农业试验测定方法大全.docx
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农业试验测定方法大全
淀粉酶的定测
称取鲜样0.2克,加1%NaCl8毫升研磨(低温),放置15分钟,不时摇动。
3000rpm离心10分钟。
(1)取1ml酶液,加1%淀粉1ml
(2)空白:
取1ml酶液,100度水浴10min,加1%淀粉1ml,混匀,40度水浴5min(准确),取出,将各试管各加入DNS 2ml,煮沸5min,冷却,定容至25ml,然后在520nm下比色。
注:
淀粉临时配制。
1%淀粉:
1g溶于100ml水中。
DNS试剂:
精确称取3、5-二硝基水杨酸1g溶于20ml1mol/lNaOH中,加50ml蒸馏水中,再加入30g酒石酸钾钠,溶解后盖紧瓶塞,勿使CO2进入。
麦芽糖标液称取麦芽糖0.1000g溶于少量蒸馏水中,定容至ml即为1mg/ml的麦芽糖标液。
标准曲线的制作:
取25ml具塞刻度试管7支,按下表加入各种试剂混匀,在沸水浴中加热5分钟,取出,冷却后加蒸馏水至25ml刻度,摇匀,在520nm下比色,绘出标准曲线。
管号麦芽糖含量(ml)麦芽糖标液(ml)蒸馏水(ml)DNS试剂(ml)
0
1
2
3
4
5
60
0.2
0.6
1.0
1.4
1.8
2.00
0.2
0.6
1.0
1.4
1.8
2.02.5
2.3
1.9
1.5
1.1
0.7
0.52.0
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
硝酸还原酶的测定
试剂:
1、亚硝酸钠标准液:
称取分析纯NaNO20.1000g水溶后定容至100毫升,吸取5毫升用水稀释定容至1000毫升。
2、0.1mol/lpH7.5的磷酸缓冲液K2HPO419.24g,KH2PO42.2g,加水溶解后定容至1000毫升。
3、1%对氨基苯磺酸溶液:
称取1.0g加入25毫升浓盐酸中,用蒸馏水定容至100毫升。
4、0.2%α—萘胺溶液:
称取0.2gα—萘胺溶于25毫升冰醋酸中,用蒸馏水定容至100毫升。
5、30%三氯乙酸溶液:
75.0g三氯乙酸,水溶后定容至250毫升。
6、KNO3•异丙醇•磷酸缓冲液混合液:
称3.03gKNO3溶于300毫升0.1mol/l的磷酸缓冲液中,再加3毫升异丙醇混匀。
方法
1、标准曲线的制作:
取7支干洁的15毫升刻度试管按下表顺序加试剂,摇匀后在30度保温箱或恒温水浴中保温30分钟,然后在540nm波长下比色。
1234567备注
亚硝酸钠标准液00.20.40.81.21.62.0
蒸馏水2.01.81.61.20.80.40.0摇匀
1%对氨基苯磺酸4444444摇匀
0.2%α—萘胺溶液4444444摇匀
每管含亚硝酸态氮(μg)00.20.10.81.21.32.0
2、酶反应和酶活性测定:
①取样:
将材料洗净,用蒸馏水冲洗,滤纸吸干,剪成0.5-1.0平方厘米的小块,混匀后每个样品称0.5-1.0克3份,放入试管并编号。
②反应:
向各试管中加入KNO3•异丙醇•磷酸缓冲液混合液9毫升,其中一管立即加1毫升30%三氯乙酸溶液,混匀(作对照)。
然后将所有试管置真空干燥器中接真空泵抽气,反复几次直至叶片沉在管底。
将各试管置30度下于黑暗中保温30分钟,分别向处理管加1毫升30%三氯乙酸溶液,摇匀终止酶活性。
③:
比色:
将各试管静止2分钟吸取上清液2毫升加入另一组试管,分别加入1%对氨基苯磺酸溶液4毫升和0.2%α—萘胺溶液4毫升,摇匀显色30分钟,以对照为空白,在540nm波长比色,并计算酶活性。
酶活性(Nμg•g-1FW•h-1)=标准曲线查得值(μg)*分取倍数/样重(g)/时间(h)
硝酸还原酶活力的测定(活体法)
[试剂]
亚硝酸钠标准液称取分析纯NaNO20.1000g水容后定容至100ml,吸取5ml用水稀释至1000ml,即为每ml含NaNO25µg(亚硝态氮近似1µg/ml)的标准液.
