梨不同嫁接组合嫁接愈合过程观察毕业设计论文.docx
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梨不同嫁接组合嫁接愈合过程观察毕业设计论文
青岛农业大学
毕业论文
题目:
梨不同嫁接组合嫁接愈合过程观察
姓名:
学院:
园艺
专业:
园艺
班级:
学号:
指导教师:
2013年6月15日
毕业论文诚信声明
本人声明:
所呈交的毕业论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,论文中引用他人的文献、数据、图表、资料均已作明确标注,论文中的结论和成果为本人独立完成,真实可靠,不包含他人成果及已获得青岛农业大学或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。
与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。
论文作者签名:
日期:
年6月15日
毕业论文版权使用授权书
本毕业论文作者同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。
本人授权青岛农业大学可以将本毕业论文全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本毕业论文。
本人离校后发表或使用该毕业论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时,单位署名为青岛农业大学。
论文作者签名:
日期:
2013年6月15日指导教师签名:
日期:
年月日
梨不同嫁接组合嫁接愈合过程观察
中文摘要:
以山梨/山梨,嘎拉/山梨,用试管苗进行自体和异体微嫁接。
利用电镜对砧穗接合部位愈合情况进行了解剖结构观察。
结果表明:
嫁接5d后,两种嫁接组合的嫁接部位均有隔离层的形成。
嫁接10d山梨自体嫁接的嫁接部位隔离层大部分消失,有愈伤组织形成,嘎拉/山梨的嫁接部位隔离层也有部分消失,有少量的愈伤组织形成。
嫁接18d,两种嫁接组合的接穗砧木间都有环状片层出现,秋子梨自体嫁接的环状片层比异体嫁接出现的多。
关键词:
梨微嫁接电镜解剖结构
Thehealingprocessobservationofthedifferentcombinationsofgraftingpears
StudentmajoringinGardeningWangxiaojing
TutorWangRan
Abstract:
Topyrusussuriensis/pyrusussuriensis,Gala//pyrusussuriensis,weconductedmicrograftingautologousandallogeneicwithplantlets.Then,weobservedthehealingstatusoftherootstockandscionusingtheelectronmicroscopy.Theresultsshowedthattwodifferentcombinationsofgraftingcouldproduceisolationlayerinthegraftingsiteafter5d.Mostoftheisolationlayerdisappearedforautologousgraftafter10d,atthesametime,thecallusappeared.ForGala/Yamanashi,theisolationlayerbegandisappearing,andproducedlittlecallus.After18d,twocombinationsofgraftingproducedsomeannularsheet,andthenumberofannularlamellaeofallogeneicgraftwasmorethanautologousgrafting.
