大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定.docx
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大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定
实验一大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定
实验编号:
1
日期:
学时数:
6学时
地点:
任课教师:
实验目的:
掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法
实验原理:
大黄中有多种游离蒽醌及其苷类,总含量约2-5%。
主要有大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚以及它们的葡萄糖苷等。
从大黄中提取分离游离蒽醌时,先用20%硫酸加热使苷类水解,保留滤饼,滤饼用乙醚加热回流提取总蒽醌苷元(游离蒽醌),提取液作TLC鉴识。
实验对象:
大黄
主要仪器、试剂:
电热套、烧杯、20%硫酸、薄层硅胶G、0.5%CMC-Na。
实验操作步骤:
酸水解:
取大黄10g,粉碎,加20%硫酸水溶液100ml,水浴上加热3-4小时,抽滤,滤饼水洗后自然干燥。
铺薄层硅胶G板:
薄层硅胶G:
0.5%CMC-Na(1:
3)
实验注意事项:
加热温度不要太高。
溶液保持微沸,防止药渣炭化。
不断搅拌。
后记:
实验一大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定
实验编号:
2
日期:
学时数:
6学时
地点:
任课教师:
实验目的:
1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。
2.掌握蒽醌类的色谱鉴别方法。
实验原理:
大黄中有多种游离蒽醌及其苷类,总含量约2-5%。
主要有大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚以及它们的葡萄糖苷等。
从大黄中提取分离游离蒽醌时,先用20%硫酸加热使苷类水解,保留滤饼,滤饼用乙醚加热回流提取总蒽醌苷元(游离蒽醌),提取液作TLC鉴识。
实验对象:
大黄滤饼
主要仪器、试剂:
电热套、圆底烧瓶、冷凝管、乙醚、硅胶薄层板、石油醚、乙酸乙酯
实验操作步骤:
总羟基蒽醌苷元的提取:
取干燥滤饼,放入100ml圆底烧瓶中,加入乙醚50ml,回流提取3-4小时,得乙醚提取液。
乙醚提取液经薄层层析检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚。
薄层板为硅胶G-CMC-Na,展开剂为石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯(7:
3),直立展开。
实验注意事项:
加热回流时电热套电压小于50v。
取石油醚(60-90℃)7ml,乙酸乙酯3ml,混合均匀。
。
控制点样量,注意点样斑点位置。
仔细观察斑点、溶剂前沿移动距离。
后记:
结论:
在可见光下可看到4个斑点,Rf最大的黄色斑点为大黄酚和大黄素甲醚的混合物,其余3个斑点依Rf由大到小分别为大黄素(橙色斑点),芦荟大黄素(黄色斑点),大黄酸(黄色斑点
实验二芦丁的提取及鉴定
实验编号:
1
日期:
学时数:
8学时
地点:
新校区F楼6楼天然药物化学实验室
任课教师:
实验目的:
学习和掌握用碱提取—酸沉淀提取黄酮苷的原理和方法。
实验原理:
槐米中有黄酮苷—芸香苷(芦丁),芸香苷(芦丁)是由槲皮素与芸香糖连接而成的二糖苷,能溶于热水。
本试验采用碱提取—酸沉淀提取芸香苷。
实验对象:
槐米
