COX2 Bcl2和P53蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义.docx
- 文档编号:10407737
- 上传时间:2023-02-11
- 格式:DOCX
- 页数:82
- 大小:1.83MB
COX2 Bcl2和P53蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义.docx
《COX2 Bcl2和P53蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《COX2 Bcl2和P53蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义.docx(82页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
COX2Bcl2和P53蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义
COX2Bcl2和P53蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义
COX-2、BcI-2和P53蛋自在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义中文摘要
COX.2、Bcl.2和P53蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义
中文摘要
目的:
研究环氧化酶一2(CoX一2)、B细胞白血病/淋巴瘤一2基因(Bcl一2)和P53蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织和癌旁组织中表达情况,探讨C0x-2、Bcl一2及P53蛋白在NSCLC的发生、发展中的作用以及三者间的相互关系。
方法:
应用免疫组化方法,检测72例NSCLC组织和癌旁组织中COX一2、Bcl一2
及P53蛋白表达情况。
结果:
(1)COX-2、Bcl-2及P53蛋白在NSCLC组织中的表达显著高于癌旁组织。
(2)COX-2蛋白在NSCLC组织中的表达与组织类型、分化程度、肿瘤大小、临床分期及淋巴结转移密切相关;在腺癌中的表达明显高于鳞癌,且随着肿瘤分化程度越低、肿瘤体积增大、分期越高及淋巴结转移增多,COX一2蛋白表达阳性率越高:
而与年龄、性别和吸烟史无关。
(3)Bcl-2蛋白在NSCLC组织中的表达与肿瘤大小、临床分期及
淋巴结转移密切相关;随着肿瘤体积增大、分期越高及淋巴结转移增多,Bcl一2蛋白表达阳性率越高;而与年龄、性别、吸烟史、组织类型和分化程度无关。
(4)P53蛋白在NSCLC组织中的表达与淋巴结转移密切相关,随着肿瘤淋巴结转移增多,P53蛋自表达阳性率越高;而与年龄、性别、吸烟史、组织类型、分化程度、l临床分期及肿瘤大小无关。
(5)COX-2、Bcl-2及P53蛋白在NSCLC中的表达密切相关,相关系数r
分别为0.323、0.324、0.479,p 结论: COX-2、Bcl一2、及P53蛋白在NSCLC组织中呈高表达,它们在非小细胞肺癌的发生、发展过程中起重要作用;COX-2、Bcl-2、及P53蛋白表达增高可能预示NSCLC肿瘤发展较快、病程较晚、存在淋巴结转移;而COX一2蛋白的高水平表达更多见于腺癌和低分化NSCLC;在NSCLC中COX-2、Bcl-2、及P53蛋白表达存在密切相关性,它们共同参与NSCLC的发生、生长、侵袭和淋巴结转移,有助于判断NSCLC的发展、淋巴结转移及其预后,同时也为NSCLC的预防和治疗提供了一定的理论依据。 关键词: 环氧化酶-2(COX一2)B细胞白血病/淋巴瘤一2基因(Bcl一2)P53非小 细胞肺癌(NSCLC) 作者: 杨帆指导老师: 马海涛 COX·2、Bcl.2和P53蛋自在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义英文摘要 TheexpressionandrelevantclinicalsignificanceofCOX一2,Bcl一2andP53proteinsinnon—smalllungcancer Abstract Obiective: BydetectingtheexpressionofCOX-2,Bcl·2andP53proteinsinthetissueofnon-smallcelllungcancer(NSCLC)andparacanceroustissues.WestudiedtheeffectsofCOX-2,Bcl一2andP53proteinsandthecorrelationamongCOX-2,Bcl-2andP53proteinsonthedevelopmentofNSCLC. Methods: