夏桑菊颗粒分析方法确认方案.docx
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夏桑菊颗粒分析方法确认方案
编号:
T/YZK-AF-030-00
技术标准/验证规程
分析方法确认方案
产品名称:
夏桑菊颗粒
验证类型:
确认
部门:
质量部
目录
1.概述
2.确认目的
3.适用范围
4.确认小组成员与职责
5.确认方案的起草与审批
6.确认内容
6.1确认相关文件材料检查
6.2鉴别试验的确认
6.3含量测定的确认
7.偏差处理
8.确认的结果与评价报告
9.再验证周期
10.参考文献
验证方案签字表:
起草人
审核人
批准人
起草时间
审核时间
批准时间
1.概述
夏桑菊颗粒收载于《中国药典》2015年版一部,鉴别
(1)、鉴别
(2)、鉴别(3)、指纹图谱及迷迭香酸含量测定项下的检验方法已改变,为确保方法的准确性和可行性,为日常检测方法提供依据,因此按照2010新版GMP要求,需要进行分析方法确认。
方法验证必须按照验证方案进行,此次验证方案包括:
专属性、精密度、线性、范围、准确度,本确认方案使用薄层色谱法对鉴别检验方法进行确认,再使用高效液相色谱仪对含量测定的检验方法进行确认,证明此方法在本公司实验室的适用性。
1.1确认方式
按《中国药典》2015年版一部修订版及2010年版药品GMP指南质量控制实验室与物料系统分析方法确认要求进行验证。
2.确认目的
建立夏桑菊颗粒鉴别
(1)、鉴别
(2)、鉴别(3)、指纹图谱及迷迭香酸含量测定方法的确认方案,在实验过程中严格按照《中国药典》2015年版一部操作步骤实行,确保试验结果真实可信,以确认夏桑菊颗粒按《中国药典》2015年版一部测定的方法是否适用于本实验室。
3.适用范围
适用于本公司的鉴别
(1)、鉴别
(2)、鉴别(3)、指纹图谱及迷迭香酸含量测定项下的检验方法确认。
4.确认小组成员与职责
部门及职务
姓名
确认工作中职责
QC检验员
执行确认方案;负责验证过程中相关的检验操作,收集整理数据,起草确认报告。
QA监督员
负责确认全过程的监控。
质量保证部
负责确认方案及确认报告的审核;审核确认过程中发生偏差的解决方案,以及采取纠正措施。
QC主任
负责起草确认方案,并组织实施确认工作,及整理确认报告。
质量负责人
负责确认方案、报告的批准及确认过程中的协调工作
5、人员培训情况
序号
1
2
3
4
参与人员
是否已培训
是□否□
是□否□
是□否□
是□否□
培训情况
合格□不合格□
合格□不合格□
合格□不合格□
合格□不合格□
确认人:
年月日
复核人:
年月日
6.确认内容
6.1确认相关文件材料检查
6.1.1对照品和样品:
名称
批号
来源
储存条件
迷迭香酸对照品
蒙花苷对照品
夏枯草对照药材
野菊花对照药材
桑叶对照药材
夏桑菊颗粒
确认人
确认人:
年月日
复核人:
年月日
6.1.2确认前,对与此次确认相关的文件进行检查(见下表)
文件名称
文件编号
是否现行文本
检验方法验证(确认)管理规程
M/ZL-QC038-05
AE240型电子天平标准操作规程
W/SOP-ZL-QC10-023-05
AE240型电子天平维护保养及清洁标准操作规程
W/SOP-ZL-QC11-023-05
高效液相色谱仪标准操作规程
W/SOP-ZL-QC10-022-05
高效液相色谱仪维护保养及清洁标准操作规程
W/SOP-ZL-QC11-022-05
夏桑菊颗粒检验操作规程
W/SOP-ZL-06-C18-02
夏桑菊颗粒质量标准
T/ZLB-06-C18-02
确认
确认人:
年月日
确认人:
年月日
6.1.3试剂:
无水乙醇石油醚(30-60℃)甲醇环己烷乙酸丁酯异丙醇甲酸正己烷三氯化铝乙酸乙酯、均为分析纯。
6.1.4可接受标准:
对照品、试液、试剂与试药符合验证要求且在效期内;所有文件都应为现行版本,且经过批准
6.2.鉴别
(1)的确认:
6.2.1专属性
6.2.1.1取本品10g,研细,加无水乙醇30ml,超声处理30分钟,过滤,滤液蒸干,残渣加无水乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液。
另取夏枯草对照药材0.5g,加水50ml,煎煮30分钟,过滤,滤液用石油醚(30-60℃)振摇提取2次,每次25ml,弃去石油醚液,水层蒸干,残渣加无水乙醇2ml使溶解,作对照药材溶液。
再取迷迭香酸对照品,加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法(通则0502)试验,吸取上述三种溶液各2-4μl分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲酸(15:
3:
3.5:
1)为展开剂,展开,取出,晾干,在紫外光(365nm)下检视。
