高中生物选修一《生物技术实践》背记手册doc.docx
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高中生物选修一《生物技术实践》背记手册doc
课题一果酒和果醋的制作
1、发酵:
通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。
2、有氧发酵:
醋酸发酵、谷氨酸发酵;无氧发酵:
酒精、乳酸发酵
3、酵母菌是兼性厌氧异养型微生物,属于真核生物中的真菌。
4、酵母菌的生殖方式:
出芽生殖(主要)、孢子生殖(冬天形成)、二分裂生殖
5、在有氧条件下,酵母菌进行有氧呼吸,大量繁殖。
C6H12O6+6O2→6CO2+6H2O
6、在无氧条件下,酵母菌能进行酒精发酵。
C6H12O6→2C2H5OH+6CO2
7、20℃左右最适宜酵母菌繁殖。
酒精发酵时一般将温度控制在18℃-25℃
8、在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌。
在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色。
在缺氧呈酸性的发酵液中,酵母菌可以生长繁殖,而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。
9、醋酸菌是单细胞细菌(原核生物),代谢类型是异养需氧型,生殖方式为二分裂
10、当氧气、糖源都充足时,醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸;当缺少糖源时,醋酸菌将乙醇变为乙醛,再将乙醛变为醋酸。
C2H5OH+O2→CH3COOH+H2O
11、控制发酵条件的作用:
①醋酸菌对氧气的含量特别敏感,当进行深层发酵时,即使只是短时间中断通入氧气,也会引起醋酸菌死亡。
②醋酸菌最适生长温度为30~35℃,控制好发酵温度,使发酵时间缩短,又减少杂菌污染的机会。
③有两条途径生成醋酸:
直接氧化和以酒精为底物的氧化。
12、实验流程:
挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒(→醋酸发酵→果醋)
应该先冲洗,然后再除去枝梗,以避免除去枝梗时引起葡萄破损,增加被杂菌污染的机会。
13、酒精检验:
果汁发酵后是否有酒精产生,可以用重铬酸钾来检验。
在酸性条件下,重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。
先在试管中加入发酵液2mL,再滴入物质的量浓度为3mol/L的H2SO43滴,振荡混匀,最后滴加的重铬酸钾溶液3滴,振荡试管,观察颜色
14、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的;排气口是在酒精发酵时用来排出二氧化碳的;出料口是用来取样的。
排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连接,其目的是防止空气中微生物的污染。
开口向下的目的是有利于二氧化碳的排出。
使用该装置制酒时,应该关闭充气口;制醋时,应该充气口连接气泵,输入氧气。
15、防止发酵液被污染的措施:
要先冲洗葡萄,再除去枝梗;榨汁机、发酵装置要清洗干净,并进行酒精消毒;每次排气时只需拧松瓶盖,不要完全揭开瓶盖,拧松是为了及时放出CO2气体,防止爆裂、不打开是为了防止杂菌污染。
16、温度是酵母菌生长和发酵的重要条件。
20℃左右最适合酵母菌的繁殖。
因此需要将温度控制在其最适温度范围内。
而醋酸菌是嗜温菌,最适生长温度为30~35℃,因此要将温度控制在30~35℃。
(与细胞内酶的活性有关)
课题二腐乳的制作
1、多种微生物参与了豆腐的发酵,如青霉、酵母、曲霉、毛霉等,其中起主要作用的是毛霉。
毛霉是一种丝状真菌。
代谢类型是异养需氧型。
生殖方式是孢子生殖。
营腐生生活。
2、原理:
毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸;脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。
3、实验流程:
让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制。
豆腐生长的白毛是毛霉的白色菌丝。
严格地说是直立菌丝,在豆腐中还有匍匐菌丝。
腐乳的“皮”是前期发酵时在豆腐表面上生长的菌丝(匍匐菌丝),对人体无害。
它能形成腐乳的“体”,使腐乳成形。
4、酿造腐乳的主要生产工序是将豆腐进行前期发酵(长出毛霉)和后期发酵(密封腌制)。
前期发酵的主要作用:
①创造条件让毛霉生长。
②使毛酶形成菌膜包住豆腐使腐乳成型。
后期发酵主要是酶与微生物协同参与生化反应的过程。
通过各种辅料与酶的作用,生成腐乳的香气。
5、将豆腐切成3cm×3cm×1cm的若干块。
所用豆腐的含水量为70%左右,水分过多则腐乳不易成形。
水分测定方法如下:
精确称取经研钵研磨成糊状的样品5~10g,置于已知重量的蒸发皿中,均匀摊平后,在100~105℃电热干燥箱内干燥4h,取出后置于干燥器内冷却至室温后称重,然后再烘30min,直至所称重量不变为止。
样品水分含量(%)计算公式如下:
(烘干前容器和样品质量—烘干后容器和样品质量)/烘干前样品质量
6、毛霉的生长:
将豆腐块平放在笼屉内,将笼屉中的控制在15~18℃,保持一定湿度。
菌种来源:
①来自空气中的毛霉孢子,②直接接种优良毛霉菌种时间:
5天
7、加盐腌制:
将长满毛霉的豆腐块分层整齐地摆放在瓶中,同时逐层加盐,随着层数的加高而增加盐量,接近瓶口表面的盐要铺厚一些。
加盐腌制的时间约为8天左右。
盐的浓度过低,不足以抑制微生物的生长,可能导致豆腐腐败变质;盐浓度过高会影响腐乳的口味
8、食盐的作用:
①抑制微生物的生长,避免腐败变质②析出水分,是豆腐变硬,在后期制作过程中不易酥烂③调味作用,给腐乳以必要的咸味④浸提毛酶菌丝上的蛋白酶。
9、配制卤汤:
卤汤直接关系到腐乳的色、香、味。
卤汤是由酒及各种香辛料配制而成的。