0.1mol/LpH7.5的磷酸缓冲液:
K2HPO419.24g,KH2PO42.2g,加水溶解定容至1000ml..
1%(w/v)对-氨基苯磺酸溶液:
称取1.01g加入25ml浓HCL中,用蒸馏水定容至100ml.
0.2%(w/v)a-萘胺溶液:
称取0.2ga-萘胺溶于25ml冰醋酸中,用蒸馏水定容至100ml.
30%三氯乙酸溶液:
30.0g三氯乙酸,水溶后定容至100ml.
KNO3(0.1mol/L)、(1%v/v)、磷酸缓冲液(0.1mol/L)混合液;称取3.03gKNO3溶于300ml0.1mol/L的磷酸缓冲液中,再加3ml异丙醇混匀。
[方法]
1.标准曲线制作取7支洁净烘干的试管按下表顺序加试剂,即配成0-2.0ug的系列标准亚硝态氮溶液。
摇匀后在30保温箱或恒温水浴中保温30min,然后,在540nm波长下比色。
以亚硝态氮(µg)为横坐标,光密度值为纵坐标绘标准曲线或建立回归方程。
试剂(ml)1234567
亚硝酸钠标液
蒸馏水
1%对-氨基苯磺酸
0.2%a-萘胺
每管含亚硝态氮(µg)0
2.0
4
4
00.2
1.8
4
4
0.20.4
1.6
4
4
0.40.8
1.2
4
4
0.81.2
0.8
4
4
1.21.6
0.4
4
4
1.62.0
0.0
4
4
2.0
2.酶反应和酶活性测定
(1)取样称取0.5000g烟叶(剪成0.5-1.0cm的小块),混匀后放入试管,重复2次。
(2)反应向各试管加入KNO3-异丙醇-磷酸缓冲液混合液9ml,其中一管立即加入1.0ml三氯乙酸,混匀(做对照).然后将所有的试管置于30°C下于黑暗处保温30min,分别向各处理管中加1.0ml三氯乙酸,摇匀终止酶活性.
(3)比色将各试管静止2min,吸取上清液2ml加入另一组试管,以对照管做参比,按标准曲线做法进行显色测定,并计算酶活性.
转化酶的测定
转化酶又称蔗糖酶,是一种水解酶,植物体的库组织中,一般含有较高活性的转化酶,它能将植物体内的主要同化产物——蔗糖不可逆的水解为葡萄糖和果糖,为细胞的可溶性糖贮库提供可利用六碳糖,以用于细胞壁、贮藏多糖及果聚糖的生物合成,并通过与呼吸作用偶联的氧化磷酸化产生能量,所以,转化酶与植物组织的生长有密切关系,是衡量同化产物的转化和利用、植物细胞代谢及生长强度的指标。
试剂:
1、10%蔗糖溶液
2、葡萄糖标准液(500μg/ml)
3、0.05mol/l的磷酸缓冲液
4、(DNS)3,5二硝基水杨酸:
将6.3g二硝基水杨酸和262ml2mol/lNaOH溶液,加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中,再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠,搅拌溶解,冷却后加蒸馏水定容至1000ml,贮于棕色瓶中备用。
方法:
1、酶的提取:
1g样品剪碎后,用预冷的蒸馏水在冰浴中研磨成匀浆,定容至100ml,在冰箱中浸提3小时,4000转离心15分钟,上清液即为酶的粗提液。
2、酶活性的测定:
吸酶液2ml,放入试管中,再加入pH6.0的缓冲液5ml及10%蔗糖溶液1ml,在37度水浴中保温30分钟,取出后立即按3,5二硝基水杨酸法测定还原糖的含量。
以煮沸酶液10分钟钝化酶的试管作对照。
3、还原糖标准曲线的制作及还原糖含量的测定
①标准曲线:
取6支20ml刻度试管,编号,按下表配置不同浓度的葡萄糖标准液:
管号123456
葡萄糖原液量(ml)00.40.81.21.62.0
加蒸馏水量(ml)2.01.61.20.80.40
葡萄糖浓度(μg/ml)0100200300400500