主要仪器、试剂:
电热套、烧杯、石灰水、PH试纸、抽滤瓶。
实验操作步骤:
1.提取:
槐花米—粉碎—碱水提取—加酸沉淀-—放置—粗品芦丁—精制—芦丁(纯品)。
2.粉碎:
称槐米40克,粉碎。
3.碱提:
在1000ml烧杯中加入500ml蒸馏水,加热煮沸后,将槐米粗粉投入,继续直火煮沸2-3分钟,在搅拌下,加入石灰乳,调PH8-9,加热保持微沸30分钟,趁热过滤收集,滤渣加160ml蒸馏水,加入石灰乳,调PH8-9,同上操作再提一次,滤液合并,滤渣弃去。
4.酸沉:
将滤液在60-70℃,小心加浓HCL,调PH3-4,放6小时以上,析出沉淀。
实验注意事项:
①碱提时加入石灰乳调PH8-9,不要太高。
②溶液保持微沸。
③酸化时将滤液在60-70℃,小心加浓HCL,调PH3-4,不要太低。
后记:
实验二芦丁的提取及鉴定(精制)
实验编号:
2
日期:
学时数:
8学时
地点:
新校区F楼6楼天然药物化学实验室
任课教师:
实验目的:
粗品芦丁的精制
实验原理:
粗品芦丁能溶于热水,去除不溶性杂质,最后用甲醇重结晶。
实验对象:
粗品芦丁
主要仪器、试剂:
电热套、圆底烧瓶、冷凝管、甲醇
实验操作步骤:
精制:
粗品芦丁放在1000ml烧杯中,加500ml蒸馏水,加热煮沸,至全部溶解,趁热抽滤,滤液放冷,即析出黄色沉淀,待沉淀完全后,抽滤,收集沉淀,干燥。
用甲醇重结晶,得精品芦丁。
实验注意事项:
(1)用甲醇重结晶时加热回流时电热套电压小于50v。
(2)粗品芦丁全部溶解,趁热抽滤。
(3)重结晶时甲醇的用量应适当,用量过多,则结晶不易析出;用量过少,又会带入较多的杂质。
后记:
实验二芦丁的提取及鉴定
实验编号:
3
日期:
学时数:
8学时
地点:
新校区F楼6楼天然药物化学实验室
任课教师:
实验目的:
(1)芦丁的水解,鉴定;
(2)掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷、苷元和糖的鉴定方法。
实验原理:
,
实验对象:
精品芦丁
主要仪器、试剂:
电热套、圆底烧瓶、冷凝管、甲醇、正丁醇、醋酸、葡萄糖、鼠李糖、盐酸、镁粉、醋酸镁、醋酸铅、氧氯化锆、三氯化铝
实验操作步骤:
1.水解:
取1克芦丁加1%H2SO4100ml与烧杯中,加热微沸,30分钟,开始为澄清,逐渐析出黄色针状结晶,待沉淀完全后,抽滤,收集沉淀,水解母液留作糖的纸层析鉴定。
2.芦丁、槲皮素的鉴定:
(1)糖的检出——圆形滤纸层析
取水解芦丁的滤液20ml,加Ba(OH)2细粉中和至pH7,滤除生成的BaSO4白色沉淀,滤液在水浴上小心浓缩近干(约1ml)注意防止炭化,加甲醇5ml,作为检识糖的样品溶液。
展开剂:
正丁醇-醋酸-水(4-1-5上层)。
对照品:
葡萄糖、鼠李糖(各2mg,分别溶于2ml甲醇中)
展开方式:
径向展开
显色剂:
苯胺邻苯二甲酸盐试剂(或,邻苯甲酸苯胺),喷雾后,105℃加热3~5分钟,有糖处显棕色或棕红色斑点。
(2)化学方法鉴别黄酮类成分
a.盐酸-镁粉反应
b.醋酸镁反应
c.醋酸铅沉淀反应
d.氧氯化锆
e.点滴反应
实验注意事项:
①糖的检出——圆形滤纸层析点样量不要太多。
后记:
实验三氧化苦参碱的提取分离与纯制
实验编号:
1
实验日期:
实验地点:
任课教师:
学时数:
2+8
实验目的:
掌握渗漉法和离子交换法提取生物碱的方法和原理
实验原理:
1.生物碱溶于酸水
2.阳离子交换树脂提取、分离生物碱
实验对象:
苦参
主要仪器、试剂:
渗漉筒、烧杯、玻璃棒
阳离子交换树脂柱、阳离子交换树脂、pH试纸、培养皿
0.5%盐酸、碘化铋钾、蒸馏水
主要操作步骤:
总碱的提取:
(1)酸水提取:
称取250g风干粉碎的苦参中加入适量0.5%的盐酸液,使其浸没药料,充分湿润,放置一小时。