Keywords:
PearMicrograftingElectronmicroscopyAnatomystructure
1.引言:
植物嫁接是植物无性繁殖中的一项常用的技术,广泛应用于园艺植物的生产中。
目前对植物嫁接成活机理的研究主要集中在形态解剖学、生理生化机理等方面,以及嫁接成活相关基因及其表达调控的分子生物学特性的研究。
植物嫁接过程是砧木与接穗愈合的过程,包括了初始黏连、愈伤组织的形成、贯穿砧木和接穗的维管束桥的形成等形态结构变化。
嫁接成活率、嫁接苗枝条生长量等外部形态特征,嫁接愈合过程中内部代谢物质差异、嫁接口内外组织显微结构差异,常作为鉴定嫁接亲和性的指标,但对嫁接部位超微结构差异分析较少。
试管微嫁接是一种在试管内将砧木与接穗进行嫁接的技术,它是植物组织培养与嫁接技术的结合。
自1972年微嫁接被创立以来,该技术被广泛应用于苹果、葡萄、桃等果树的生产与研究中。
与常规的嫁接方法相比,微嫁接具有[1]:
(1)周期短、费用低、占地少、成活率高;
(2)进行微嫁接后,生长条件可以人为控制,提高了有关科学研究的可信度;(3)不受季节的限制和环境的影响,可以在实验室常年进行;(4)有利于进行嫁接亲和力的研究等四方面的优点。
果树微型嫁接的种类有以下几种:
显微茎尖嫁接和自然茎尖嫁接。
其中,显微茎尖嫁接其砧木和接穗均为组培苗,砧段和接穗在解剖镜下进行茎尖嫁接;自然茎尖嫁接,其砧木可在保护地播种生长,接穗是组培条件下脱毒的茎尖或在保护地条件下生长的经过消毒处理的茎尖,在保护地条件下进行茎尖嫁接。
嫁接愈合过程主要经历以下几个阶段:
(1)第一阶段:
隔离层的形成。
当接穗嫁接到砧木上后,在砧木和接穗伤口面的薄壁组织细胞被切碎,原生质产生凝聚现象,由于死细胞的残留物,因而在伤口表面形成一层褐色的坏死组织,它覆盖着伤口所以染色较深,称之为隔离层。
隔离层的出现可密封伤口,具有防止水分蒸发,阻止有机物和离子大量外渗,保护伤口不被异物浸染的作用,起暂时的保护作用。
但是,隔离层太厚也会影响砧与接穗的愈合。
[2]
(2)第二阶段:
愈伤组织的形成。
在隔离层形成同时,伤口周围细胞及形成层细胞旺盛分裂,细胞发生脱分化和保护作用的活的薄壁细胞群,为愈伤组织,靠近染色较深的隔离层内侧为愈伤组织,染色较浅。
[2](3)愈伤组织的分裂及连接。
砧穗愈伤组织数量进一步增加,开始接触,体积比薄壁组织大。
促使砧木与接穗紧密结合,随后相互交错生长,进而抱合,将两者的形成层连接起来。
[2]
陈蕾等[3]以苹果梨、香水梨和山梨种胚培养的组培苗为试材,研究了不同的消毒方法、嫁接方法及生长调节剂等因素对微嫁接的影响,结果表明:
以无根山梨为砧木,以香水梨为接穗的成活率较高;以香水梨为接穗,山梨和香水梨为砧木,带根试管苗嫁接成活率都显著高于无根试管嫁接苗的成活率;添加适宜种类和浓度植物生长调节物质可以有效的提高嫁接成活率,在培养基MS+6BAl.Omg/L+IBAO.3mg/L中嫁接苗的成活率高达86.7%。
曾斌等[4]认为香水梨试管微体嫁接技术,以劈接效果最佳,其嫁接难度最低、成活率最高。
在培养基中附加IBA0.5mg/L时,微嫁接苗的成活率最高,将接穗和砧木用抗氧化剂的混合液作浸渍预处理,则效果不佳。
试验采用三种浓度梯度的抗氧化剂及附加IBA0.5mg/L的混合液对嫁接苗的切口部位进行浸渍预处理之后嫁接培养发现,其对提高嫁接苗成活率的作用不明显,有部分苗木甚至由于切口部位软化,使接穗在砧木上萎蔫而顶部下垂,从而导致嫁接苗在3d之内即枯死。
赵恺等[5]的研究表明:
正常的细胞分裂素浓度和蔗糖含量都可以获得较高的成活率,同时,保留数量和大小合适的叶片有利于提高嫁接成活率。
选取砧木或接穗时,应选取处于最佳状态的继代苗。
因而,试验中一般采用40d的继代组培苗为材料进行嫁接。
成密红等[6]对影响微嫁接成活的因素的研究表明:
嫁接的方式、方法、时间、组培苗苗质、外源激素等均可影响嫁接成活率。
采取先生根后嫁接、嫁接与生根同步、先嫁接后生根、胚实生苗嫁接四种不同方式对苹果试管苗进行微型嫁接,研究结果表明,嫁接和生根同步的方法比较好,虽然嫁接成活率稍低于先嫁接后生根的处理,但其生根质量较好。
先嫁接后生根处理往往在生根前先长出很多愈伤组织,再在愈伤组织上生根,根少而细弱,严重影响移栽成活率。
而先生根后嫁接的,因砧木苗龄长,愈合明显较差,嫁接苗长势也弱,移栽成活率也低。
张金林等[1]对嫁接生理学研究主要限于激素、毒素和营养物质在砧木与接穗间交流3个方面卢善发等[7]的研究也表明,嫁接初期,接穗和砧木间失去共质体联络,随着嫁接面产生隔离层,生长素的极性运输受阻,在维管束切割面附近积累并释放到周围组织,引起嫁接面生长素分布发生变化。
细胞分裂素主要影响结合部愈伤组织中维管束桥的分化和形成层的再生,嫁接接合部木质部汁液中细胞分裂素的浓度随砧木活力的增加而增加。
本试验以山梨/山梨作为亲和嫁接组合,以嘎拉/山梨为不亲和组合,采用试管微嫁接方法,并用电镜解剖观察了梨树嫁接愈合的过程,以期为嫁接的应用和愈合原理提供依据。
2.材料与方法:
2.1材料:
本实验材料来自青岛农业大学果树育种实验室,山梨(pyrusussuriensismaxim)组培苗为砧木,山梨,嘎拉组培苗为接穗。
2.2方法:
2.2.1微嫁接方法:
基本步骤如下:
在无菌条件下,将作为砧木的组培苗去头,留长约1.5cm的茎段,将底部的侧芽用镊子摘除,沿着砧木的顶部斜切,长约0.5cm;选长约1.5cm,粗度与砧木相近的材料为接穗,顶部留1~2片叶子,基部修成楔状,长约0.5cm。
将接穗靠接在砧木上,用塑胶管将接口部位固定住,最后将嫁接好的试管苗嫁接到培养基上进行培养。
图一:
微嫁接的方法
2.2.2电镜样品处理:
分别取嫁接5,10,18d的材料,选取含嫁接面的部位,用干净锋利的双面刀片轻而快速地切成小于0.2cmⅹ0.2cmⅹ0.2cm的小块,放入FAA固定液中,然后真空抽气30分钟,换固定液再抽气30分钟;抽气后经35%、50%、60%、70%、95%、100%、100%各一小时的乙醇脱水,最后过度到叔丁醇中,放4℃固定。
经干燥,镀银后,分别用100倍、200倍、400倍、1000倍、2000倍、5000倍电镜进行观察并照相。
3.结果与分析
山梨自体嫁接后,在组培室条件下能够成活,且愈合较好;而山梨与嘎拉在相同的培养条件下,生长状况欠佳,且愈合较差。
3.1嫁接组合的形态学观察
嫁接5d后,山梨/山梨、嘎拉/山梨的嫁接口表面逐渐产生凝聚现象,在伤口的表面逐渐形成一层厚厚的隔离层,可以起到防止水分蒸发,阻止有机物和离子大量外渗,可起到保护伤口不被细菌侵染的作用,与此同时,砧木接穗开始黏连在一起,但是不牢固。
嫁接10d后,山梨自体嫁接和异体嫁接的嫁接部位隔离层逐渐变薄,愈伤组织已经形成,砧木和接穗逐步愈合。
嫁接18d后,山梨/山梨嫁接组合愈合较紧密,嘎拉/山梨嫁接组合愈合则比较疏松。
图二:
嫁接5d的山梨/山梨、嘎拉/山梨愈合状况
图三:
嫁接10d的山梨/山梨、嘎拉/山梨愈合状况
图四:
嫁接18d山梨/山梨、嘎拉/山梨的愈合状况
3.2不同嫁接组合对嫁接成活率的影响
不同嫁接组合对嫁接成活率的影响
嫁接组合
嫁接株数
成活株数
染菌数
成活率
山梨/山梨
22
19
3
86.4%
嘎拉/山梨
24
20
4
83.3%
表一
由表一可见,不同的嫁接组合对嫁接成活率的影响不同。
