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附录二常用的培养基及试剂
附录二常用的培养基及试剂
1、糖发酵管
成分:
牛肉膏5g磷酸氢二钠2g
蛋白胨10g0.2溴麝香草本分蓝深液12ml
氯化钠3g蒸馏水1000ml
pH7。
4
制法:
(1)葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分装有一个倒置小管的小试管内,高压灭菌121℃15min。
(2)其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶100ml,高压灭菌121℃15min。
另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌。
将糖溶液5ml加入100ml培养基内以无菌操作分装小试管。
试验方法:
从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于36±1℃培养,一观观察2-3天,迟缓反应应需观察14-30天。
附注:
蔗粮不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌。
2、ONPG增减基
成分:
邻基粉β-D-半乳糖苷(ONPG)60mg
(O-Nitropheny1-β-D-galactopyranoside)
0.01%MpH7.5磷酸钠缓冲液10ml
1%蛋白胨(pH7.5)30ml
制法:
将ONPG溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以滤过法除菌,分装10×75mm试管,每管0.5ml,用橡皮塞塞紧。
试验方法:
自琼脂斜面上挑取培养物,满环接种,于36±1℃培养1-3h和24h观察结果。
如有β-半乳糖苷酶产生则于1-3h变黄色,如无此酶则24h不变色。
3、缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)
成分:
磷酸氢二钾5g葡萄糖5g
多胨7g蒸馏水1000ml
制法:
溶化后校正pH,分装试管每管1ml,高压灭菌121℃15min。
甲基红(MR)试验:
自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,放36±1℃培养2-5天,哈夫尼亚菌则应在22-25℃培养。
滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果。
鲜红色为阳性,黄色为阴性。
甲基红试剂配法:
甲基工10mg溶于30ml95%酒精中,然后加入20ml蒸馏水。
V-P试验:
用琼脂培养物接种本培养基中,放36±1℃培养2-4天。
哈夫尼亚菌则应在22-25℃培养。
加入6%。
A萘酒精溶液0.5ml和40%氢氧化钾溶液0.2ml,充分振摇试管,观察结果。
阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在36±1℃4h再进行观察。
4、西蒙氏柠檬酸盐培养基
成分:
氯化钠5G柠檬酸钠5g
硫酸镁(MgS047H20)0.2g琼脂20g
磷酸二氢铵1g蒸馏水1000ml
磷酸氢二钾1g0.2%溴麝香草本分蓝溶液40ml
pH6.8
制法:
先将盐类溶解于内,校正pH再加琼脂,加热溶化然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,高压灭菌121℃15min,放成斜面。
试验方法:
挑取少量琼脂增物接种,于36±1℃培养4天,每天观察结果。
阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿色转为蓝色。
5、丙二酸钠培养基
成分:
酵母浸膏1g氯化钠2g
磷酸氢二钾0.6g0.2%溴麝香草酚蓝溶液12ml
磷酸二氢钾0.4g蒸馏水1000ml
pH6.8
制法:
先将酵母浸膏和盐类溶解于水,分装每瓶100ml分别加入各种氨基酸。
赖氨酸和鸟氨酸按0.5%加入,dl-氨基酸按1%加入。
再行校正pH至6.8。
对照培养基不加氨基酸。
分装于灭菌的小式管内管每0.5ml,上面滴加一层液体石蜡,高压灭菌115℃10min。
试验方法:
从琼脂斜面上挑取培养物接种,于36±℃18-24h,观察结果。
氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色。
阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使增基变为黄色。
对照管应为黄色。
9、蛋白胨水(靛基质试验用)
成分:
蛋白胨(或胰蛋白胨)20g蒸馏水1000ml
氯化钠5g
pH7.4
制法:
按上述成分配制,分装小试管,高温灭菌121℃±15min。
靛基质试剂:
(1)柯凡克试剂将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75ml戊醇中然后缓慢加入浓盐酸25ml。
(2)殴-波试剂将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95%酒精95ml,然后缓慢加入浓盐酸25ml。
试验方法:
挑取小量培养物接种,在36±1℃培养1-2天,必要时可培养4-5天。
加入柯凡克试剂0.5ml,轻摇试管,阳性者于试剂层呈红色。
或加入殴-波试剂约0.5ml,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。
附注:
蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。
每批蛋白胨买来后,应先用已知菌咱鉴定后方可使用。
10、尿素琼脂
成分:
蛋白胨1g0.4%本分红溶液3ml
氯化钠5g琼脂20g
葡萄糖1g蒸馏水1000ml
磷酸二氢钾2g20%尿素溶液(后加)100ml
pH7.2±0.1
制法:
先将尿素和琼脂以外的成分配好,并校正pH,加入琼脂,加热溶化并分装烧瓶,高压灭菌121℃±15min。
冷至50-55℃,加入经除菌过滤的尿素溶液,尿素的最终浓度为2%,最后pH应为7.2±0.1。
分装于灭菌试管内,放成斜面备用。
试验方法:
挑取琼脂培养物接种,在36±1℃培养24h观察结果。
尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。
11、氰化钾培养基
成分:
蛋白胨10g磷酸氢二钠5.64g
氰化钠5g蒸馏水1000ml
磷酸二氢钾0.225g0.5%氰化钾溶液(后加)20ml
制法:
将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,高压灭菌121±1℃15min,放在冰箱内使其充分冷却。
每100ml培养基加入0.5%氰化钾20ml(最后浓度为1:
10000),分装于12×100mm灭菌试管,每管约4ml,立刻用灭菌橡皮塞塞紧。
放在4℃冰箱内,至少可保存两个月。
同时,将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用。
试验方法:
将琼脂培养物种于蛋白胨水内成为稀释菌液,挑取1环接种于KCN培养基,并另挑取1环接种于对照培养基。
在36±1℃培养1-2天,观察结果。
如有细菌生长即为阳性(不抑制),经2天细菌不生长为阴性(抑制)。
附注:
氰化钾是剧毒物,使用时应小心,切勿沾染,以免中毒。
夏天分装培养基应在冰箱内进行。
试验失败主要原因是超过计划口不平,氰化钾逐渐分解产生氢氰酸气体逸出,以致药物浓度降低,细菌生长,因而造成假阳性反应。
试验时对每一环节都要特别注意。
12、氧化酶试验
试剂:
(1)1%盐酸二甲基对苯二胺溶液,少量新鲜配制,于冰箱内避光保存。
试验方法:
(1)取白色洁净滤纸沾取菌落。
加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈粉红色,并逐渐加深。
(2)以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显色反应与以上相同。
13、明胶磷酸盐缓液
成分:
明胶2g蒸馏水1000ml
磷酸氢二钠4g
pH6.2
制法:
加热溶解,校正pH,高压灭菌121±1℃15min。
14、乳酸苯酚溶液
成分:
苯酚10g甘油2g
乳酸(比重1.21)10g蒸馏水1000ml
制法:
将酚在水上加热溶解,然后加入乳酸及甘油
用途:
检验真菌形态。
15、肉浸液肉汤
成分:
绞碎牛肉500g磷酸氢二钾2g
氯化钠5g蒸馏水1000ml
蛋白胨10g
制法:
将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g,加蒸馏水100ml,混合后放冰箱过液,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒纸过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量,加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐,溶解后校正pH7.4-7.6煮沸并过滤,分装烧瓶,高压灭菌121±1℃15min。
16、血琼脂
成分:
豆粉琼脂pH7.4-7.6100ml
脱绺维羊血(或免血)5-10ml
制法:
加热溶化琼脂,冷却50℃,以无菌手续加入脱纤维羊血,摇匀、倾注平板。
变可分装灭菌试管,置成斜面。
变可用其他营养丰富的基础培养基配制血液琼脂。
17、营养琼脂
成分:
蛋白胨10g琼脂15-20g
牛肉膏3g蒸馏水1000ml
氯化钠5g
制法:
将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内。
加入15%氢氧化钠溶液约2ml,校正pH至7.2-7.4。
加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化。
分装烧瓶,高压灭菌121±1℃15min。
附注:
此培养基可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面,如用于菌数计数,琼脂量为1.5%,如作成平板或斜面,则应为2%。
18、营养牛肉汤
成分:
蛋白胨10g氯化钠5g
牛肉膏3g蒸馏水1000ml
pH7.4
制法:
按上述成分配合,溶解后校正pH、分装烧瓶,每瓶225ml高压灭菌121±1℃15min。
19、乳糖胆盐发酵管
成分:
蛋白胨20g0.04%溴甲酚紫水溶液25ml
猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g蒸馏水1000ml
乳糖10g
pH7.4
制法:
将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10ml,并放入一个小试管,高压灭菌121±1℃15min。
附注:
双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。
20、乳粮发酵管
成分:
蛋白胨20g0.04%溴甲酚紫水溶液25ml
乳糖10g蒸馏水1000ml
pH7.4
制法:
将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,按检验要求分装30ml、10ml或3ml,并放入一个小试管,高压灭菌121±1℃15min。
附注:
(1)双料乳糖发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。
(2)30ml和10ml乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用,3ml乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。
21、缓冲蛋白胨水(BP)
成分:
蛋白胨10g磷酸二氢钠1.5g
氯化钠5G蒸馏水1000ml
磷酸氢二钠(含12H2O)9g
pH7.2
制法:
配好后以大烧瓶装,高压灭菌121±1℃15min。
临用时以无菌操作分装,每瓶225ml。
附注:
本培养基供沙门氏菌前增菌用。
22、氯化镁孔雀绿增菌液(MM)
甲液:
胰蛋白胨5g磷酸二氢钾1.6g
氯化钠8g蒸馏水1000ml
乙液:
氯化镁(CP)40g蒸馏水100ml
丙液:
0.4%孔雀绿水溶液
制法:
分别按上述成分配好后,高压灭菌121±1℃15min备用。
临用时取甲液90ml,乙液9ml,丙液0.9ml,以无菌操作混合即可。
附注:
本培养基变称Rappaport(R)增菌液。
23、四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)
基础培养基:
多胨或月胨5g硫代硫酸钠30g
胆盐1g蒸馏水1000ml
碳酸钙10g
碘溶液:
碘6g蒸馏水20ml
碘化钾5g
制法:
将基础培养基的各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶100ml。