供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光主斑点;在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
6.2.1.2空白样品的制备:
称取未加夏桑菊稠膏的供试品0.2g,加无水乙醇30ml,充分振摇溶解,作为空白样品溶液。
同上述普通样品的制备的方法进行点板、展开剂显色。
6.2.1.3可接受标准:
普通样品的色谱图中,主成分的斑点与其它干扰物的斑点均应完全分离,互不干扰;空白样品的色谱图中,应无其它干扰物的斑点影响。
结果见下表。
确认内容
标准要求
检测结果
结果评价
专属性
被测物的斑点应得到良好分离
确认
确认人:
年月日
复核人:
年月日
6.2.鉴别
(2)的确认:
6.2.2专属性
6.2.2.1取野菊花对照药材1g,加无水乙醇20ml,超声处理30分钟,过滤,滤液浓缩至2ml,作为对照药材溶液。
另取蒙花苷对照品,加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液,作为对照品溶液。
《照薄层色谱法操作规程试验》,吸取(鉴别1)项下的供试品溶液及上述两种溶液各5ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸丁酯-甲酸-水(5:
3:
3:
)5℃以下放置过夜的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%三氯化铝乙醇溶液,挥干,在紫外光(365nm)下检视。
供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光主斑点;在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
6.2.2.2空白样品的制备:
称取未加夏桑菊稠膏的供试品约0.2g,加无水乙醇30ml,充分振摇溶解,作为空白样品溶液。
同上述普通样品的制备的方法进行点板、展开剂显色。
6.2.2.3可接受标准:
普通样品的色谱图中,主成分的斑点与其它干扰物的斑点均应完全分离,互不干扰;空白样品的色谱图中,应无其它干扰物的斑点影响。
结果见下表。
确认内容
标准要求
检测结果
结果评价
专属性
被测物的斑点应得到良好分离
确认
确认人:
年月日
复核人:
年月日
6.2.鉴别(3)的确认:
6.2.3专属性
6.2.3.1取桑叶对照药材1g,加水100ml,煎煮1小时,滤过,滤液蒸至近干,残渣加无水乙醇10ml,超声处理10分钟,滤过滤液浓缩至2ml,作为对照药材溶液。
《照薄层色谱法操作规程试验》,吸取(鉴别1)项下的供试品溶液及上述两种溶液各2ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(12:
8:
1:
)为展开剂,在相对湿度60%以下展开,取出,晾干,放置30分钟,在紫外光(365nm)下检视。
供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光主斑点。
6.2.3.2空白样品的制备:
称取未加夏桑菊稠膏的供试品约0.2g,加无水乙醇30ml,充分振摇溶解,作为空白样品溶液。
同上述普通样品的制备的方法进行点板、展开剂显色。
6.2.3.3可接受标准:
普通样品的色谱图中,主成分的斑点与其它干扰物的斑点均应完全分离,互不干扰;空白样品的色谱图中,应无其它干扰物的斑点影响。
结果见下表。
确认内容
标准要求
检测结果
结果评价
专属性
被测物的斑点应得到良好分离
确认
确认人:
年月日
复核人:
年月日
6.3.指纹图谱照《高效液相色谱法操作规程》测定。
6.3.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,以1%醋酸溶液为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;流速为每分钟0.9ml;柱温为35℃;检测波长为320nm。
理论板数按迷迭香酸峰计算应不低于20000。
时间(分钟)
流动相A(%)
流动相B(%)
0~508→3392→67
50~5133→867→92
51~60892
6.3.2参照物溶液的配制取绿原酸对照品,迷迭香酸对照品和蒙花苷对照品适量,精密称定,分别加甲醇制成每1ml含绿原酸25ug迷迭香酸15ug和蒙花苷25ug的溶液,即得。
6.3.3测定法分别精密吸取参照物溶液和(含量测定)项下的供试品溶液各10ul,注入液相色谱仪,测定,记录60分钟色谱图,即得。
6.3.4.结果判断:
供试品指纹图谱中,应分别呈现与参照物色谱保留时间相应的色谱峰。
按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算5~60分钟的色谱峰,供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90。
