大蒜素协同细胞周期特异性化疗药抗肿瘤作用及其机制的研究.pdf

大蒜素协同细胞周期特异性化疗药抗肿瘤作用及其机制的研究.pdf

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中文论著摘要大蒜素协同细胞周期特异性化疗药抗肿瘤作用及其机制的研究前言大蒜（Alliumsativum）是百合葱属植物的鳞茎，在我国及世界各国作为民间用药已有数千年的历史。

大蒜中各种化学成分的提取和应用已成为现实。

大蒜素（Allicin，diaUyltrisulfide）为大蒜中的活性产物，用色谱一质谱法分离得到五种成分，其中一种具有较强抗霉菌猖细菌能力，丽且性质稳定，称为二烯丙基三硫（diallyltrisulfide）又名大蒜新素。

经理化测定，确定其结构式为CH2=CHCH2SSSCH2一CH=CH2，分子式为C。

H。

oS，。

其不仅限于抗菌消炎、防治感染性疾病，而且广泛用于抗衰老、降血脂、降血压、抗凝血、抗病毒等，除上述功能外，近年研究发现大蒜素能阻断致癌物的合成、抑制致癌物的活化和抗突变、抗畸变作用；大蒜素对肿瘤细胞有直接杀伤作用；大蒜素具有抑制癌细胞生长、调节细胞周期、促进癌细胞凋亡的作用；大蒜素还能通过调节机体免疫功能干扰肿瘤的生长以及与抗癌药合用起到增强抗癌药效的作用。

目前化疗即化学药物治疗是恶性肿瘤治疗的主要手段之一，临床常用的化疗药物大多既能抑制和杀伤肿瘤细胞，又熊损伤正常的组织细胞，成为化学治疗限制剂量使用的障碍从而较大地影响疗效。

因此，在肿瘤化疗过程中对肿瘤细胞最大限度的杀伤，而对正常细胞的毒性最低药物的研发越来越引起重视。

应用细胞周期特异性药物在杀伤处于此药敏感时相的肿瘤细胞具有重要意义，如能延缓肿瘤细胞的周期进程，阻止细胞从某一时相进入下一时相，导致细胞暂时性蓄积，此时如给予对这一时相具有杀伤作用的药物将能明显增效，同时也可减少抗癌药物剂量而减轻不良反应。

大蒜素具有调节细胞周期、与抗癌药联合应用可增强疗效的作用，但有关大蒜素与细胞周期特异性化疗药联合应用的研究尚未见报道，大蒜素与化疗药联合应用对肿瘤细胞的杀伤作用及其机制目前尚不清楚有待深入探讨。

目的通过探讨大蒜素对人胃癌细胞株BGC一823、SGC-7901细胞周期的影响，探讨大蒜素与细胞周期特异性化疗药联合应用，可否增强化疗药对肿瘤细胞的杀伤作用；进一步探讨大蒜素与细胞周期特异性化疗药联合应用的作用机制。

方法采用细胞培养技术进行人胃癌细胞株BGC一823、SGC一7901两种细胞的培养；MrIr法检测肿瘤细胞增殖抑制率及检测大蒜素及各化疗药物的Ic，。

值；大蒜素与三种细胞周期特异性化疗药及一种细胞周期非特异性化疗药联合应用，观察药物细胞毒活性的改变；流式细胞仪检测人胃癌细胞抹BGC一823、SGC一7901两种细胞细胞周期的改变；SP免疫组化方法检测两种胃癌细胞p21、p27；GST一盯、P一糖蛋白表达的变化。

结果1、大蒜素对BGC一823和SGC一790I两种细胞的生长均有明显的抑制作用，两种胃癌细胞经大蒜素处理后细胞周期阻滞于GJM期；大蒜素与特异作用于G2M期的化疗药NVB联合应用时增强了其对肿瘤细胞的细胞毒活性。