分装时应随时振摇,使其中的碳酸钙混匀,高压灭菌121±1℃15min备用。
临用时每100ml基础培养基中加入碘溶液2ml,0.1%煌绿溶液1ml。
24、亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)
成分:
蛋白胨5g磷酸二氢钾4.5g
乳糖4gL-胱氨酸0.01g
亚硒酸氢钠4g蒸馏水1000ml
磷酸氢二钠5.5g
制法:
将除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900ml蒸馏水中,加热煮沸,俊冷备用。
另将亚硒酸氢钠溶解于100mml蒸馏水,加热煮沸,俟冷,以无菌操作与上液混合。
再加入1%L-胱氨酸氢氧化钠溶液1.0ml,分装灭菌瓶中,每瓶100ml,pH应为7.0±0.1,1%L-胱氨酸氢氧化钠溶液。
配称:
称取L-胱氨酸0.1g或DL-胱氨酸0.2g,加1NNaOH1.5ml,使溶解再加入蒸馏水8.5ml即成。
25、GN增菌液
成分:
胰蛋白胨20g甘露醇2g
葡萄糖1g柠檬酸钠5g
去氧胆酸钠0.5g氯化钠5g
磷酸氢二钾4g蒸馏水1000ml
pH7.0
制法:
按上述成分配好,加热使溶解,校正pH,分装每瓶225ml,高压灭菌115℃15min。
26、肠道菌增菌肉汤
成分:
蛋白胨10g磷酸二氢钾2g
葡萄糖5g煌绿0.015g
牛胆盐20g蒸馋水1000ml
磷酸氢二钾8g
pH7.2
制法:
按上述成分配好,加热使溶解,校正pH,分装每瓶30ml,高压115℃15min。
27、亚硫酸饿琼脂(BS)
成分:
蛋白胨10g煌绿0.025g
牛肉膏5g柠檬酸饿铵2g
葡萄糖5g亚硫酸钠6g
硫酸亚铁0.3g琼脂18-20g
磷酸氢二钠4g蒸馋水1000ml
pH7.5
制法:
(1)将前面5分钟成分分别溶解于300ml蒸馏水中。
(2)将柠檬酸饿铵和亚硫酸钠另用50ml蒸馏水溶解。
(3)将琼脂于600ml蒸馏水煮沸溶解,冷至80℃。
(4)将以上三液合并,补充蒸馏水至1000ml,校正pH,加0.5%煌绿水深液5ml,摇匀,冷至50-55℃,倾注平皿。
附注:
此培养不需高压灭菌。
制备过程不宜过分加热,以免降低其选择性,应在临用前一天制备,贮存于室温暗处,超过48h不宜使用。
28、DHL琼脂(deoxycholatehydrogensulfidelactoseagar)
成分:
蛋白胨20g硫代硫酸钠2.3g
牛肉膏3g柠檬酸钠1g
乳糖10g中性红0.03g
庶糖10g琼脂18-20g
去氧胆酸钠1g蒸馏水1000ml
pH7.3
制法:
将除中性红和琼脂以外的成分溶解于400ml蒸馏水中,校正pH。
再将琼脂于60ml蒸馏水煮沸溶解。
两液合并加入0.5%中性红水溶液6ml,待冷至50-55℃,倾注平板。
29、HE琼脂(hektoenentericagar)
成分:
牛肉膏3g柠檬酸钠18-20g
乳糖12g中性红1000ml
庶糖12g0.4%溴麝香香草酚蓝溶液16ml
水杨酸2gAndrad指示剂20ml
胆盐20g甲液20ml
氯化钠5g乙液
pH7.5
制法:
将前面七种成分分溶解于400ml蒸馏水内作为基础液将琼脂加入于600ml蒸馏水内,加热溶解。
加入甲液和乙液于基础液内,校正pH,再加入指未剂,并与琼脂液合并,待冷至50-55℃,倾注平板。
附注:
(1)此培养基不可高压灭菌。
(2)甲液的制备:
硫代硫酸钠34g蒸馏水100ml
柠檬酸铁铵4g
(3)乙液的配制:
去氧胆酸钠10g蒸馏水100ml
(4)Andrade指示剂
酸性复红0.5g蒸馏水100ml
1L氢氧化钠溶液16ml
将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液,数小时后如复红退色不全,再加氢氧化钠溶液1-25ml。
30、SS琼脂
基础培养基
牛肉膏5g琼脂19g
月示胨5g蒸馏水1000ml
三号胆盐3.5g
将牛肉膏、月示胨和胆盐溶解于400ml蒸馏水中,将琼脂加入于600ml蒸馏水中,煮沸使其溶解,再将二液混合,高压灭菌121±1℃15min保存备用。
完全培养基
基础培养基1000ml10%柠檬酸铁溶液10ml
乳糖10g1%中性红溶液2.5ml
柠檬酸铁溶液8.5g0.1%煌绿溶液0.33ml
硫代硫酸钠8.5g