山梨自体嫁接的成活率可高达86.4%,而嘎拉/山梨嫁接组合的成活率稍低于自体嫁接的组合,可达83.3%。
3.3电镜观察结果
由图五可见,在嫁接的初期,两种嫁接组合的嫁接面上均变得很粗糙,其中山梨自体嫁接的嫁接面更为粗糙,说明自体嫁接的嫁接口表面形成了较厚的隔离层。
由图六和图七可见,自体嫁接的嫁接组合隔离层逐渐变薄消失,而异体嫁接组合中隔离层也有部分消失,但是与前者相比,隔离层依然较厚,说明异体嫁接组合的愈合状况欠佳。
嘎拉/山梨山梨/山梨
100倍
400倍
1000倍
图五:
嫁接5d的两种嫁接组合的愈合状况在电镜下的观察比较
嘎拉/山梨山梨/山梨
100倍倍
400倍
1000倍
图六:
嫁接10d的两种嫁接组合的愈合状况在电镜下的观察比较
嘎拉/山梨山梨/山梨
100倍
400倍
1000倍
图七:
嫁接18d的两种嫁接组合愈合状况在电镜下的观察比
4.讨论
4.1微嫁接的愈合过程的探究
隔离层出现于所有创伤表面,是创伤后暴露面的一种普遍性反应。
[7]嫁接后,切面细胞表现出强烈的愈伤反应,接穗与砧木的接触面上首先形成隔离层,它由嫁接面上创伤致死的细胞紧靠一起构成。
隔离层的成分通常有强烈还原作用,嫁接初期分布在整个嫁接面上,它的出现可密封伤口,阻止细胞物质外渗,同时防止了病原菌及其他因素对嫁接体的伤害,起暂时的保护作用。
[8]隔离层又是动态变化的,首先山核桃的切口处第1列细胞因切割破损,细胞原生质体降解,仅残留细胞壁和部分原生质。
随后愈伤信号从切面不断向内部细胞传递。
其内2~3列细胞继续逐渐降解、坏死并参与隔离层的形成,创伤致死的细胞残体和嫁接面两侧活细胞的分泌物导致隔离层果胶质等多糖类物质积累,从而使隔离层逐渐增厚。
当嫁接成功后,随着嫁接面两侧愈伤组织细胞分裂增生的机械压力和吸收作用,其隔离层中的内含物分散并逐步消失,隔离层逐渐变薄并被突破最终消失,从而使接穗和砧木间的愈伤组织得以直接接触。
对两种嫁接组合分别于第5、10、18d在100倍、400倍、1000倍的电镜下观察发现:
在嫁接愈合的前期阶段,嘎啦/山梨嫁接组合嫁接面较为光滑,形成隔离层,后来,随着生长天数的不断增加,愈伤组织也随之形成,但数量较少,环状片层出现的也较之较少;对于山梨/山梨自体嫁接来说,嫁接后的5d,在嫁接口部位形成较厚的隔离层,后慢慢变薄,嫁接后的10d左右,形成较多的愈伤组织,环状片层也有少量出现。
而对不同嫁接组合在嫁接后不同时期和不同电镜下比较发现:
不论是在嫁接的前期阶段还是后期阶段,在相同的倍数下,山梨自体嫁接形成的愈伤组织形成的早而多,而山梨和嘎啦异体嫁接形成的愈伤组织和环状片层晚而少。
刘明志(1998)[9]用电镜观察科间离体嫁接细胞相互作用时,发现相互接触的2种异质细胞的质膜、核膜和线粒体膜的消失以及异质细胞壁变薄解体等,因而认为细胞解形后可能发生细胞重建。
对于嫁接后愈合形成阶段的亚细胞结构的变化情况,需要用透色电镜更进一步的观察,具体了解细胞的动态变化。
4.2嫁接组合形成过程中存在的问题
1.嫁接苗插入MS+6-BA1.0+IBA0.3培养基愈合效果不好,嫁接口表面水分很多。
2.嫁接苗接口下扩增出新的不定芽。
3.经分析可能是用作嫁接苗生长的培养基激素配比、嫁接方法影响了嫁接苗的愈合。
需要筛选新的适合培养以秋子梨为砧木的嫁接苗的培养基和嫁接方法。
参考文献
[1]张金林.王锁民.许瑞.曹孜义.植物微嫁接技术的研究及应用
[2]胡艳青.苏媛.韩风叶.苏莉.崔世茂.嫁接黄瓜在愈合过程中的解剖和抗氧化酶活性的变化研究
[3]赵巍巍.陈蕾.曹后男.宗成文.姜淑苓.梨的试管微嫁接技术研究.安徽农业科学.2010,38
(2):
624-626
[4]李疆.张孝霖.张强.史兰花.郭玉成.库尔勒香梨试管微体嫁接技术的研究.新疆农业科学.2006,43
(1):
