实验室常用溶液配制.docx
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实验室常用溶液配制
一.常用贮液与溶液
1mol/L亚精胺(Spermidine):
溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine):
溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammoniumacetate):
将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA):
加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,
须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT):
在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇
至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾(potassiumacetate):
溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾(KCl):
溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠(sodiumacetate):
溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。
0.5mol/LEDTA:
配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA•2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。
1mol/LHEPES:
将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
1mol/LHCl:
加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
25mg/mlIPGT:
溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。
1mol/LMgCl2:
溶解20.3gMgCl2•6H2O于足量的水中,定容到100ml。
100mmol/LPMSF:
溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml。
分成小份并用铝箔将装液管包裹
或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶K(proteinaseK):
将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlRnase(无DNase)(DNase-freeRNase):
溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH5.0)。
溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。
用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。
(配制过程中要戴手套)
5mol/L氯化钠(NaCl):
溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml。
10N氢氧化钠(NaOH):
溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
10%SDS(十二烷基硫酸钠):
称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。
用水定容至1L。
2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):
溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。
100%三氯乙酸(TCA):
在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。
(稀释液应在临用前配制)
2.5%X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):
溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃。
100×Denhardt试剂(Denhardt’sregent)
成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量
2%聚蔗糖(Ficoll,400型)2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)2%BSA(组分V)
水2g2g2g
加水至总体积为100ml,依照上表称取各组分,溶于水中定容。
过滤除菌及杂质,分装成小份于-20℃贮存。
10×标准DNA连接酶缓冲液(standardDNAligasebuffer)(粘端、平端连接)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量
0.5mol/LTris-HCl:
5ml1mol/L贮液,100mmol/LMgCl2:
1ml1mol/L贮液,100mmol/LDTT:
1ml1mol/L贮液,2mmol/LATP:
200ul100mmol/L贮液,5mmol/L盐酸亚精胺(可选):
50ul1mmol/L贮液,0.5mg/mlBSA(组分V)(可选):
0.5ml10mg/mL贮液,水:
2.25ml
将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20℃。
100mmol/LdNTP溶液(dNTPsolutions)
可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液,-80℃可贮存至少6个月。
10mmol/LdNTP混合液
成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量
10mmol/LdATP
10mmol/LdCTP
10mmol/LdGTP
10mmol/LdTTP
水2ul100mmol/LdATP贮液
2ul100mmol/LdCTP贮液
2ul100mmol/LdGTP贮液
2ul100mmol/LdTTP贮液
12ul
20%PEG8000/2.5MNaCl
成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量
质量浓度为20%聚乙二醇
2.5mol/L氯化钠
水20g
50ml5mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠
补足100ml
加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。
20×SSC
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
300mmol/L柠檬酸三钠(二水)
3mol/L氯化钠
水88.2g
175.3g
补足1L
溶解柠檬酸三钠(二水)和氯化钠于约0.9L水中,加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。
DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水
加100ulDEPC于100ml水中,使DEPC的体积分数为0.1%。
在37℃温浴至少12h,然后在15psi条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。
DEPC会与胺起反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。
甲酰胺(deionizedformamide)