加热溶化基础增基,按比例加入上述染料以外之各成分,充分混合均匀,校正pH至7.0,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板。
附注:
(1)制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱内于48小时内使用。
(2)煌绿溶液配好后应在10天内使用。
(3)可以购用SS琼脂的干燥培养基。
31、麦康凯琼脂
成分:
蛋白胨17g蒸馏水1000ml
月示胨3g乳糖10g
猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g0.01%结晶紫水溶液10ml
氯化钠5G0.5%中性红水溶液5ml
琼脂17g
制法:
(1)将蛋白胨、月示胨、胆盐和氯化钠溶解于400ml蒸馏水中,校正pH至7.2,将琼脂加入于600ml蒸馏水中,加热溶解。
将两液合并,分装于烧瓶内,高压灭菌121±1℃15min备用。
(2)临用时加热溶化琼脂,趁热加入乳糖。
冷至50-55℃时,加入结晶紫和中性红水溶液,摇匀后倾注平板。
附注:
结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。
32、伊红美蓝琼脂(EMB)
成分:
蛋白胨10g2%伊红Y溶液20ml
乳糖10g0.65%美蓝溶液10ml
磷酸氢二钾2g蒸馏水1000ml
琼脂17g
pH7.1
制法:
将蛋白、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正pH,分装于烧瓶内,高压灭菌121±1℃15min备用。
临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷至50-55℃。
加入伊红和美蓝溶液,摇匀倾注平板。
33、三糖铁琼脂(TSI)
成分:
蛋白胨20g硫酸亚铁6H2O0.02g
牛肉膏5g硫代硫酸钠0.02g
乳糖10g琼脂12g
蔗糖10g酚红0.025g
葡萄糖1g蒸馏水1000ml
氯化钠5g
pH7.4
制法:
将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH。
加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。
加入0.2%酚红溶液12.5ml,摇匀。
分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层。
高压灭菌121±1℃15min,放置高层斜面备用。
34、三糖铁铁脂(换用方法)
蛋白胨15g氯化钠5g
月示胨5g硫酸亚铁0.2g
牛肉膏3g硫代硫酸钠0.3g
酵母膏3g琼脂12g
乳糖10g酚红0.025g
蔗糖10g蒸馏水1000ml
葡萄糖1g
pH7.4
制法:
将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH。
加入琼脂,加热煮沸,以凉脂琼脂。
加入0.2%酚红水溶液12.5ml,摇匀。
分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层。
高压灭菌121±1℃15min放置高层斜面备用。
35、克氏双糖铁琼脂(KI)
上层培养基:
血消化汤pH7.6500ml硫酸亚铁铵0.1g
琼脂6.5g乳糖5g
硫代硫酸钠0.1g0.2%酚红溶液5ml
下层培养基:
血消化汤pH7.6500ml葡萄糖1g
琼脂2g0.2%酚红溶液5ml
制法:
(1)取血消化汤按上层和下层的琼脂用量,分别加入琼脂,加热溶解。
(2)分别加入其他各种成分。
将上层培养基分装于烧瓶内,将下层培养基分装于灭菌12×100m试管内每管约2ml,高压灭菌11410min。
(3)将上层增基放在56℃水浴箱内保温,将下层培养基直立放在室温内,使其凝固。
(4)俟下层培养基凝固后,以无菌手续将上层培养基分装于下层培养基的上面,每管约1.5ml,放成斜面。
36、克氏双糖铁琼脂(换用方法)
成分:
蛋白胨20g葡萄糖1g
牛肉膏3g氯化钠5g
酵母膏3g柠檬酸铁铵0.5g
乳糖10g硫代硫酸钠0.5g
琼脂12g蒸馏水1000ml
酚红0.025g
pH7.4
制法:
将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH,加入琼脂,加热煮沸以溶化琼脂,加入0.2%酚红水溶液12.5ml,摇匀、分装试管、装量宜多些,以便得到比较高的底层,高压灭菌121±1℃15min,放置高层斜面备用。
