毛果甘青乌头中生物碱成分的提取和鉴定.docx
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毛果甘青乌头中生物碱成分的提取和鉴定
毛果甘青乌头中生物碱成分的提取和鉴定
【摘要】目的:
分离纯化鉴定毛果甘青乌头中的生物碱成分。
方法:
药材室温下自然烘干后,粉粹,用酸提碱沉法提取总生物碱,然后用硅胶柱层析法分离得到单体生物碱,利用化学法和光谱法鉴定其结构。
结果:
分离鉴定得到了10个化合物的结构,其中有六个内酯型C19二萜生物碱、四个C20二萜生物碱。
结论:
得到了10个纯的单体生物碱。
【关键词】毛果甘青乌头;分离;内脂型C19二萜生物碱
乌头属(Aconitum)植物属于毛茛科(Ranunculaceae),主要分布于北温带,全世界约350种,我国约170种[1],是该属植物资源最丰富的国家[2],主要分布于西南各省。
该属植物中,中国药典正式收录作为药用的有两种,川乌(附子)和草乌,但实际作为药用者约40种[3],具有镇痛,镇静,祛风湿,治疗跌打损伤,止咳,解热等功效。
二萜生物碱是该属植物的主要及特征性化学成分。
由于其结构复杂,生理活性显著,因而引起了植物化学工作者极大的兴趣。
自上个世纪70年代以来,随着分析技术,特别是核磁共振技术在结构分析鉴定中的广泛应用,二萜生物碱的化学研究也得到了迅速的发展。
迄今为止,已对160多种乌头属植物进行了化学研究,所得到的成分多为C19二萜生物碱。
二萜生物碱不仅是该属植物的有效成分和毒性成分,而且也被认为是植化分类上的特征性化学成分[4]。
由于其结构复杂,生理活性显著,因而引起了植物化学工作者极大的兴趣。
近30年来,由于波谱技术在结构解析中的广泛应用,二萜生物碱的研究得到了迅速的发展。
迄今为止,临床药用的二萜生物碱有草乌甲素、高乌甲素和3乙酰乌头碱等。
1实验部分
1.1仪器、材料及试剂
红外光谱用NicoletFTIR2005XV仪测定,KBr压片;质谱用VGAutospel3000型和FiniganLCQ型质谱仪测定;核磁共振谱用BruderACE200和VarianUNION400/54核磁共振仪测定,溶剂为CDCl3,TMS为内标;旋光用PerkinPolarimeter341型旋光光度仪测定;熔点仪用WRXTS显示热差分析仪测定(未校正)。
薄层层析所用吸附剂为硅胶G以5‰CMC水溶液或5‰NaOH,5‰CMC溶液调板,105℃活化1小时使用,用改良的Dragendorff’s试剂和20%的硫酸乙醇显色;常压柱层析所用硅胶均为青岛海洋化工厂制品(10-40μ)。
氯仿为工业氯仿重蒸,石油醚,丙酮,甲醇均为分析纯,成都化学试剂厂生产。
原植物2008年8月采自西藏那曲,由西藏食品药品检验所格桑索朗副主任药师鉴定。
1.2总生物碱的提取
5公斤毛果甘青乌头全草粉末,采用0.05mol·L-1的盐酸75L进行渗漉至渗漉液无生物碱反应。
将渗漉液用浓氨水碱化PH大于10,再用乙酸乙酯(30L)萃取3次。
合并乙酸乙酯层,减压蒸馏,回收溶剂得总生物碱浸膏30.1克。
1.3单体生物碱的分离
总生物碱30克,以CHCl3溶解,溶于CHCl3的部分抽干得生物碱Ⅰ(18.7g),不溶于CHCl3的部分用甲醇溶解抽干得生物碱Ⅱ(12.0g)。
生物碱Ⅰ,以氯仿溶解,经胶柱层析(硅胶300g,环己烷-丙酮/5:
1→1:
1)梯度洗脱。
洗脱液经TLC检查合并分为AD四个部分。
A部分(3.1g)经硅胶柱层析(硅胶20g,环己烷-丙酮/5:
1)洗脱得单体6benzoylheteratisine(15mg)、A1和A2。
A1经反复胶柱层析(环己烷-丙酮4:
1)洗脱得6acetylheteratisine(36mg),A2经胶柱层析(环己烷-丙酮/5:
1→3:
1)梯度洗脱得6benzoylheteratisine(0.24g)和heteratisine(1.09g)。
B部分(2.9g)经胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯/3:
1→1.5:
1)梯度洗脱得B1、B2和B3。
B1部分经胶柱层析先用(环己烷-丙酮/3:
1)为洗脱剂再用(氯仿-甲醇-二乙胺/99:
1:
1)为洗脱剂洗脱得dehydroheteratisine(0.82g)。
同样洗脱剂处理B2部分,得dehydroheteratisine(19mg)。
B3经硅胶柱层析(环己烷-丙酮/4:
1)洗脱得dihydrogeyerine(10mg)。
C部分(2.6g)经胶柱层析(环己烷-丙酮/4:
1→3:
1)梯度洗脱得C1和C2。
C1部分经胶柱层析(环己烷-丙酮/5:
1→3:
1)梯度洗脱得tongolinine(27mg)以及tongolinine和venulol的混合物,经反复胶柱层析(环己烷-丙酮/4:
1)得venulol(18mg),C2部分经胶柱层析(氯仿-甲醇-二乙胺/98:
1:
0.5)得heterophylline(11mg),以及heterophylline和dihydrogeyerine混合物,经制备薄层层析得dihydrogeyerine(8mg)。
D部分(2.0g)经反复胶柱层析(氯仿-甲醇/95:
5)得heteratisine(14mg)和guanfubaseZ(14mg)。
生物碱Ⅱ(12.0g)未分离得到单体生物碱。
1.4单体生物碱的结构测定
毛果甘青乌头(Aconitumtanguticum(Maxim.)Stapfvar.trichocarpumHand.-Mazz)是甘青乌头的一个变种,属于乌头属(Aconitum)植物[5-6]。
对其化学成分的研究尚属于首次。
从西藏那曲产的毛果甘青乌头中分得10个化合物。
其中有六个内酯型C19二萜生物碱、以及四个C20二萜生物碱[7],并应用IR、MS、HRMS、1HNMR、13CNMR、DEPT等光谱法和化学法鉴定了其化合物的结构为:
6acetylheteratisine
(1)[8],6benzoylheteratisine
(2)[8],dehydroheteratisine(3)[9],heteratisine(4)[8],heterophyllidine(5)[10],heterophylline(6)[10],dihydrogeyerine(7)[11],guanfubaseZ(8)[12],tongolinine(9)[13],andvenulol(10)[14]。
(见表1)
1.4.16acetylheteratisine
(1)
白色无定形粉末;ESIMSm/z:
434[M+H]+,分子式为C24H35NO6;1HNMR(400MHz,CDCl3),?