TheexpressionofCOX一2,Bcl-2andP53proteinswasdetectedin72casesofNSCLCandthesanlecasesofparacancertissuesofNSCLCbyimmunohistochemicalmethod. Results: (1)Therateofpositiveexpressionof.COX-2,Bcl一2andP53proteinswashigherinthetissuesofNSCLCthanthoseinparacanceroustissuesofNSCLC,itWassignificantlydifferent. (2)ThedegreeofexpressionofCOX-2proteininNSCLCWas relativetothepathologicaltypes,histologicclasses,thesizeoftumor,clinicalstagesandmetastaticlymphonode,butwasnotmlmivetotheage,sexualityandthehistoryofsmoking.Theworsehistologicclasses,thelaterclinicalstage,thebiggertumorandthemoremetastaticlymphonode,thehigherrateWasthepositiveexpressionofCOX-2protein. TherateofexpressionofCOX-2proteininadenocarcinomaWashigherthaninsquamous cancer.(3)ThedegreeofexpressionofBel一2proteininNSCLCWasrelativetothe,sizeof tumor,clinicalstagesandmetastaticlymphonode,butWasnotrelativetotheage,sexuality,thehistoryofsmoking,thepathologicaltypesandhistologicclasses.Thelaterclinicalstage,thebiggertunlorandthemoremetastaticlymphonode,thehigherrateWasthepositiveexpressionofBcl-2.(4)ThedegreeofexpressionofP53proteininNSCLCWasrelativetothemetastaticIymphonode,butwasnotrelativetotheage,sexuality,the historyofsmoking,thepathologicaltypes,histologicclasses,thesizeoftumorand.clinicalstages.Themoremetastaticlymphonode,thehigherratewasthepositive II COX.2、Bcl.2和P53蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义英文摘要expressionofP53protein.(5)ThelevelofexpressionofCOX-2,Bcl一2andP53proteins wascloselyrelatedtoeachotherinthecarcinomaofNSCLC,thecoefficientsofcorrelationwere0.323,0.324and0.479,p<0.05. Conclusion: TheexperimentalresultsweresuggestedthatCOX-2,Bcl一2andP53proteinsplayimportantrolesinoncogenesisandprogressionofNSCLC.ThehigherpositiveexpressionofCOX-2,Bcl-2andP53proteinswasindicationforthetumorgrowingquicklyandthediseasestagebeinglaterandlymphonodehavingmetastasis.TheoverexpressionofCOX-2proteinWasalwaysdetectedinadennocarcinomaandbaddifferentiatedcarcinomainNSCLC.TheexpressionofCOX-2,Bcl一2andP53proteinsinNSCLCWasrelatedtoeachother.COX-2,Bcl-2andP53hadtogethertakenpartinthe