存在于苍术中,且含量较高。
因此以苍术素为指标,建立其含量测定方法更为合理。
3.结论
本文建立的苍术素含量的测定方法,即运用高效液相色谱法(HPLC),此方法简单、可靠、易于操作、重现性好、无需再作处理、无环境污染,对于北苍术挥发油中苍术素含量的测定,具有很高的实用价值。
建议有关部门将本方法作为苍术质量标准中含量测定的检测方法。
参考文献
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致谢
非常感谢张老师在毕业设计阶段给自己的指导,从最初的定题,到资料的收集,到写作、修改,到论文定稿,他给了我耐心的指导和无私的帮助。
为了指导我们的毕业论文,他放弃了自己的休息时间,他的这种无私奉献的敬业精神令人钦佩,在此我向他表示我诚挚的谢意。
同时,感谢所有的任课老师和所有的同学在这三年来给自己的指导和帮助,是他们教会了我专业知识,教会了我如何学习,教会了我如何做人。
正是由于他们,我才能在各方面取得显著的进步,在此向他们表示我由衷的谢意,并祝所有的老师培养出越来越多的优秀人才,桃李满天下!
通过这一阶段努力,我的毕业论文《HPLC法测定北苍术中苍术素的含量》终于完成了,这意味着大学生活即将结束。
在大学阶段,我在学习上和思想上都受益匪浅,这除了自身的努力外,与各位老师、同学和朋友的关心、支持和鼓励是分不开的。
写作毕业论文是再一次系统学习的过程,毕业论文的完成,同样也意味着新的学习生活的开始。
我将铭记我曾是扬州环境资源职业技术学院的学子,在今后的工作中我会继续将环资的优良传统发扬光大。
感谢各位专家的批评指导。
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