47-49
[5]赵恺.刘伟.果树组织培养微嫁接技术研究进展.2011
[6]成密红.成鸿飞.果树微型嫁接技术研究进展.2005,
(2):
49-51,63
[7]苏媛.郭金妹.胡彦青.霍秀文.崔世茂.黄瓜嫁接苗愈合过程的解剖观察及过氧化物同工酶分析.浙江农业大学学报.2006-06,37(3):
343-347
[8]丁平海.沙立杰.郗荣庭.核桃苗木枝接愈合过程观察.河北农业大学学报.1986
[9]刘明志.张新海.梨矮砧组培苗微嫁接技术研究.河北农业科学.1998
[10]初庆刚.张长胜.梨树嫁接愈合的解剖观察.莱阳农学院学报.9(4):
256~259,1992
致谢
这篇论文我用了两个多月的时间来完成,期间我边做试验边整理数据以用于论文写作。
在试验和论文写作的过程中,我遇到了很多困难,幸亏有老师和小曼学姐的指点,使我顺利地完成了论文。
在这里,我首先要感谢我的导师—王然老师,在她的悉心教导下,我才可以如此顺利的完成毕业论文的撰写;其次,我还要感谢那些帮助我的学长们,正因为有了你们的帮助,我才可以在如此短暂的时间里,得到我所需要的实验结果。
感谢这篇论文中所涉及到的各位学者,如果没有你们的前期研究,我也将很难如此顺利的完成本论文。
四年的大学生活即将画上一个句号,但是我的人生才刚刚开始,我又将面对一次新的征程。
四年来的求学生涯,在亲友及师长的大力支持下,走的既辛苦又有收获。
在论文即将付梓之际,思绪万千,心情久久不能平静。
我更急切地要把我的敬意献给每一位教过我的老师,尤其是我的指导老师,虽然我不是你最优秀的学生,但我保证我将是你最骄傲的学生。
在跟你相处的日子里,你那严谨治学的精神深深地影响着我,使我受益匪浅,这些教益必将激励着我在人生道路上奋勇向前!
最后,衷心的感谢为评阅本论文而付出时间的所有老师们。
谢谢大家!
由于我的学术水平有限,所写论文难免有不足之处,请各位老师批评指正!
青岛农业大学
毕业论文附件材料
题目:
梨不同嫁接组合嫁接愈合过程的观察
姓名:
王晓静
学院:
园艺
专业:
园艺
班级:
W1102
学号:
H20110126
指导教师:
王然教授
2013年6月25日
青岛农业大学毕业论文立题表
青岛农业大学毕业论文任务书
青岛农业大学毕业论文开题报告
青岛农业大学毕业论文教师指导记录表
毕业论文中期检查表
毕业论文教师评阅表
毕业论文答辩评定表
毕业论文成绩评定及学院答辩委员会意见表
青岛农业大学毕业论文立题表
立题题目
梨不同嫁接组合嫁接愈合过程的观察
题目来源
□来源于生产实际
来源于科研项目□其他
题目性质
□基础研究□应用研究
应用基础研究□其他
题目完成形式
毕业论文□毕业设计
申请立题教师
王然
职称
教授
从事专业
果树学
立题说明:
嫁接是植物无性繁殖中的一项重要技术,植物嫁接是一门使用十分广泛的园艺技术,广泛应用于林木、花卉以及蔬菜的生产。
目前对植物嫁接成活机理的研究主要集中在形态解剖学、生理生化机理等方面,以及嫁接成活相关基因及其表达调控的分子生物学特性的研究。
前人主要是从嫁接成活率、嫁接苗枝条生长量等外部形态特征,嫁接愈合过程中内部代谢物质差异、嫁接口内外组织显微结构差异,但对嫁接部位超微结构差异分析较少。
为了发展我国嫁接基础理论研究,增强对亲和性和非亲和性机理的了解,从而选定此题。
教研室意见
教研室主任签名:
年月日
毕业论文领导工作小组意见:
教学院长签名:
年月日
青岛农业大学毕业论文任务书
论文题目梨不同嫁接组合嫁接愈合过程的观察
要求完成时间2013年6月10日
论文(设计)内容(需明确列出研究的问题):
梨无性系砧木具有较多的优良性状,本研究以山梨试管苗为砧木,分别以山梨、嘎拉试管苗为接穗,进行试管苗自体嫁接和异体嫁接,并利用电镜对砧穗结合部位进行了解剖结构的观察。