oncogenesis,development,invasionofcarcinomaandlymphonodemetastasisinNSCLC.DetectionthelevelofCOX-2,Bel-2andP53proteinsexpressionmightbeusefultojudgethestageofdiseaseandlymphonodemetastasisofNSCLC,andtopredicttheprognosisofpatiems谢thNSCLC.Also,thisresultshaveprovidedafundamentaltheoryforthe preventionandtreatmentofNSCLC. Keywords: Cycloxygenase-2(cox一2)B-cellleukemia—lymphoma-2gene(BCL-2)P53 Nommall—celllungcancer(NSCLC) Writtenby: FanYangSupervisedby: Hai-taoMa ⅡI COX.2、Bcl.2和P53蛋白在qH,细胞肺癌中的表达及其临床意义缩略词表 缩略词表 英文缩写英文全称中文译名 COX.2Cycloxygenase一2环氧化酶.2 COX.1Cycloxygenase一1环氧化酶.1 BCL.2B.cellleukemia-lymphoma-2geneB细胞白血病-淋巴瘤一2 基因 mRNAMessengerribonucleicacid信使核糖核酸 RT—PCRReversetranscriptasepolymerase逆转录酶多聚 chainreaction酶链反应 NSCLCNonsmall-celllungcancer非小细胞肺癌 UCCInternationalUnionAgainstCancer国际抗癌联合会 S.P.Streptavidin-peroxidase链霉菌抗生物素蛋白一过氧 化物酶 PGHSProstaglandinEndoperoxideHSynthase前列腺素内过氧化物 合成酶 42 苏州大学学位论文独创性声明及使用授权的声明 学位论文独创性声明 本人郑重声明: 所提交的学位论文是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。 除文中已经注明引用的内容外,本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果,也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。 对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。 本人承担本声明的法律责任。 研究生签名: 聿沁日 学位论文使用授权声明 苏州大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、清华大学论文合作部、中国社科院文献信息情报中心有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。 除在保密期内的保密论文外,允许论文被查阅和借阅,可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。 论文的公布(包括刊登)授权苏州大学学位办办理。 期: 蔓鲤墨: 』: Z 期: 泣&! 』: [ COX.2、Bcl.2和P53蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义前言 .土上-—J一 刖舌 肺癌是我国和世界范围的常见和高死亡率的肿瘤之一,近年来发病率和死亡率均有明显上升,有人预言: 如果不能有效控制吸烟和空气污染,到2025年我国每年的肺癌人数将超过100万,成为世界第一肺癌大国。 其中,非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌的60-80%。 随着今年来对肺癌生物学特性和发病机制的深入研究,肺癌的诊断和治疗方面取得了一定进步,但在肺癌的预防、早期诊断和后期治疗等方面还存在着许多棘手问题,其5年生存率仍低于15%“1。 因此,如何降低肺癌的发病率和死亡率,提高其生存率,仍是当前临床工作者亟待解决的问题。 环氧化酶-2(COX-2)是花生四烯酸转变成前列腺素的限速酶,静息时并不表达,仅在细胞受到各种刺激因素如生长因子、细胞因子、促癌剂等刺激后迅速开始合成,参与包括肿瘤在内的多种生理病理过程。 已有研究证实,除结肠癌组织中普遍存在高表达的COX-2外,在肺癌及其它组织恶性肿瘤中,COX一2的高表达亦常见,在癌前病 变亦有表达。 近几年的研究表明: COX-2的表达增强和前列腺素的合成增多参与了多种肿瘤的发生、发展。 COX-2高表达与血管生成、致癌物质的激活、细胞凋亡受抑、抑制宿主免疫力、肿瘤细胞浸润和转移的增强等有关阳1。 同时,COX-2高表达在癌前病变、原位癌即已存在,COX一2的高表达可看作是肿瘤发生的早期事件,而且非甾体类抗炎药通过抑制COX-2的表达,而具有防治肿瘤的作用‘2’3’41,因此,COX一2成为当前肿瘤防治的新靶点。 