在上述各管中分别加入1.5ml3,5二硝基水杨酸试剂,在沸水浴中加热5分钟,取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温,加蒸馏水定容至20ml,混匀,以1号管为空白,测540nm波长下的OD值。
以OD值为纵坐标,葡萄糖浓度为横坐标,绘制标准曲线。
②酶反应液中还原糖的含量的测定:
吸取2ml反应液,加入1.5ml3,5二硝基水杨酸试剂,沸水浴中煮沸5分钟,冷却定容至20ml,测定540nm波长下的OD值,查标准曲线得酶反应液中还原糖的浓度。
4、结果计算:
A=(N-N’)*V/(T*W*1000)
A:
转化酶的活性(mg/gfw/h)N:
酶反应液中还原糖的浓度(μg/ml)
N’:
钝化酶反应液中还原糖的浓度(μg/ml)V:
酶反应液的总体积
T:
反应时间W:
材料鲜重
多酚氧化酶的测定
试剂:
1、0.02mol/l焦儿茶酚溶液:
称0.22克焦儿茶酚溶于100毫升蒸馏水中,现用现配。
2、0.1mol/l碘酸钾:
0.3567克碘酸钾溶于蒸馏水,定容至100毫升。
3、0.005mol/l碘液:
碘化钾2.5克溶于200毫升蒸馏水中,加冰醋酸1毫升,再加0.1mol/l碘酸钾12.5毫升,最后加蒸馏水定容至250毫升。
4、pH6.0磷酸缓冲液:
87.7毫升A+12.3毫升B,用蒸馏水稀释至200毫升。
贮备液A:
0.2mol/l磷酸二氢钠(27.6gNaH2PO4•H2O用蒸馏水配成1000ml)。
贮备液B:
0.2mol/l磷酸氢二钠(53.65gNa2HPO4•7H2O或71.7gNa2HPO4•12H2O用蒸馏水配成1000毫升)
5、其它:
1%淀粉;10%偏磷酸;0.1%抗坏血酸(现用现配)
方法:
1、粗酶提取:
称取新鲜样品2克,剪碎,置于研钵中,加入少量pH6.0磷酸缓冲液和少许石英砂,于冰浴中迅速研磨至匀浆,将全部材料用缓冲液冲洗入50毫升容量瓶中,并定容至刻度。
在18~20度下每隔3分钟摇动1次,共5次,然后再静置15~20分钟,其上清液即为粗酶提取液(可倾入干洁的三角瓶中备用)。
2、活性测定:
取干洁50毫升三角瓶6只(编号),按照下表向各瓶中加入pH6.0磷酸缓冲液、0.1%抗坏血酸、0.02mol/l焦儿茶酚,并向③号瓶及⑥号瓶各加10%偏磷酸。
然后将三角瓶置于18~20度水浴或放在室温下使内外温度达到平衡之后,每隔1分钟向各瓶中依次加入酶液2毫升,全部加完后保温3分钟,再按原顺序仍然间隔1分钟向①、②、④、⑤号各瓶加入偏磷酸1毫升(注意:
加完2号瓶后应间隔2分钟再加4号瓶),用于终止酶的活性。
最后向各瓶中加入1%淀粉溶液3滴作为指示剂,摇匀后用微量滴定管以0.005mol/l碘液滴定,当溶液呈现淡蓝色为止,记录碘液消耗量。
3、结果计算:
A多酚=0.44{[⑥-(④+⑤)/2]-[③-(①+②)/2]}*V1/V2/W/t
V1:
提取时酶液总量(毫升)V2:
测定时酶液用量(毫升)
①、②、③、④、⑤、⑥:
测定时消耗碘液量(毫升)t:
酶反应时间(分)
磷酸缓冲液抗坏血酸焦儿茶酚酶液偏磷酸备注
1422测坏血酸氧化酶
2422同上
34221空白测定
44212测多酚氧化酶
54212同上
642121空白测定
淀粉的测定方法-----------蒽酮法
一.原理
用乙醇将烟叶中可溶性糖浸出并分离出去,而后烟叶中淀粉用适量Hcl,因淀粉在稀酸作用下被水解成葡萄糖,再按葡萄糖测定进行。
根据葡萄糖的含量从而算出淀粉含量。
二.仪器设备
三角瓶-50ml容量瓶-100ml移液管10ml、1ml漏斗圆底烧瓶1000ml离心管和离心机水浴锅温度计烘箱滤纸天平分光光度计
三.试剂
盐酸乙醇氢氧化钠蒽酮
四试剂的配制和标准曲线的绘制
1.葡萄糖标准液的配制称取无水葡萄糖(AR级)0.1g溶于蒸馏水中,定容至100毫升,用前取此液10毫升,再用水稀释至100毫升。