BGC一823细胞72hIC50为30斗gml，SGC一7901细胞72hIC，。

为201xgml；以72h大蒜素IC，。

浓度作用两种胃癌细胞24h、48h后，流式细胞仪检测，与对照组比较G。

G。

期细胞减少，G2M细胞增加（P001）。

大蒜素与化疗药联合应用时，作用于BGC一823细胞，NVB72h的IC：

。

值由原来单独应用时的9仙gInl降至225肛gml，细胞杀伤率提高3倍；作用于SGC一7901细胞，NVB72h的Ic值由原来单独应用时的43肛gml降至125“grIll，细胞杀伤率提高244倍；2、大蒜察上调两种胃癌细胞p2l、p27蛋白表达；大蒜素与G2M期特异性化疗药NVB联合应用后两种胃癌细胞p21、N7蛋自表达显著增加。

2未经大蒜素处理的两种细胞，p21、p27蛋白均为阴性；大蒜素作用SGC一7901细胞后，p21和p27蛋白均为阳性表达，且表达随大蒜素浓度增加而增强，其中p21蛋白在5ugml、10ugml、15ugml、20ugml浓度大蒜素作用后阳性表达率分别为343、419、577、626；p27蛋白在5ugml、10ugml、15ugml、20ugml浓度大蒜素作用后阳性表达率分别为293、354、415、492。

5ugml、10ugml、15ugml、20ugml浓度大蒜素作用BGC一823细胞后，p21、p27蛋白阳性表达率分别311、366、421、498和259、294、357、409。

NVB加大蒜素组p21、p27阳性表达率BGC一823和SGC一7901细胞分别为482、414和532、497。

3、经大蒜素处理的两种胃癌细胞中GST一叮r、P一糖蛋白的表达随着大蒜素的浓度增加而减少，表明大蒜素可以下调细胞内GST一盯、P一糖蛋白的表达。

大蒜素作用SGC一7901细胞后，GST一叮T、P一糖蛋白表达减少，且表达随大蒜素浓度增加而减少，其中GST一耵蛋白在0uIIll、5uml、lOugml、15ugml、20ugml浓度大蒜素作用后阳性表达率分别为647、483、349、257、136；P一糖蛋白在0ugrnl、5uml、10ugml、15ugrnl、20ugml浓度大蒜素作用后阳性表达率分别为362、343、214、135、92。

0ugml、5ugml、10ugml、15ugml、20ugml浓度大蒜素作用BGC一823细胞后，GST一叮、P一糖蛋白阳性表达率分别673、391、266、171、99和367、244、19I、107、79。

结论大蒜素可使SGC一7901和BGC一823两种细胞生长受到明显的抑制、细胞周期阻滞于GVM期；大蒜素与特异作用于GVM期的化疗药物联合应用时增强了其对肿瘤细胞的细胞毒活性，减少了化疗药的用量，增强化疗药的敏感性，两者有协同抗肿瘤作用；大蒜素的G2M期阻滞作用可能与其上调p21、p27蛋白的表达有关，大蒜素与细胞周期特异化疗药NVB联合应用上调了p21、p27蛋白的表达，亦可能是两者对G2M期的阻滞机理之一；大蒜素对抗癌药减低耐药的作用可能与其下调GST一1r、P一糖蛋白有关。

本研究为临床应用大蒜素治疗胃癌提供了实验依据。

3关键词大蒜素；细胞周周期特异性化疗药；协同作用；机制；耐药4一英文论著摘要jStudiesoftheCombinedEffectsofAmcinWithCellCyclesPhaseSpecificChemotherapeuticDrugsonBGC一823SGC一7901anditsMechanismABSTRACTPerfaceAi呦sativumisthethebulboflilyshallotcategoryplants。

ithasbeenusedasfolkdrugsforseveralthousandyearsinChinaandothercountriesthroughouttheworldTheabstractionandapplicationofallkindsofchemicalingredientsfromgalichasbeenrealizedUsingchromatogrammassspectrummethodwecanobtainfiveingredients，oneofwhichpossessesstrongerantiftmgalandantibioticpowerandiscalleddiallyltrisulfide（alsonamedAllicin）ItsstrueturecanbedeterminedbyphysicschemicalassaysasCH2=CHCH2一SSSCH2一CH=CH2，molecularformulaisC6HloS3Ithasbeenusednotonlyinantibiolticandeliminatinginflammationtreatments，preventinginfectivediseases，butalsowidelyappliedinantiaging。