P53基因是人类肿瘤中突变率最高的抑癌基因,定位在染色体17913,全长16-20Kb,含11个外显子,10个内含子,编码一个2.2"-'2.5Kb的mRNA,产生53KDa的核蛋白,P53蛋白也是一种转录因子b1,半衰期很短,在正常组织中水平很低,免疫组化技术几乎检测不到。 突变型P53蛋白构象发生改变,其稳定性增加,表达水平比野生型P53蛋白高10"---100倍,用免疫组化技术可以检侧到‘61。 其在肺癌中的突变率超过了50%。 近年来的研究表明,P53基因突变后表达的突变型P53蛋白失去了抑制细胞增殖、启动DNA修复及诱导凋亡的作用,导致细胞增殖过度,凋亡减少及异常蓄积和转化‘7叫¨。 P53基因的功能失活在肺癌的发生和发展中起着非常重要的作用n1’12l 竺坠: ! : 里! ! : ! 塑! 塑至皂垄斐! : 墅堕堕蕉生塑垂垄垄茎堕壅童墨煎童Bcl一2是在人滤泡淋巴瘤细胞中染色体易位t(14: 18)(932q21)的断点上发现的, 被看作是一个癌基因n2’1¨。 Bcl-2基因常位于第18号染色体上,但可以易位到第14号染色体上,易位后的Bcl-2基因所编码的蛋白质结构不变,但表达量可大量增加,Bcl-2蛋白可以位于线粒体膜或核膜及溶酶体膜上。 近年来的研究表明Bcl一2癌基因是细胞凋亡的重要抑制基因,可抑制许多因素引起的凋亡。 目前有关COX-2和Bcl-2、P53在肺癌中的表达情况及相互作用机制的研究报道尚不多见。 其可能的机制为: P53基因突变后,突变型的P53蛋白对Bcl-2基因的负反应元件的调控功能丧失,导致Bcl-2蛋白表达增高,细胞增殖失控,向恶性转化;P53基因的突变可能激活了COX-2蛋白的表达,COX-2蛋白又通过P13k/Akt依赖的途径上调Bcl-2蛋白的表达。 本研究旨在应用免疫组织化学方法,对非小细胞肺癌COX一2、Bcl-2和P53蛋白的表达进行综合检测,并探讨其与非小细胞肺癌各病理特征之间以及其相互之间的关系,为肺癌的临床预防、早期诊断和治疗提供一定的理论依据。 2 COX-2、Bcl-2和P53蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义材料与方法 材料与方法 一、病例选择和标本处理收集苏州大学附一院2007年05月至2007年12月间胸外科手术切除,并经常规 病理学确诊的肺癌组织及癌旁组织(距癌灶边缘3cm)标本各72例。 所有肺癌病例术前均未接受化疗、放疗治疗。 其中男性53例,女性19例;年龄34"-'78岁,中位数年龄57.6岁: 肺鳞癌46例,肺腺癌26例;肿瘤组织分化程度: 高分化11例,中分化33例,低分化28例。 根据1997年国际抗癌联盟(UICC)标准进行pTNM分期,其中I期肺癌14例,II期35例,III期23例。 所有标本均用10%福尔马林液固定,并常规石蜡包埋。 二、免疫组化染色方法 (一)主要试剂 ‘ 1.抗体: A、兔抗人多克隆COX-2抗体(BA0738),购于武汉博士德生物技术有限公司,以 PBS液按(1: 150)稀释至工作浓度。 B、兔抗人多克隆Bcl-2抗体(BA0412),购于武汉博士德生物技术有限公司,以PBS液按(1: 150)稀释至工作浓度。 C、兔抗人多克隆P53抗体(BA0512),购于武汉博士德生物技术有限公司,以PBS液按(1: 150)稀释至工作浓度。 2、浓缩型DAB免疫组化检测试剂盒,购于武汉博士德生物技术有限公司,使用 时按说明现用现配3、0.01MPBS缓冲液(pH7.2-7.4)。 4、0.OIM枸橼酸钠缓冲液(Ph6.O)。 5、APES防脱片胶工作液,APES/丙酮=l: 49(ml/m1)。 (二)、主要仪器 1、PYX-DHS-40X隔水式电热恒温水温箱(上海市跃进医疗器械厂)。 2、BMJ-III型病理组织包埋台(常州市中成电子仪器厂)。 3、M2135自动切片机(德国LeiCAR公司)。 COX.2、Bcl.2和P53蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义材料与方法 4、OlympusCH一20型显微镜。 (三)、免疫组化方法 采用免疫组织化学技术S-P法(链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶连结法)。 具体步骤如下: 1、4um厚连续石蜡切片,贴附于涂有白胶的载玻片上,56"C烤片2小时。 2、二甲苯脱蜡,递减梯度酒精至水,PBS冲洗三次,每次3分钟。 3、杯中放入适量0.OIM构椽酸钠缓冲液,在高压锅内加热至沸,将待用切片放杯中,煮沸后放汽1分钟,冷却,使抗原暴露。 4、取出切片,加0.3%过氧化氢甲醇溶液,室温下孵育10分钟,以阻断内源过氧化物酶。 之后PBS冲洗3分钟×3次。 5、每张切片加1滴非免疫羊血清,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3分钟X1次。 6、每张切片加l滴COX-2、Bcl-2、P53的一抗,室温下孵育60分钟,PBS冲洗 3分×3次。 