2..标准曲线的绘制取6支干洁刻度试管,依次移入葡萄糖标准液(100μg/ml)0,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00ml后,再从1至4试管依次补加1.0,0.8,0.6,0.4,0.2,0ml蒸馏水后,再分别加入蒽酮试剂5毫升,于沸水中加热10分钟,冷却后在620nm波长处比色,记录OD值,以吸光值为纵坐标,糖含量为横坐标,绘出标准曲线
3.80%乙醇的配制取400毫升乙醇加水定容至500ml
4.1当量的盐酸配制43毫升浓盐酸加水定容至500ml
5.10%氢氧化钠配制10g氢氧化钠溶于100ml水中
6.蒽酮试剂:
1克蒽酮溶于72%的H2SO41000ml(98%的H2SO4+240的蒸馏水),棕色瓶冰箱保存2~3周。
五实验步骤
1.分离出水溶性糖
0.1g样置于离心管中加入8毫升80%乙醇80℃水浴浸提30分钟冷却后离心5分钟残渣再加入8ml80%乙醇。
重复三次
2.水解
残渣用1当量的盐酸15ml洗入50ml三角瓶,摇匀后烘箱105度加热3.5小时,冷却后加10%氢氧化钠6ml中和,蒸馏水定容100ml,过滤
3.测定
取滤液1ml(空白用1ml蒸馏水代替),加入蒽酮试剂5ml,摇匀,于沸水浴中加热10分钟,冷却后在620nm波长处比色
六结果的计算与表述
C=AN*0.9/W
C—样品淀粉含量(μg/g)
W—样品重量(g)
A—标准曲线查得的糖量(μg)
N—样品提取液占样品反应液的倍数
酸解法测定淀粉
方法11.将除去可溶性糖的残渣用80%乙醇洗入50ml三角瓶(3次重复),水浴或100~105度烘箱加热2~3小时,10%NaOH中和至微碱性(1滴甲基红指示剂,变黄),转入100ml容量瓶,慢慢加入5%ZnSO4和0.15mol*l-1Ba(OH)25ml至产生白色沉淀,加水到刻度,混匀过滤,滤液备用。
2.测定:
吸取滤液6ml,加斐林试剂4ml混匀加塞,于沸水浴中加热15分钟,取出后流水冷却,再经1500转离心5分钟,收集上清液,在590nm波长处比色。
3.标准曲线的绘制:
取干洁试管7支,依次加入葡萄糖标准液(100μg/ml)0、1、2、3、4、5、6ml和蒸馏水6、5、4、3、2、1、0ml,加斐林试剂4ml混匀加塞,于沸水浴中加热15分钟,取出后流水冷却,再经1500转离心5分钟,收集上清液,在590nm波长处比色。
斐林试剂:
A液—(CuSO4*5H2O)40克后蒸馏水定容1000ml,B液—酒石酸钾钠(KNaC4O6*4H2O)200克与NaOH150克后蒸馏水定容1000ml;最后将A液B液等体积混匀。
葡萄糖标准液:
80度烘干葡萄糖0.1000克蒸馏水定容100ml,浓度为1mg*ml-1。
滴甲基红指示剂:
0.2克溶于少量酒精后蒸馏水定容100ml
方法2.1.1.将除去可溶性糖的残渣用1当量HCl15ml洗入150ml三角瓶(3次重复),摇匀后100~105度烘箱加热2~3小时,冷却蒸馏水定容100ml过滤加10%NaOH6ml中和
2.测定:
取滤液1ml(空白中用1毫升蒸馏水代替)加入蒽酮试剂5毫升,摇匀,于沸水浴中加热10分钟,冷却后在620nm波长处比色。
1当量HCl:
43mlHCl蒸馏水定容500ml
3、标准曲线的绘制:
取干洁试管6支,依次加入葡萄糖标准液(100μg/ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml和蒸馏水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml,再分别加入蒽酮试剂5毫升,于沸水浴中加热10分钟,冷却后在620nm波长处比色,记录OD值,绘出标准曲线。
4、计算:
C=AN*0.9/W
C—样品总糖含量(μg/g)W—样品重量(g)
A—标准曲线查得的糖量(μg)N—样品提取液占样品反应液的倍数