reducingbloodfat，reducingbloodpressure，anticoagulantandantivirusfieldsInadditiontothefunctionsmentionedabovelthestudyoftheseyearshasfoundthatallicincanblockthesynthesisofthecancerogen，inhibittheactivationofthecancerogenandtheefiectofandmutafionandantiaberrationAllicinhasstraisht1ethaleffectontumorcell；Allicinhastheeffectofinhibitgrowthoftumorcell，regulatethecellcycle，promotestHmorcelltoapoptosisAllicincanalsointerferewiththegrowthoftumorthroughre昏dadngtheimmunefunctionandaUicinCanenhancetheeffectofanticancerdrugthroughthecombinedadministrationofanticancerdrugsNowadays，chemotherapyisoneofthemainmeallsofthemalignant1llnor5StherapyMostofthechemotherapeuticsusedincliniccannotonlyinhibitandkillthetumorcellbutalsodamagethenormalhistiocyte。

andthentheybecometheobstacleoflimitdoseofthechemotherapyandaffectthetherapeuticeffectgreatlySointhecourseoftumorchemotherapytheykillthetumorcellutmostwhilethedevelopmentofthedrugwhichpoisonisminimaltothenormalcellisthoughthighlyofUsingthecellcyclespecificdIughasimportantsignLficanceinkillingthetumorcellwhichisinthesensitivephaseofthedrugForexam-ple，itcandelaythecycleproceedingoftumorcell，prohibitthecellfromonephasetothenextphase，thusresultsintemporaryaccumulationofcells，theeffectwillbeenhancedsignificantlyatthistimewhenbe舀venthedrughavingtheeffectofkilling，meanwhile，itCallalsoreducetheadverseeffectthroughreducingthedoseofanticancerdrugsAllicinhastheeffectofregulatingthecellcycleandenhancethetherapyeffectthroughthecombinedadministrationofanticancerdrugsHowever，therearefewerrepotsoncombinedadministrationofallicinThereisstillmuchworktodoinordertoexplorethemechanismofinhibitioneffectsofallicinontumorceilscycleandkilleffectsofitontumorceUscombinedwithchemotherapeuticdrugsTostudytheeffectofallicinonhumangastriccellsBGC-823andSGC7901，toexplorethecombinedapplicationofallicinwithchemotherapeuticdrugstothesetumorcellsandenhancetheeffectsofantieancerdrugs；toinvestigatethemechanismthatallicincallreducethetoleranceofsomeanticancerdrugsMethodsCellcultivationandMTrmethodtoevaluatetheinhibitionratesofprolifer-afionofcellsandIC50；analyzethechangeofcellcyclebyflowcytometry：

SPimmunohistochemistrytodeterminethechangesofexpressionofproteinsinp21，p27。

GST一百，Pglycopmtein；studytheeffectsofcombiningallicinwith6CCSA（NVB，5一FU，MMC）andCCNSA（PDD）andobservethechangesofcellsactivitiesResIllts1AllicininhibitscellgrowthofBGC一823andSGC一7901conspicuous，twokindsofgastriceeHsareblockedinthephaseofGJMafterbeinghandledwithallicinAllieinenhancethecellpoisonactivityofchemotherapydrugNVBwhichhasspecificactionofG2MphasewhenthroughthecombinationuseofitInBGC一823celltheIC50of72hoursis30ugml，inSGC一7901celltheIC50of72hoursis20ugm1TheseceUsaretreatedbyallicinattheconcentrationsof30ugmland20ugmlfor24hoursand48hours，afterassaysbyflowcytometry，comparedwiththecontrolgroup。

thepercentageofGoGlphaseofthecellsdecreasesandthatofG2Mphasecellsincreasessignificantlyinallicintreatedgroup（PO01）whenallicinisthroughthecombinedadministrationofchemotherapydrug，inBGC一832cells，the72hIC50valueofNVBdecreasesfrom9ugmlto225ugml-thekilleffectin