直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。
经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃贮存(防止氧化)。
磷酸缓冲液(phosphatebuffer)
按照下表所给定的体积,混合1mol/L的磷酸二氢钠(单碱)和1mol/L磷酸氢二钠(双碱)贮液,获得所需pH的磷酸缓冲液。
配制1mol/L的磷酸二氢钠(NaH2PO4•H2O)贮液:
溶解138g于足量水中,使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液:
溶解142g于足量水中使终体积为1L。
1mol/L磷酸二氢钠(ml)1mol/L磷酸氢二钠(ml)最终pH值
TE(用于悬浮和贮存DNA)
成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量
10mmol/LTris-HCl
1mmol/LEDTA
水1ml1mol/LTris-HCl(pH7.4-8.0,25℃)
200ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
98.8ml
Tris缓冲液(Tris-HClbuffer)
将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中,再根据所要求的pH(25℃下)加一定量的浓盐酸(11.6N),用水调整终体积至1L。
二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液
电泳缓冲液
50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
2mol/LTris碱
1mol/L乙酸
100mmol/LEDTA
水242g
57.1ml的冰乙酸(17.4mol/L)
200ml的0.5mol/LEDTA(pH8.0)
补足1L
5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
445mmol/LTris碱
445mmol/L硼酸盐
10mmol/LEDTA
水54g
27.5g硼酸
20ml的0.5mol/LEDTA(pH8.0)
补足1L
染料
1%溴酚蓝(bromophenolblue)
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1%二甲苯青FF(xylenecyanoleFF)
溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭(ethidiumbromide)
小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。
用铝箔包裹装液管,于4℃贮存。
凝胶上样液(gelloadingsolutions)
6×碱性凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.3N氢氧化钠
6mmol/LEDTA
18%聚蔗糖(400型)
0.15%溴甲酚绿
0.25%二甲苯青FF
水300ul10N氢氧化钠
120ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
1.8g
15mg
25mg
补足到10ml
6×聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚蓝
0.15%二甲苯青FF
5mmol/LEDTA
15%聚蔗糖(400型)
水1.5ml1%溴酚蓝
1.5ml1%二甲苯青FF
100ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
1.5g
补足到10ml
6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.25%溴酚蓝
0.25%二甲苯青FF
15%聚蔗糖(400型)
水2.5ml1%溴酚蓝
2.5ml1%二甲苯青FF
1.5g
补足到10ml
6×甘油凝胶上样液(4℃贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚蓝
0.15%二甲苯青FF
5mmol/LEDTA
50%甘油
水1.5ml1%溴酚蓝
1.5ml1%二甲苯青FF
100ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
3ml
3.9ml
6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚蓝
0.15%二甲苯青FF
5mmol/LEDTA
40%聚蔗糖
水1.5ml1%溴酚蓝
1.5ml1%二甲苯青FF
100ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
4g
补足到10ml
10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.2%溴酚蓝
0.2%二甲苯青FF
200mmol/LEDTA
0.1%SDS
50%甘油
水20mg
20mg
4ml0.5mol/LEDTA(pH8.0)
100ul10%SDS
5ml
补足到10ml
三.常用培养基
LB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨10g
酵母提取物5g
氯化钠10g
如果需要用1NNaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。
注:
琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
SOB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨20g
酵母提取物5g
氯化钠0.5g
1mol/L氯化钾2.5ml
用水补足体积到1L。
分成100ml的小份,高压灭菌。
培养基冷却到室温后,再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。
SOC培养基
成分、方法同SOB培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外,再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌)。
TB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨12g
酵母提取物24g
甘油4ml
各组分溶解后高压灭菌。
冷却到60℃,再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中,使终体积为100ml。
高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌)。
2×YT培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨16g
酵母提取物10g
氯化钠4ml
如果需要用1NNaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。
注:
琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
YPD培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨20g
酵母提取物10g
葡萄糖20g
用水补足体积为1L后,高压灭菌。
建议在高压灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸,因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。
为了配制平板,需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。
四.常用抗生素
氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml)
溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)
溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)
溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)
溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)
溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以12.5ug/ml~25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素(streptomycin)(50mg/ml)
溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
萘啶酮酸(nalidixicacid)(5mg/ml)
溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素(tetracyyline)(10mg/ml)
溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml。
分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。
常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
几种溶液的配制方法
1、PBS:
取ZLI-9061PBS溶于1000ml的蒸馏水中,混匀,测pH值应在7.2~7.4之间,若偏离此范围,请用0.1N的HCL或NaOH调整。
2、TBS:
2.1Tris缓冲液配方:
(0.5MpH7.6)
Tris(三羟甲基氨基甲烷)60.57g
1NHCL约420ml
双蒸水加至1000ml
Tris缓冲液配制方法:
先以少量双蒸水(300~500ml)溶解Tris,加入HCl后,用HCl(1N)或NaOH(1N)将pH调至7.6,最后双蒸水加至1000ml。
此液为储备液,4℃冰箱中保存。
2.2TBS配方:
Tris-HCI缓冲液(0.5MpH7.6)100ml
NaCI8.5~9g(0.15mol/L)
双蒸水加至1000ml
TBS配制方法:
先以少量双蒸水溶解NaCl,再加入Tris-HCl缓冲液,最后加双蒸水至1000ml,充分摇匀。
3、枸橼酸盐缓冲液(Citratebuffer):
3.1储存液:
A.0.1M枸橼酸溶液:
称取21.01g枸橼酸(C6H8O7•H20)溶于1000ml蒸馏水中。
B.0.1M枸橼酸钠溶液:
称取29.41g枸橼酸钠(C6H5Na3O7•2H20)溶于1000ml蒸馏水中。
3.2工作液:
0.1取9mlA液和41mlB液加入450ml蒸馏水中,溶液pH值应为6.0
4、胰酶(Trypsin):
4.1ZLI-9011胰蛋白酶消化液:
常用浓度为0.125%,即使用前将一滴试剂1胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合(1:
3稀释),则可直接滴加使用。
胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整,浓度范围可以从0.05%(1:
10稀释)至0.25%(1:
1稀释)。
4.2ZLI-9010胰蛋白酶:
取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml0.05%或0.1%pH7.8的无水氯化钙水溶液中,溶解即可。
5、胃酶(Pepsin):
4%胃蛋白酶,用0.1mol/LHCL配制。
(我公司备有ZLI-9013胃蛋白酶消化工作液,不需稀释直接滴加使用,欢迎选购)
6、DAB:
6.1ZLI-9032/9033DABKit:
使用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中,即可获得1mlDAB工作液,简单易用。
6.1ZLI-9030DAB:
6mgDAB溶于10mlTBS(0.05MpH7.6),再加入0.1ml浓度为3%的H2O2,过滤掉沉淀物,即可。
7、AEC:
4mgAEC溶于1ml二甲基甲酰胺中,加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液(pH5.2),然后加入0.15ml3%H2O2,过滤掉沉淀物。
8、RIPA:
1×PBS,1%NP40,0.5sodiumdeoxycholate,0.1%SDS(此液体可长期保存)。
以下抑制剂以储存液方式保存,临用前加入RIPA中。
8.110mg/mll/ml)PMSF异丙醇溶液(用量为10
l/ml)8.2Aprotinin(Sigma产品,用量为30
8.31000mMsodiumorthovanadate冷冻液
l/ml)(用量为10
9、BlottoA:
常规使用1×PBS,5%milk,0.05%Tween20。
10、BlottoB:
与Phosphotyrosine抗体共用,1×PBS,1%milk,0.05%Tween20。
部分实验中milk可完全去除,但可能引起背景增高。
[LasteditedbyBlueGuyon2006-4-26at20:
42]
作者:
Eric6007
实验室常用贮存液的配制参数
一、核酸及蛋白质常用数据
化合物分子量λmax(pH7.0)1摩尔溶液(pH7.0)中λmax时的最大吸收值OD280/OD260
ATP507259154000.15
CTP48327190000.97
GTP523253137000.66
UTP484262100000.38
dATP494259152000.15
dCTP46727193000.98
dGTP507253137000.66
dTTP48226796000.71
2.常用核酸的长度与分子量
核酸核苷酸数分子量
λDNA48502(双链环状)3.0×107
pBR3224363(双链)2.8×106
28SrRNA48001.6×106
23SrRNA37001.2×106
18SrRNA19006.1×105
19SrRNA17005.5×105
5SrRNA1203.6×104
tRNA(大肠杆菌)752.5×104
3.常用核酸蛋白换算数据
(1)重量换算
1μg=10-6g 1pg=10-12g
1ng=10-9g 1fg=10-15g
(2)分光光度换算:
1A260双链DNA=50μg/ml
1A260单链DNA=30μg/ml
1A260单链RNA=40μg/ml
(3)DNA摩尔换算:
1μg100bpDNA=1.52pmol=3.03pmol末端
1μgpBR322DNA=0.36pmol
1pmol1000bpDNA=0.66μg
1pmolpBR322=2.8μg
1kb双链DNA(钠盐)=6.6×105道尔顿
1kb单链DNA(钠盐)=3.3×105道尔顿
1kb单链RNA(钠盐)=3.4×105道尔顿
(4)蛋白摩尔换算:
100pmol分子量100,000蛋白质=10μg
100pmol分子量50,000蛋白质=5μg
100pmol分子量10,000蛋白质=1μg
氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿
(5)蛋白质/DNA换算:
1kbDNA=333个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质
10,000MW蛋白质=270bpDNA
30,000MW蛋白质=810bpDNA
50,000MW蛋白质=1.35kb
100,000MW蛋白质=2.7kbDNA
4.常用蛋白质分子量标准参照物
(1)高分子量标准参照
(2)中分子量标准参照(3)低分子量标准参照
肌球蛋白分子量磷酸化酶B97,400碳酸酐酶31,00
肌球蛋白212,000牛血清白蛋白66,200大豆脻蛋白酶21,500
β-半乳糖甘酶B116,000谷氨酶脱氢酶55,000抑制剂
磷酸化酶B97,400卵白蛋白42,700马心肌球蛋白16,900
牛血清白蛋白66,200醛缩酶40,000溶菌酶14,400
过氧化氢酶`57,000碳酸酐酶31,000肌球蛋白(F1)8,100
醛缩酶40,000大豆脻蛋白酶21,500肌球蛋白(F2)
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