阴性对照以PBS代替一抗而其它条件均相同。 7、每张切片加l滴生物素化的二抗,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3分钟×3次。 8、每张片加1滴SP复合物,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3分钟X3次。 9、每张切片加l滴新鲜配置DAB;3一10分钟后终止染色,自来水冲洗。 10、苏木素复染,酒精梯度脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。 1l、镜检。 (四)对照 1、阳性对照: .采用已知的阳性组织切片作为阳性对照。 · 2、阴性对照: 采用PBS液代替一抗作阴性对照。 (五)阳性标准判断 COX-2、Bcl一2和P53蛋白表达的判定: 参照Takahashin钉双评分半定量法进行评分,于免疫染色最多区域计数i000个肺癌细胞。 染色强度评分: 无色为0分、浅黄色为1分、棕黄色为2分、棕褐色为3分: 阳性细胞百分数评分: 0为0分、≥25%为1分、26%---50%为2分、51%~75%为3分、76%---i00%为4分: 染色强度与阳性细胞百分数之和≥3分即为免疫组化阳性。 COX-2、Bcl-2和P53蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义材科与方法 (六)、统计学处理采用SPSSl3.0统计软件进行数据处理,CoX一2、Bcl一2、P53蛋白表达与临床特 征关系应用X2检验,COX-2、Bcl-2、P53蛋白表达之间的相关检验用Spearman等级相关分析,检验水准: p<0.05具有统计学意义。 COX.2、Bel.2和P53蛋自在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义结果 结果 一、COX一2蛋白的表达 1、COK-2蛋白的表达定位COX一2蛋白阳性染色为淡黄色、棕黄色、棕褐色程度不等,主要位于细胞浆,部 分位于核膜,呈弥漫分布。 见附图4-6。 2、COX-2蛋白在NSCLC组织和癌旁组织中的表达情况。 见表1。 表1COX-2蛋白在NSCLC组织和癌旁组织中表达情况 COX一2蛋白在72例NSCLC组织中阳性表达39例,阳性率54.17%,癌旁组织中阳性表达11例,阳性率15.28%。 COX一2蛋白在NSCLC组织中的表达明显高于癌旁组织,两者间差异有统计学意义(p<0.01)。 3、COX-2蛋白表达与临床病理特征间的关系,见表2。 6 COX-2、Bcl.2和P53蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义结果 注宰: p p<0.01 7 COX.2、Bcl.2和P53蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义结果 (1)、COX-2蛋白表达与年龄的关系: COX一2蛋白在≥60岁组中的阳性表达率为55.32%(26/47);COX-2蛋白在<60岁组的阳性表达率为52.00%(13/25)。 两者之间差异无统计学意义(p>0.05),提示COX-2蛋白在NSCLC中的表达与患者年龄无关。 (2)、COX-2蛋白表达与性别的关系: COX一2蛋白在女性组中的阳性表达率为63.16%(12/19);COX一2蛋白在男性组的阳性表达率为50.94%(27/53)。 两者之间差异无统计学意义(p>0.05),提示COX-2蛋白在NSCLC中的表达与患者性别无关。 (3)、COX-2蛋白表达与吸烟史的关系: COX一2蛋白在吸烟组中的阳性表达率为51.02%(25/49);COX一2蛋白在不吸烟组的阳性表达率为60.87%(14/23)。 两者之间差异无统计学意义(p>0.05),提示COX-2蛋白在NSCLC中的表达与患者吸烟史无关。 (4)、COX-2蛋白表达与NSCLC组织类型的关系: COX-2蛋白在腺癌中的阳性表达率为84.62%(22/26);COX一2蛋白在鳞癌中的阳性表达率为36.96%(17/46)。 可见腺癌中COX-2蛋白的表达高于鳞癌,两者之间差异具有统计学意义(p<0.01),提示 COX-2蛋白在NSCLC中的表达与肿瘤组织学类型有关。 (5)、COX-2蛋白表达与NSCLC组织分化程度的关系: COX-2蛋白在高分化肺癌中的阳性表达率为27.27%(3/11);在中分化肺
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- COX2 Bcl2和P53蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义 Bcl2 P53 蛋白 细胞 肺癌 中的 表达 及其 临床意义
![提示](https://static.bdocx.com/images/bang_tan.gif)