001经口急性毒性试验方法改良寇氏法.docx

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001经口急性毒性试验方法改良寇氏法

001-经口急性毒性试验方法-改良寇氏法

急性毒性试验方法

—改良寇氏法

朝衣年孙瑞提教授后经该法

&数Hw

1963

称为相

进一步改

近点斜法或孙氏法D5增及全部有量按等改蹑氏法各组动物数相试验设大致有一半组数组剂最死亡现在数¥和各组动之数量组一半在一半组00%动间’

物死亡率

、剂量选择及分组

日.、小皿

1、剂键。

应首理化

剂量

正式，所得

能否成功的关

&其LD50或LC。

时,

讎结构和

最出|的原致死先用少围致

待测剂量鼬按几何级数的L间剂量呈等比级数（r），其比验。

用于急性毒性试验时，动物的体重为：

大鼠180~200g，小鼠18~22g，豚鼠200~250g,家兔2〜2.5kg，犬10~12kg。

用于实验的同一批动物体重变异范围不得超过所用动物平均体重的20%。

仍然遵守雌雄各半或雌雄兼取的原则。

当预试中发现化学物通毒性有明显的性别差异时，则需要选用雌、、雄两种性别的动物分别进行式验，求岀各自的—量范按

几何

试动物剂量间距染毒，

量范^后在这

5〜7个剂量后在这组

1.2〜1.5。

进行正式实

全部致死即求出

亍在这

设计剂

式中：

r

b

r

相邻

最低

.n1b

全组死剂量量值，一般为1-2〜1-5,

a

n—设计的组数。

最高

分组恰当与否也是确保实验结果准确的条件之

一。

因为组数过多，需要消耗较多的动物，还可能出现较大剂量组动物死亡率低于较小剂量组；组数过少，不能较精确求出LD50o

3、根据公比（r）计算各组剂量

各组剂量分别为：

第一组：

a

第二组：

ar

第三组：

ar2

第四组：

ar3

第五组：

ar4

第六组：

ar5

、受试物溶液配制

溶！

学1验

液水而。

液油的于基纤常溶钠温（实验动物应解后粉悬

10%溶解后，再用

配受试方化法学物的配制方法有等浓度稀释法和等容量稀释法。

等浓度稀释法将受试物配制成一种浓度，不同

剂量组实验动物单位体重所给受试物的体积不同，剂量越高，所用的体积越大；剂量越低，所用的体积越小。

比如某受试物的试验剂量分别为100、200、400和

800mg/kg，受试物配制成10mg/ml，每组动物每10g体重分别给与0.1、0.2、0.4和0.8ml。

等容量稀释法将受试物配制成不同浓度，不同剂量组实验动物单位体重所给受试物的体积相同，剂量越大，受试化学物配制的浓度越高。

上例中，若实验动物按0.2ml/10gb.w容量灌胃，则应配制成4个不同浓度，即5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml和40mg/ml。

灌胃体积依所选用的实验动物而定，一次灌胃的体积为：

小鼠0.1〜0.4ml/10gb.w，每只不超过1ml；大鼠0.5〜1ml/100g，

每只不超过4ml;家兔在5ml/kg之内;犬不超过50ml/kg；

化学物系列稀释法。

。

该法操作简便、浓度精确、节约受试

如已知最高剂量组剂量为2000mg/kgb.w.，小鼠按

等容量方法给予受试药液，即0.2ml/10gb.w.，相当于20ml/1000gb.w.，故最高剂量组所需受试液的浓度（母液浓度）为2000mg/20ml，即10.0%（CJ

b、确定每组所需受试液的量（mml）

按每只鼠体重25g计算（将损耗也计算在内）

给药量为0.2ml/10gb.w.，则每组10只动物所需受试液的量为5ml；

M—

1K式中，K为各组剂量的比值，K=1/r。

d、配制母液

选择适当的溶剂配制浓度为Ci的受试液，取Mml作为母液，从母液中取出mml供最高剂量组染毒用；然后取mml溶剂加入剩余的母液中，混匀，稀释后的母液浓度为C2（Ci:

C2=1:

k=r），即次高剂量组所要求的浓度，从中取出mml供次高剂量组染毒用（第2组），然后再加入mml溶剂，其稀释后的浓度为C3（C2:

C3=1.2）,取出mml供第3组动物染毒用。

依此类推，可配制成按1:

K递减的各剂量组不同浓度的试液。

—，、染^毒

三各，即鼠分m别按等容量方法给予相应浓度的受试药

四、观察指标与试验期限

急性中毒症状及出现时间，死亡数量、时间。

大体剖检变化。

试验期限为7-14天

五、结果及LD50的计算

采用寇氏法计算LD50及其95%可信限

1、试验结果列表

表试验结果

组

别

剂量

（mg/k

g）

试验动

物数

死亡动

物数

死亡率

（P）

存活率

（q）

1

10

/

10

3

J

10

4

10

i

■

10

LD50

.:

pq

Sx50i■'

50。

举例：

给小鼠口服某药进行急性毒性试验，测定LD

选择体重18~24g健康小鼠（雌雄各半），按随机方法将动物分为5个组，每组10只。

经预试找出死亡率0〜100%的剂量范围大约为300〜600mg/kgb.w.。

第四组：

ar3=3001.23=518mg/kgb.w.

第五组：

ar4=3001.24=622mg/kgb.w.

（4）受试液配制

采用1:

K系列稀释法配制不同浓度的受试液。

（K=1/r）

a、确定各剂量组所需受试液浓度：

已知最高剂量组剂量为622mg/kgb.w.,小鼠按等容量方法给予受试药液，即0.2ml/10gb.w.,相当于20ml/1000gb.w.,故最高剂量组所需受试液的浓度（母液浓度）为622mg/20ml，即3.11%（Ci）；

b、确定每组所需受试液的量

按每只鼠体重25g计算（将损耗也计算在内），给药量为0.2ml/10gb.w.，则每组10只动物所需受试液的量为5ml;

c、确定母液总量

各组动物需用本组浓度受试液的用量为5ml（m）;各

剂量组之比为0.833（k=1/r），则母液应配制的总量为

（ml）:

d、配制母液

选择适当的溶剂配制浓度为3.11%（Ci）的受试液，取30ml作为母液，从母液中取出5ml供第五组（最高剂量组）接毒用，然后取5ml溶剂加入25ml母液中混匀，稀释后的母液浓度为2.59%（C2）（Ci:

C2=1:

k=1.2）,即第四组（次高剂量组）所要求的浓度，从中取出5ml

供第四组接毒用，然后再加入5ml（ml）溶剂，其稀释后的浓度为2.16%（C3）（C2:

C3=1.2）,即第三组所需的浓度。

依此类推，可配制第二组、第一组所需浓度的受试液，分别为1.80%、1.50%

（5）接毒

各组小鼠分别按等容量方法给予相应浓度的受试药

液，即0.2ml/10gb.w.。

（6）观察指标

（7）结果及LD50的计算

采用寇氏法计算LD50及其95%可信限

a、将试验结果列入下表，按改良寇氏法进行计算；

表试验结果

组别

剂量

（mg/k

g）

试验动

物数

死亡动

物数

死亡率

（p）

存活率

（q）

1

300

10

0

0

1.0

2

360

10

2

0.2

0.8

3

432

10

5

0.5

0.5

4

518

10

7

0.7

0.3

5

622

10

10

1.0

0

b、按下列公式计算:

LD50log1[Xmi（p0.5）]

即：

logLD50=Xmd（p0.5）

Xm=log622=2.7938

i=log1.2=0.0792

p=0+0.2+0.5+0.7+1.0=2.4

代入公式：

logLD50=2.79380.0792（2.40.5）=2.6433查反对数求出LD50=439.87mg/kgb.w.。

计算LD50的标准误（S）:

=0.0792X0.249=0.0197

计算LD50的95%可信限：

LD50的95%可信限=log（logLDso土1.96XSlogLD50）log1（2.6433土1.96X0.0197）

=log1（2.6433±0.0386）=log1（2.60472.681

=402.44~480.73mg/kgb.w.

（1）预试（略）

（2）计算公比

a

rn1

¥a

r=5-1600/300=42=1.189〜1.2?

?

（3）根据公比（r）计算各组剂量

因而各组剂量分别为：

第一组：

a=300mg/kgb.w.

第二组：

ar=3001.2=360mg/kgb.w.

第三组：

ar2=3001.22=432mg/kgb.w.