卤汤中酒的含量一般控制在12%左右。
10、酒的作用:
①防止杂菌污染以防腐②与有机酸结合形成酯,赋予腐乳风味③酒精含量的高低与腐乳后期发酵时间(约6个月)的长短有很大关系,酒精含量越高,对蛋白酶的抑制作用也越大,使腐乳成熟期延长;酒精含量过低,蛋白酶的活性高,加快蛋白质的水解,杂菌繁殖快,豆腐易腐败,难以成块。
11、香辛料的作用:
①调味作用②杀菌防腐作用③参与并促进发酵过程
12、腐乳制作防止杂菌污染:
①用来腌制腐乳的玻璃瓶,洗刷干净后要用沸水消毒。
②装瓶时,操作要迅速小心。
整齐地摆放好豆腐、加入卤汤后,要用胶条将瓶口密封。
③封瓶时,最好将瓶口通过酒精灯的火焰,防止瓶口被污染。
13、制作成功的要求:
色泽基本一致、味道鲜美、咸淡适口、无异味、块形整齐、厚薄均匀、质地细腻、无杂质。
课题三制作泡菜
1、制作泡菜所用微生物是乳酸菌,其代谢类型是异养厌氧型。
在无氧条件下,降糖分解为乳酸。
分裂方式是二分裂。
反应式为:
C6H12O6→2C3H6O3+能量
2、含抗生素牛奶不能生产酸奶的原因是抗生素杀死乳酸菌。
常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌。
乳酸杆菌常用于生产酸奶。
3、亚硝酸盐为白色粉末,易溶于水,在食品生产中用作食品添加剂。
亚硝酸盐为强氧化剂,能够把血液中携带氧的低铁血红蛋白转变为高铁血红蛋白,从而导致缺氧性中毒症状。
膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康,国家规定肉制品中不超过30mg/kg,酱腌菜中不超过20mg/kg,婴儿奶粉中不超过2mg/kg。
亚硝酸盐被吸收后随尿液排出体外,但在适宜pH、温度和一定微生物作用下形成致癌物质亚硝胺。
4、一般在腌制10天后亚硝酸盐含量开始降低,故在10天之后食用最好。
腌制过程中,亚硝酸盐含量先增多,后减少。
5、制作流程:
测定亚硝酸盐含量
选择原料→修整、洗涤、晾晒、切分成条状或片状
→加入调味料装坛→发酵→成品
称取食盐→配制盐水、冷却→泡菜盐水
6、测定亚硝酸盐含量的原理是在盐酸酸化条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后,与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料,与已知浓度的标准显色液目测比较,估算泡菜中亚硝酸盐含量(比色法)。
7、泡菜坛应选用火候好、无裂纹、无砂眼、坛沿深、盖子吻合好的,检查时坛口向上,压入水中,看坛内壁有无渗水现象。
8、清水与盐按4:
1的比例配制好后煮沸冷却。
盐的作用:
调味,抑制微生物生长,所以盐含量过低会造成细菌污染。
煮沸的目的是杀菌,冷却是为了不影响乳酸菌的生命活动。
9、装坛发酵时,将泡菜坛洗净,并用热水洗坛内壁两次。
将经过处理的蔬菜混合均匀,装入泡菜坛内,装至半坛时放入蒜瓣、生姜及其他香辛料,继续装至八成满,再徐徐注入配好的盐水,使盐水没过全部菜料,盖好坛盖。
向坛盖边缘的水槽中注满水。
并注意发酵过程中补充水。
坛沿注满水是为了保证坛内乳酸菌的发酵所需的无氧环境。
10、腌制条件:
温度不能过高、食盐含量不能过低、腌制时间不能过短。
细菌污染大量繁殖后,亚硝酸盐含量增加。
11、泡菜坛形成白膜是由于产膜酵母的繁殖。
酵母菌是兼性厌氧微生物,泡菜发酵液营养丰富,其表面氧气含量也很丰富,适合酵母菌的繁殖。
12、有些蔬菜,含有丰富的硝酸盐。
当这些蔬菜放置过久时发生变质(发黄、腐烂)或者煮熟后存放太久时,蔬菜中的硝酸盐会被微生物还原成亚硝酸盐,危害人体健康。
课题四微生物的实验室培养1
1、培养基:
人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质,是进行微生物培养的物质基础。
2、培养基按照物理性质可分为液体培养基、固体培养基。
在液体培养基中加入凝固剂琼脂(是从红藻中提取的一种多糖,在配制培养基中用作凝固剂)后,制成琼脂固体培养基。
微生物在固体培养基表面生长,可以形成肉眼可见的菌落。
根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。
液体培养基应用于工业或生活生产,固体培养基应用于微生物的分离和鉴定。
2、按照培养基的用途,可将培养基分为选择培养基和鉴别培养基。
选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物生长,促进所需要的微生物的生长。
鉴别培养基是根据微生物的特点,在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的,用以鉴别不同类别的微生物。
3、培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源等。
4、碳源:
能为微生物的代谢提供碳元素的物质。
如CO2、NaHCO3等无机碳源;糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。
异养微生物只能利用有机碳源。
单质碳不能作为碳源。
5、氮源:
能为微生物的代谢提供氮元素的物质。
如N2、NH3、NO3-、NH4+(无机氮源)蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨(有机氮源)等。
只有固氮微生物才能利用N2。
6、培养基还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的要求。
例如,培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素,培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性,培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性,培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件
7、无菌技术:
获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵,要注意以下几个方面:
①对实验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒。
②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。
③为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
8、消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。
消毒方法常用煮沸消毒法,巴氏消毒法(对于一些不耐高温的液体)还有化学药剂(如酒精、氯气、石炭酸等)消毒、紫外线消毒。
灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。
灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。
比较项
理化因素的作用强度
消灭微生物的数量
芽孢和孢子能否被消灭
消毒
较为温和
部分生活状态的微生物
不能
灭菌
强烈
全部微生物
能
灭菌方法:
①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法;②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法,所用器械是干热灭菌箱;③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法,所用器械是高压蒸汽灭菌锅。
④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法,所用器械是紫外灯。
课题四微生物的实验室培养2
9、制作牛肉膏蛋白胨固体培养基
(1)方法步骤:
计算、称量、溶化、(调节PH)、灭菌、倒平板。
(2)倒平板操作的步骤:
①将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上,右手拿装有培养基的锥形瓶,左手拔出棉塞。
②右手拿锥形瓶,将瓶口迅速通过火焰。
③用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶中的培养基(约10~20mL)倒入培养皿,左手立即盖上培养皿的皿盖。
④等待平板冷却凝固,大约需5~10min。
然后将平板倒过来放置,使培养皿盖在下、皿底在上。
要将平板倒置原因:
平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后的培养基表面的湿度也比较高,将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。
10、培养基灭菌后,需要冷却到50℃左右时,才能用来倒平板。
温度确认方法:
可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板了。
使锥形瓶的瓶口通过火焰,通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基。
11、在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板不能用来培养微生物,空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生,因此最好不要用这个平板培养微生物。
12、纯化大肠杆菌
(1)微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。
(2)平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。
将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
在数次划线后培养,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落。
(3)稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。
分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。
(4)用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是:
使聚集在一起的微生物分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个的菌落,以便于纯化菌种。
(5)平板划线法操作步骤:
①将接种环放在火焰上灼烧,直到接种环烧红。
②在火焰旁冷却接种环,并打开棉塞。
③将试管口通过火焰。
④将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。
⑤将试管通过火焰,并塞上棉塞。
⑥左手将皿盖打开一条缝隙,右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内,划三至五条平行线,盖上皿盖。
注意不要划破培养皿。
⑦灼烧接种环,待其冷却后,从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。
重复以上操作,在三、四、五区域内划线。
注意不要将最后一区的划线与第一区相连。
⑧将平板倒置放入培养箱中培养。
课题四微生物的实验室培养3
倒平板平板划线
13、平板划线操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物;每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后,接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便得到菌落。
划线结束后灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。