通过对嘎拉及山梨的嫁接愈合过程的研究,以期为嫁接的应用和愈合原理提供理论依据。
资料、数据、技术水平等方面的要求查阅文献不少于10篇,重在科学依据;独立完成实验,取得足够的实验数据,实验要有探索性,不能简单重复已有的工作;正文字体、图表格式严格按要求设置;论文应层次分明、数据可靠、文字简炼、说明透彻、推理严谨、立论正确,避免使用文学性质的带感情色彩的非学术性词语;论文中如出现非通用性的新名词、新术语、新概念,应作相应解释。
指导教师签名:
年月日
青岛农业大学
毕业论文开题报告
题目:
梨不同嫁接组合嫁接愈合过程观察
姓名:
王晓静
学院:
园艺
专业:
园艺
班级:
W1102
学号:
H20110126
指导教师:
王然教授
2013年3月5日
说明
一、有关说明
毕业论文题目确定后,学生应尽快征求导师意见,讨论题意与整个毕业论文的工作计划,然后根据课题要求查阅、收集有关资料并编写研究提纲,主要由以下几个部分构成:
1.研究的目的与意义。
应说明此项研究在生产实践上或对某些技术进行改革带来的经济、生态与社会效益。
有的课题过去曾进行过,但缺乏研究,现在可以在理论上做些探讨,说明其对科学发展的意义。
2.国内外同类研究的概况综述。
在广泛查阅有关文献后,对该类课题研究已取得的成就与尚存在的问题进行简要综述,只对本人所承担的课题或设计部分的已有成果与存在问题有条理地进行阐述,并提出自己对一些问题的看法。
3.课题研究的内容。
要具体写出将在哪些方面开展研究,要重点突出。
研究的主要内容应是物所能及、力所能及、能按时完成的,并要考虑与其它同学的互助、合作。
4.研究方法。
科学的研究方法或切合实际的具有新意的设计方法,是获得高质量研究成果或高水平设计成就的关键。
因此,在开始实践前,学生必须熟悉研究方法,以避免蛮干造成返工,或得不到成果,甚至于写不出毕业论文或完不成设计任务。
5.实施计划。
要在研究提纲中按研究内容落实具体时间与地点,有计划地进行工作。
二、注意事项
1.开题报告的撰写完成,意味着毕业论文工作已经开始,学生已对整个毕业论文工作有了周密的思考,是完成毕业论文关键的环节。
在开题报告的编写中指导教师只可提示,不可包办代替。
2.无开题报告者,不准申请答辩。
3.本表要用计算机填写,签字要手写,一式三份,本人、导师、所在学院(要原件)各一份。
4.学生可根据内容的多少调整表格的大小。
一、选题依据(拟开展研究项目的研究目的、意义等)
嫁接在果树品种引进、苗木繁育以及花卉、蔬菜上得到广泛应用。
近些年来,在嫁接亲和性的研究、矮化砧木的选育、高接换头等方面也广泛应用嫁接的方法。
嫁接的方法虽然很多,但其愈合的原理大致是相同的。
同别的作物相比,梨的组织培养研究和基因工程研究还相对薄弱,为更好地开展梨属植物的生理生化、基因工程等研究,作者应用微嫁接的方法,解剖观察了梨树嫁接的愈合过程,以期为嫁接的应用和愈合原理提供理论依据。
二、国内外同类研究或同类设计的概况综述(在充分收集研究主题相关资料的基础上,分析国内外研究现状,提出问题,找到研究主题的切入点,附主要参考文献)
1972年,Murashige等创立了微芽嫁接技术之后,微嫁接技术开始被广泛应用于苹果、柑桔、葡萄等多种果树的研究与生产中;此方法不但可以解决一些木本植物茎尖培养生长缓慢、生根困难的难题,而且可以使复合侵染的病毒得到分离。
有关实生苗微嫁接的研究,中国林科院通过研究核桃实生苗微嫁接报道,以核桃组培苗为接穗,实生苗为砧木,嫁接完成后,培养在适宜条件愈合,成活后移植到田间,嫁接成活率可达80%,在田间的保存率达90%以上。
鉴于此项研究能够成功
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- 关 键 词:
- 不同 嫁接 组合 愈合 过程 观察 毕业设计 论文