推荐干重0.5~1克鲜重1~2克或参考参考书
氯化三苯基四氮唑(TTC,桶栽)根系活力
试剂:
1、乙酸乙酯
2、低亚硫酸钠(Na2S2O4,俗称保险粉)
3、1%TTC溶液:
准确称取TTC1.0克,溶于少量蒸馏水中,定容至100毫升
4、0.4%TTC溶液:
准确称取TTC0.4克,溶于少量蒸馏水中,定容至100毫升
5、1/15mol/lpH7.0磷酸缓冲液
6、1mol/l硫酸:
用量筒量取比重1.84的浓硫酸55毫升,边搅拌边加入盛有500毫升的蒸馏水的烧杯中,冷却后稀释至1000毫升
7、0.4mol/l琥珀酸钠:
称取琥珀酸钠(含6个结晶水)10.81克,溶于蒸馏水中,定容至100毫升
方法:
1、TTC标准曲线的制作:
吸取0.25ml0.4%TTC溶液放入10毫升刻度试管中,加少许低亚硫酸钠粉末,摇匀后立即产生红色的TTF,再用乙酸乙酯定容至10毫升,摇匀,然后分别取此液0.25ml、0.5ml、1.00ml、1.5ml、2.0ml置于10毫升刻度试管中,用乙酸乙酯定容至刻度,即得到含TTF25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列,以空白作参比在485nm波长处测定光密度,绘制标准曲线。
2、称取根样品0.5克,放入试管中,(空白先加1mol/l硫酸2毫升再加入根样品),加入0.4%TTC溶液和1/15mol/lpH7.0磷酸缓冲液各5毫升,把根充分浸没在溶液中,在37度下暗处保温1个小时,此后加入1mol/l硫酸2毫升,以终止反应。
3、把根取出,吸干水分后与乙酸乙酯3~4毫升和少量石英砂一起磨碎,以提出TTF。
把红色提出液移入试管,用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二至三次,皆移入试管,最后加乙酸乙酯使总量为10毫升,用分光光度计在485nm下比色,以空白作参比读出光密度,查标准曲线,求出四氮唑还原量。
4、计算:
四氮唑还原强度=四氮唑还原量(μg)/根重(g)/时间(h)
丙二醛的测定(MDA)
试剂:
0.5%硫代巴比妥酸:
称取硫代巴比妥酸0.5g溶于5%三氯乙酸溶液,并用其定容至100毫升。
方法:
1、样品制备:
称叶片0.3g于研钵中,加入少量石英砂和蒸馏水2毫升,研磨成匀浆。
将匀浆转移到试管中,再用蒸馏水3毫升分两次冲洗研钵,合并提取液。
2、显色反应:
在提取液中加入0.5%硫代巴比妥酸5毫升,摇匀,将试管放入沸水浴中煮沸10分钟,(自试管内溶液中出现小气泡时开始计时),到时间立即取出试管并冷却。
3、比色测定:
待试管内溶液冷却后,在3000转离心15分钟,取上清液并量其体积。
以0.5%硫代巴比妥酸为空白测定534nm和600nm处的吸光值。
4、结果计算:
C=(OD534-OD600)*V/0.155d/W
C:
丙二醛含量(μmol/g)d:
比色杯光径
W:
样品重量V:
上清液总体积
0.155:
丙二醛的μmol吸光系数
丙二醛的测定方法
1.取叶0.5000g加少量(2mg)10%的TCA研磨匀浆,转入离心管,并用TCA6mg清洗研钵(TCA共用8mg),然后摇匀,离心10min(3000rpm),取上清液待测.
2.显色反应:
取上清液3ml+TBA3ml(对照管TCA3ml+TBA3ml),分别置于试管中,用塑料膜封口,沸水浴20min显色,冷却.
3.比色:
分别在A532和A600处比色.
4.计算:
MDA(nmd•g-1•FW)=[(A532-A600)*L*V/v]/1.55*10-1*W
=(A532-A600)/W*103.226
式中:
L为反应液总量(ml)
V为提取液总量(ml)
v为测定时提取液用量(ml)
TCA(三氯乙酸):
称25.000g三氯乙酸溶解,定容至250ml.