将如上酸水浸泡好的药材及溶液装入渗漉筒,待全部加完,继续补充加入0.5%的盐酸液,浸过药面,放置过夜(此步骤在实验前一天提前完成)。
继续加入0.5%的盐酸液或蒸馏水,(当渗漉液的酸性过大,改加蒸馏水渗漉,将渗漉液的pH控制在3-4之间)以1mL/min的流速进行渗漉,收集渗漉液约3750Ml,到渗漉液生物碱反应微弱为止。
(2)交换:
将上述渗漉液pH控制在3-4之间,上柱交换,流速自快至慢,流出液要经常以碘化铋钾检查,如发现有未被交换的生物碱流下时,可调整流速继续进行交换,待渗漉液全部通过树脂后,把树脂倒入烧杯中,用蒸馏水洗涤数次,除去非阳离子杂质,然后滤干,放入大培养皿中自然干燥。
实验注意事项:
装渗漉筒时,药材应压实,尽赶空气,渗漉筒切勿走干。
当渗漉液的酸性过大,改加蒸馏水渗漉,将渗漉液的pH控制在3-4之间。
如发现有未被交换的生物碱流下时,可调整流速继续进行交换。
离子交换树脂柱切勿走干。
后记:
(教学体会、学生对教学内容的反应等)
实验二氧化苦参碱的提取分离与纯制
实验编号:
2
实验日期:
学时数:
8
实验地点:
任课教师:
实验目的:
学习索氏提取器的使用方法
实验原理:
1.生物碱碱化后,溶于氯仿
2.索氏提取器氯仿连续提取将生物碱从阳离子交换树脂上洗脱下来
实验对象:
交换了生物碱的阳离子交换树脂
主要仪器、试剂:
索氏提取器、烧杯、水浴锅
阳离子交换树脂、圆底烧瓶、冷凝管、漏斗、滤纸
浓氨水、氯仿、丙酮
主要操作步骤:
总碱的提取:
(1)总碱洗脱:
将晾干后的树脂放入烧杯中,加浓氨水20mL,充分搅匀,使湿润度合适,(树脂充分膨胀,但又无不吸收的过剩水份溢出)盖好,静置20分钟后,装入索氏提取器中,用300mL氯仿在水浴上回流洗脱,至提尽生物碱为止。
回收氯仿,尽力抽干。
残剩物用2-3倍量丙酮溶解,尽快出现结晶,放置一定时间,过滤,得氧化苦参碱粗晶,(实际是总碱)用丙酮重结晶一次,得精品。
实验注意事项:
加浓氨水20mL,充分搅匀,使湿润度合适,使树脂充分膨胀,但又无不吸收的过剩水份溢出。
索氏提取器使用时要小心,易碎裂。
后记:
(教学体会、学生对教学内容的反应等)
实验二氧化苦参碱的提取分离与纯制
实验编号:
3
实验日期:
学时数:
8
实验地点:
任课教师:
实验目的:
学习使用Al2O3薄层、柱层析法分离鉴定生物碱的方法
实验原理:
生物碱可以采用Al2O3薄层、柱层析法分离
实验对象:
总碱粗品,Al2O3薄层,Al2O3柱层析
主要仪器、试剂:
层析柱、棉花、点滴板、试管、玻璃板、毛细管、
Al2O3、碘化铋钾、圆底烧瓶、冷凝管、漏斗、滤纸
甲醇、氯仿、丙酮
主要操作步骤:
氧化苦参碱的分离与纯制:
取一根洗净干燥的1:
45的层离柱,在下端塞一点棉花,倒入一些氯仿,使棉花湿润,并放出氯仿液,以赶尽气泡后,缓缓加入30g氧化铝,以氯仿作媒介湿法装柱,最后加入拌有200mg氧化苦参碱精品,薄层检查两个点的少量氧化铝,再放入一点棉花,先用30mL氯仿,后用氯仿:
甲醇(99:
1)的混合溶剂洗脱,流速控制1mL/min,流分每10mL收集一份,收集中要经常以点滴板做生物碱显色反应的检查,薄层检识后,相同流分合并,回收溶剂至干,得氧化苦参碱部分用少量丙酮溶解,放置析晶,所得纯品为氧化苦参碱,测mp,并进行薄层检识。
苦参生物碱的薄层层析:
样品:
氧化苦参碱标准品,粗品,柱层析中任一流份
展开剂:
氯仿:
甲醇19:
1或19.5:
0.5
显色剂:
改良碘化铋钾
实验注意事项:
湿法装柱要尽量赶尽气泡
氯仿:
甲醇(99:
1)的混合溶剂洗脱,流速控制1mL/min,不能过快。
流分每10mL收集一份,薄层检识后,相同流分再合并。
后记:
(教学体会、学生对教学内容的反应等)
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- 关 键 词:
- 大黄 游离 提取 分离 鉴定