结果见下表
检测项目
标准要求
测试结果
结果评价
备注
指纹图谱的相似度
相似度应大于0.90
附图谱图
确认
确认人:
年月日
复核人:
年月日
6.4含量测定(迷迭香酸)
6.4.1回收率试验
1)色谱条件:
色谱柱:
C18柱;以乙腈:
1%醋酸(19:
:
81)为流动相;检测波长为329nm。
理论板数按迷迭香酸峰计算应不低于5000。
2)对照品溶液的制备:
取迷迭香酸对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含25ul的溶液,即得。
3)供试品溶液的制备:
取同一批已知含量的供试品,研细,共称取6份,每份称取样量为规定
取样量的约50%(约0.62)g,精密称定,置具塞锥形瓶中。
再分别精密加入迷迭香酸对照品约
3.0mg(直接加入),精密加入75%甲醇25ml,超声处理(功率500W,频率40kHz)30分钟,
放冷,再称定重量,用75%甲醇补足减失的重量,摇匀,过滤,取续滤液,即得。
4)测定法:
分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20ul,注入液相色谱仪,测定。
试验结果见下表:
5)可接受标准:
将实测值与理论值比较,计算回收率。
要求:
各浓度下的平均回收率均为98.0%~
102.0%,6个回收率数据的相对标准差(RSD)应≤2.0%。
回收率=
检出率–样品含量
×100%
对照品取样量
迷迭香酸回收率试验结果
编号
取样量(g)
样品含量(mg)
对照品加入量(mg)
检出率(mg)
回收率(%)
平均回收率(%)
RSD(%)
1
2
3
4
5
6
结果评价
确认
确认人:
年月日
复核人:
年月日
6.4.2.重复性
1)供试品的制备:
取100%处方量的供试品取约1.25g,精密称定,置具塞锥形瓶中。
精密加入75%甲醇25ml,超声处理(功率500W,频率40kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用75%甲醇补足减失的重量,摇匀,过滤,取续滤液,即得。
2)测定法:
吸取供试品溶液10ul,注入液相色谱仪,按上述色谱条件中连续进样6次,测定其峰面积,计算其相对标准偏差。
试验结果见下表。
3)可接受标准:
采用6次的测定结果进行评价,其相对标准偏差应不大于2.0%.
序号
主份名
峰面积
平均值
RSD%
1
2
3
4
5
6
迷迭香酸
综合评价
确认
确认人:
年月日
复核人:
年月日
6.4.3.稳定性试验精密吸取同一供试品溶液,分别于0、1、3、7、13小时进样,按上述色谱条件测定。
结果见下表附图:
放置时间
迷迭香酸对照品
平均峰面积
RSD(%)
0小时
1小时
3小时
7小时
13小时
结果评价
确认
确认人:
年月日
复核人:
年月日
6.4.4专属性
1)普通样品的制备:
取重复性项下处理得的样品作为的供试品溶液。
2)空白样品的制备:
称取未加迷迭香酸的供试品约1g,按上述供试品的制备方法进行处理样品。
3)测定法:
按上述色谱条件进行测定,吸取普通样品和空白样品各20ul,各进样1次,注入液相色谱仪中,进行测定。
试验结果见下表。
4)可接受标准:
色谱图中,各主份应分离良好,空白样品无干扰。
检测项目
标准要求
测试结果
结果评价
备注
专属性
色谱峰应分离良好,无干扰
附图谱图
确认
确认人:
年月日
复核人:
年月日
6.4.5线性关系考察分别精密量取迷迭香酸对照品mg/ml甲醇溶液(1、2、3、4、5、6mL),分别加入75%甲醇制备成浓度为、、、、、ug/mL的对照品溶液。
各精密吸取10uL注入液相色谱仪,记录色谱图,测定峰面积。
以迷迭香酸对照品的浓度(ug/mL)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。
可接受标准:
相关系数R应大于0.999。
结果见下表附标准曲线表。
浓度(ug/mL)C
峰面积A
回归方程为A
相关系数R
结果评价
确认
确认人:
年月日
复核人:
年月日
7.偏差处理
确认过程中应严格按照本确认方案执行,出现个别项目不符合标准结果时,应按偏差管理规程进行处理,有异常事项未解决时,不得进行下一步的工作。
8.确认的结果与评价报告
由质量保证部和检验室主任对分析方法确认的结果进行审核,检查所有测试项目已经完成;变更和偏差都已经得到解决和批准;每个项目均应符合它们的确认可接受标准;确认记录完整。
由检验室填写确认报告,由确认组长在报告中签署评审结论,提交确认总负责人进行批准。
9、再验证周期
(1)生产工艺发生改变。
(2)检查方法发生改变
10、参考文献
10.1《药品GMP指南》2010年版
10.2《中国药典》2015年版一部
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- 关 键 词:
- 夏桑菊 颗粒 分析 方法 确认 方案