37、半固体琼脂
成分:
蛋白胨1g琼脂0.35-0.4
牛肉膏0.3g蒸馏水1000ml
氯化钠0.5g
pH7.4
制法:
照以上成分配好,煮沸使溶解,并校正pH。
分装小试管,高压灭菌1211℃15min。
直立凝固备用。
附注:
供动力观察、菌种保存、H抗原位相变异试验等用。
38、Elek氏培养基(毒素测定用)
成分:
月示胨20g琼脂15g
麦芽糖3g4%氢氧化钠溶液1.5ml
乳糖0.7g蒸馏水1000ml
氯化钠5g
pH7.8
制法:
用500ml蒸馏水溶解除琼脂以外的成分,煮沸、并用滤纸过滤、用1MNaOH,校正pH。
用另外500ml蒸馏水加热溶解琼脂.再将两液混合,分装试管10ml或20ml。
高压灭菌121℃15min。
临用时加热溶化琼脂倾注平板。
39、氯化钠结晶紫增菌液
成分:
蛋白胨20g0.01%结晶紫溶液5ml
氯化钠40g蒸馏水1000ml
pH9.0
制法:
除结晶紫外,其他按上述成分配好,加热溶解。
约加30%氢氧化钾液4.5ml,校正pH。
加热煮沸,过滤。
再加入结晶紫溶液,混和后分装试管。
高压灭菌121℃15min。
40、氯化钠蔗糖琼脂
成分:
蛋白胨10g氯化钠50G
牛肉膏10g蔗糖10g
琼脂18g蔗糖1000ml
0.2%溴麝香草酚蓝深液20ml
制法:
将牛肉膏、蛋白胨及氯化钠溶解于蒸馏水中,校正pH7.8,加入琼脂,加热溶解。
加入指示剂,分装烧瓶100ml,高压灭菌121℃15min备用。
临用前在100ml培养基内加入蔗糖1g,加热溶化并冷至50℃,倾注平板。
41、嗜盐菌选择性琼脂
成分:
蛋白胨2g0.01%结晶紫溶液5ml
氯化钠40g蒸馏水1000ml
琼脂17g
pH7.7
制法:
配制2%蛋白胨水,校正pH,共配5制瓶,每瓶100ml。
每瓶分别加入不同量的氯化钠:
(!
)不加;
(2)3g;(3)7g(4)9g(5)11g。
待溶解后分装试管,高压灭菌121℃15min。
43、氯化镁孔雀绿肉汤
成分:
1%胰胨水(高压灭菌)156ml
M/15Na2HPO4溶液(高压灭菌)40ml
4%(W/N)MgC126H2O水溶液(100℃煮沸数分钟)53ml
0.2%孔雀绿溶液1.6ml
制法:
将上述几种溶液,按列出的容量混合,即成氯化镁孔雀绿肉汤,分装试管,每管10ml,于4℃可保存10个月。
如若配氯化镁孔雀绿羧苄青霉肉汤,除上述几种溶液外,再配制羧苄青霉素(carpenicilin)溶液(溶解1mg于1ml水中),将此溶液与其他溶液混合,即成。
44、Baird-parker氏培养基
成分:
胰蛋白胨10g甘氨酸12g
牛肉膏5g氯化锂(含6H2O)5g
酵母膏1g琼脂20g
丙酮酸钠10g蒸馏水950ml
pH7.0±0.2
制法:
将各成分加到蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解。
冷至25℃,校正pH。
分装每瓶95ml,高压灭菌121℃15min。
临用时加热溶化琼脂,冷至50℃,每95ml加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5ml,摇匀后倾注平板。
培养基应是致密不透明的,使用前在冰箱储存不得超过48h。
增菌剂的配法:
30%卵黄盐水50ml与除菌过的1%亚碲酸钾溶液10ml混合,保存于冰箱内。
45、7.5%氯化钠肉汤
成分:
蛋白胨10g氯化钠75g
牛肉膏3g蒸馏水1000ml
pH7.4
制法:
将上述成分加热溶解,校正pH,分装试管,高压灭菌121℃15min。
46、匹克氏肉汤
成分:
含1%胰蛋白胨的牛心浸液(无牛心用牛肉代替)200ml
1:
25000结晶紫盐水溶液10ml
1:
800三氮化钠溶液10ml
脱纤维免血(或羊血)100ml
制法:
将上述已灭菌的各种成分,用无菌手续依次混合,分装于小三角烧瓶内,每瓶50ml。
保存于冰箱内备用。
47、疱肉培养基
成分:
牛肉浸液1000ml葡萄糖3g
蛋白胨30g可溶性淀粉2g
酵母膏5g碎肉渣适量
磷酸二氢钠5g
pH7.8
制法:
(1)称取新鲜除脂肪和筋膜的碎牛肉500g加蒸馏水1000ml和1M氢氧化钠溶液25ml,搅拌煮沸15mi
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- 附录 常用 培养基 试剂