?
:
0.87(3H,s,H318),1.04(3H,t,J=7.2Hz,NCH2CH3),2.08(3H,s,OAc),3.15(1H,t,J=9.6Hz),3.23(1H,d,J=8.2Hz),3.32(3H,s,OCH3),3.58(1H,d,J=3.6Hz,H17)3.82(1H,d,J=12.4Hz),4.74(1H,m),5.32(1H,d,J=6.8Hz),13CNMR数据见表2。
将该化合物的理化性质和波谱数据与文献[8]对照,可确定其结构。
表1甘青乌头中生物碱结构及分子式
白色无定形粉末,ESIMSm/z:
496[M+H]+,分子式为C29H37NO6;1HNMR(400MHz,CDCl3)?
?
:
0.92(3H,s,H318),1.07(3H,t,J=7.2Hz,NCH2CH3),3.29(3H,s,OCH3),3.48(1H,q,J=10.4Hz),7.48(2H,t,J=7.2Hz,Bz),7.56(1H,m,Bz),8.09(2H,m,J=4Hz,Bz)13CNMR数据见表2。
将该化合物的理化性质和波谱数据与文献[8]对照,可确定其结构。
1.4.3dehydroheteratisine(3)
白色无定形粉末;ESIMSm/z:
390[M+H]+,分子式为C22H31NO5;1HNMR(400MHz,CDCl3),?
?
:
0.93(3H,s,H318),1.08(3H,t,J=6.8Hz,NCH2CH3),3.18(1H,d,J=13.2Hz),3.32(3H,s,OCH3),3.74(1H,s,H17),3.88(1H,s),4.78(1H,t,J=8Hz),13CNMR数据见表2。
将该化合物的理化性质和波谱数据与文献[9]对照,可确定其结构。
1.4.4heteratisine(4)
白色无定形粉末;ESIMSm/z:
392[M+H]+,分子式为C22H33NO5;1HNMR(400MHz,CDCl3),:
0.98(3H,s,H318),1.04(3H,t,J=6.8Hz,NCH2CH3),3.14(1H,t,J=8Hz),3.27(3H,s,OCH3),3.50(1H,s,H17),4.01(1H,d,J=7.6Hz,H9),4.42(1H,s),4.50(1H,m,H?
6),4.75(1H,m,H13),4.82(1H,s),13CNMR数据见表2。
将该化合物的理化性质和波谱数据与文献[9]对照,可确定其结构。
1.4.5heterophyllidine(5)
白色无定形粉末;ESIMSm/z:
378[M+H]+,分子式为C21H31NO5;1HNMR(400MHz,CDCl3),?
?
:
1.05(3H,s,H318),1.08(3H,t,J=7.2Hz,NCH2CH3),3.39(1H,d,J=1.2Hz,H17),3.79(1H,brs,H9),3.93(1H,d,J=7.2Hz),4.59(1H,d,J=7.6Hz),4.84(1H,s,J=7.2Hz),13CNMR数据见表2。
将该化合物的理化性质和波谱数据与文献[10]对照,可确定其结构。
表2化合物1-5的13CNMR数据(100MH,CDCl3)
白色无定形粉末;ESIMSm/z:
362[M+H]+,分子式为C21H31NO4;1HNMR(400MHz,CDCl3),?
?
:
0.92(3H,s,H318),1.13(3H,t,J=7.2Hz,NCH2CH3),3.30(1H,d,w1/2=3Hz,H17),3.82(1H,d,J=4Hz,H9),4.86(1H,m,H13),13CNMR数据见表3。
将该化合物的理化性质和波谱数据与文献[10]对照,可确定其结构。
1.4.7dihydrogeyerine(7)
白色无定形粉末;ESIMSm/z:
430[M+H]+,分子式为C25H35NO5;1HNMR(400MHz,CDCl3),?
?
:
0.91(3H,t,J=7Hz,H4’),1.19(3H,d,J=7Hz,H5’),1.35(3H,s,H318),1.38-1.58(3H,m),1.59(1H,s),1.99(1H,s),2.09(1H,s),2.93(1H
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- 关 键 词:
- 毛果 乌头 生物碱 成分 提取 鉴定