14、在灼烧接种环之后,要等其冷却后再进行划线原因是:
以免接种环温度太高,杀死菌种
15、在作第二次以及其后的划线操作时,总是从上一次划线的末端开始划线是因为:
划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
16、梯度稀释、涂布平板操作的步骤:
①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。
②取少量菌液,滴加到培养基表面。
③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃尽后,冷却8~10s。
④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。
17、涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。
应从操作的各个细节保证“无菌”。
例如,酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围;等等。
课题四微生物的实验室培养4
18、对于频繁使用的菌种,可以采用临时保藏的方法。
①临时保藏方法:
将菌种接种到试管的固体斜面培养基上,在合适的温度下培养。
当菌落长成后,将试管放入4℃的冰箱中保藏。
以后每3~6个月,都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。
这种方法保存的时间不长,菌种容易被污染或产生变异。
②对于需要长期保存的菌种,可以采用甘油管藏的方法。
在3mL的甘油瓶中,装入1mL甘油后灭菌。
将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中,与甘油充分混匀后,放在-20℃的冷冻箱中保存。
19、确定培养基制作是否合格的方法:
将未接种的培养基在恒温箱中保温1~2天,无菌落生长,说明培养基的制备是成功的,否则需要重新制备。
20、如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致,并符合某菌(例如大肠杆菌)菌落的特点,则说明接种操作是符合要求的;如果培养基上出现了其他菌落,则说明接种过程中,无菌操作还未达到要求,需要分析原因,再次练习。
21、培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同,及时观察记录的同学会发现这一点,并能观察到其他一些细微的变化。
22、酿醋的醋酸菌菌种的来源:
通入的空气中会有一些醋酸菌,
带到发酵液中,大量繁殖,而其他的菌因不适应这种条件而不
用带一层纱布
的瓶子制醋
能繁殖;也可以直接在果酒中加入醋酸菌。
(可以先买一瓶醋,打开
盖暴露于空气中,一段时间后在醋的表面有一层薄膜(实际
是醋酸菌),可以用这层薄膜进行接种,这样可以明显缩短制作
醋的时间。
)
23、腐乳味道鲜美,营养价值较高,原因主要有
(1)大分子分解成小分子,营养物质种类增加;
(2)大分子分解成小分子,易吸收。
24、
25、
有些细菌在一定的条件下,细胞里面形成一个椭圆形的休眠体,叫做芽孢。
芽孢的壁很厚,对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。
例如,有的细菌的芽孢,煮沸3小时以后才死亡。
芽孢又小又轻,可以随风飘散。
当环境适宜(如温度、水分适宜)的时候,芽孢又可以萌发,形成一个细菌.。
26、单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时,就会形成一个肉眼可见的,具有一定形态结构的子细胞群体,叫做菌落。
菌落是鉴定菌种的重要依据。
课题五土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1、尿素是一种重要的农业氮肥,尿素并不能直接被农作物吸收。
只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后,才能被植物利用。
土壤中的细菌之所以能分解尿素,是因为他们能合成脲酶,
2、筛选菌株
(1)实验室中微生物的筛选应用的原理:
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时抑制或阻止其他微生物生长。
DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制(PCR)的技术,此项技术要求使用耐高温(930C)的DNA聚合酶。
因为热泉温度70~800C,淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。
其中的Taq酶就是耐高温的DNA聚合酶
寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求,到相应的环境中去寻找。
(2)在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基,称作选择培养基。
(3)配制选择培养基的依据
根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。
例如,培养基中不加入有机物可以选择培养自养微生物;培养基中不加入氮元素,可以选择培养能固氮的微生物;加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。
3、统计菌落数目
(1)测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。
(2)稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理:
当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活细菌。
为了保证结果准确,一般设置3~5个平板,选择菌落数在30~300的平板进行计数,并取平均值。