TBA:
称0.6000g硫代巴比妥酸,用10%的TCA定容至100ml.
游离脯氨酸的测定
1.称取0.5000g剪碎烟叶加入试管,加5ml3%磺基水杨酸,封口,沸水浴10min;过滤后备用。
2.吸取2ml提取液加入试管(对照管用2ml水代替),各加入2ml冰醋酸,4ml茚三酮,摇匀,煮沸30min,冷却比色(OD520)
试剂配制:
1.3%磺基水杨酸:
称3.000g磺基水杨酸溶解,定容至100ml。
2.茚三酮:
称2.50g茚三酮,加60ml冰醋酸和40ml6M磷酸,在热水(70°C)溶解,一般现用现配(24小时)
6M磷酸:
吸取86ml磷酸,定容至250ml.
计算:
脯氨酸(µg•g-1•FW)=(C*V/a)/W*100
=C*250/W
C:
浓度a:
2ml
V:
5mlW:
0.5000g
标准曲线:
称取10mg脯氨酸容于少量乙醇中,用蒸馏水定容至100ml,成10µg•ml-1的母液.
取母液0.0、0.5、1.25、2.5、5.0、7.5、10.0ml分别放入7个25ml容量瓶中,再分别加入蒸馏水定容,配制成0、2.0、5.0、10、20、30、40µg•ml-1的系列溶液。
分别取上述各溶液2ml,加入已编号7个试管中,再分别加入2ml冰醋酸,4ml酸性茚三酮试剂,摇匀后,在沸水浴中加热显色60min,冷却后于520nm处比色.
总酚类和类黄铜含量的测定
取0.5000g新鲜烟叶剪成1-2mm小块后,加5ml含1%HCL的甲醇溶液,提取24小时(4°C),取0.5ml提取液,用蒸馏水稀释至25ml.在280nm、325nm处比色。
类黄铜含量以OD325/g鲜重表示,总酚含量以没食子酸标准曲线加以计算,即:
总酚含量(mg/g)=C*5*50/鲜重(g)
类黄铜含量(OD325/g鲜重)=OD325/鲜重(g)
试剂配制:
1.没食子酸标准曲线
原液(0.05mg/ml):
称取0.00250g没食子酸,定容至500ml。
分取0.5、10、15、20、25ml原液定容至25ml作标准曲线。
2.1%HCL甲醇:
取13.5ml浓HCL+482.5ml甲醇配制成500ml)。
丙酮提取分光光度法测定色素
仪器:
分光光度计、50ml容量瓶、漏斗、滤纸、分析天平、移液管、乳钵
试剂:
80%丙酮(水20+丙酮(GR)80,v/v)
试验步骤:
待测液制备:
样品0.5—2g放入乳钵,加入适量80%丙酮,研磨至残渣变白,静置片刻,过滤于50ml容量瓶中,将残渣与滤纸反复冲洗(至滤纸变白),洗液过滤,定容至刻度
吸光度测定:
色素提取液倒入比色杯,分别于662、644、和440nm下比色,记录OD值
叶绿素a:
Ca(mg/l)=9.784OD662-0.990OD644
叶绿素b:
Cb(mg/l)=21.426OD644-4.650OD663
叶绿素:
Ct(mg/l)=Ca+Cb=5.134OD662+20.436OD644
类胡罗卜素Cc(mg/l)=4.695OD440-0.268(Ca+Cb)
色素含量(mg/l)=浓度(mg/l)*提取液总量(l)/样重(g)
叶绿素的测定方法
[方法]
称取0.1000g剪碎的新鲜的烟叶放入10ml的容量瓶中,用80%的丙酮定容至10ml.放在黑暗处浸提24小时.然后在663nm、646nm处比色。
[计算]
Ca=12.21*D663-2.81*D646
Cb=20.13*D646-5.03*D663
蒽酮比色法测总糖:
实验步骤:
1、可溶性糖的提取:
准确称取烟叶样品0.100克,置于离心管中,加入8毫升80%乙醇,于80℃水浴浸提30分钟,冷却后于4000转离心5分钟,收集上清液,残渣再加入8毫升80%乙醇,再次浸提,重复两次,将三次提取的上清液合并于100毫升容量瓶中并定容至100毫升。
2、总糖的
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