统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,原因是当2个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。
因此,统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。
4、设置对照
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响,提高实验结果的可信度。
对照实验是指除了被测试的条件以外,其他条件都相同的实验,其作用是比照试验组,排除任何其他可能原因的干扰,证明确实是所测试的条件引起相应的结果。
5、实验设计
实验设计包括实验方案,所需仪器、材料、用具和药品,具体的实施步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。
(1)土壤取样:
同其他生物环境相比,土壤中的微生物,数量最大,种类最多。
在富含有机质的土壤表层,有更多的微生物生长。
从富含有机物、潮湿、pH≈7的土壤中取样。
铲去表层土,在距地表约3~8cm的土壤层取样。
(2)样品的稀释:
样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目。
在实际操作中,通常选用一定稀释范围的样品液进行培养,以保证获得菌落数在30~300之间、适于计数的平板。
由于土壤中各类微生物的数量(单位:
株/kg)是不同的,所以稀释倍数也不同。
例如在干旱土壤中的上层样本中:
好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万,放线菌数约为477万,霉菌数约为23.1万。
测定土壤中细菌的数量,一般选用104105106
测定放线菌的数量,一般选用103104105
测定真菌的数量,一般选用102103104
(3)微生物的培养与观察
不同种类的微生物,往往需要不同的培养温度和培养时间。
细菌30~37℃1~2天
放线菌25~28℃5~7天
霉菌25~28℃3~4天
每隔24小时统计一次菌落数目,选取菌落数目稳定时的记录作为结果,这样可以防止因培养时间不足而导致一楼菌落的数目。
一般来说,在一定的培养条件下(相同的培养基、唯独及培养时间),同种微生物表现出稳定的菌落特征。
形状、大小、隆起程度、颜色
6、培养基选择分解尿素的微生物的原理:
培养基的唯一氮源为尿素,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,以尿素作为氮源。
缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素,缺乏氮源而不能生长发育繁殖,而受到抑制,所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。
在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目,因此,牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照,用来判断选择培养基是否起到了选择作用。
通过对照实验,若培养物有杂菌污染,菌落数偏高;若培养物混入其他氮源,则菌落形态多样,菌落数偏高,难以选择出分解尿素的微生物。
7、在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。
培养某种细菌后,如果PH升高,指示剂将变红,说明该细菌能够分解尿素。
8、测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后,将滤膜放到伊红-美蓝培养基上培养,大肠杆菌菌落呈现黑色,通过记算得出水样中大肠杆菌的数量。
9、本实验无菌操作应该注意事项:
①取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。
②应在火焰旁称取土壤。
在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中,塞好棉塞。
③在稀释土壤溶液的过程中,每一步都要在火焰旁操作。
10、从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落:
统计某一稀释度下平板上的菌落数,最好能统计3个平板,计算出平板菌落数的平均值。
每克样品中的菌落数=(C/V)×M其中,C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml),M代表稀释倍数
课题六分解纤维素的微生物的分离
1、纤维素,一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物,是地球上含量最丰富的多糖类物质。
棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物,木材、作物秸秆等也富含纤维素。
2、纤维素酶是一种复合酶,一般认为它至少包括三种组分,即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶,前两种酶使纤维素分解成纤维二糖,第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。
土壤中某些微生物能够产生纤维素酶,纤维素最终被水解成葡萄糖,为微生物的生长提供营养。
3、筛选方法:
刚果红染色法。
能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选。
刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理:
刚果红是一种染料,它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物,
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